◦Để thu sản phẩm,
1.6 Kiểm tr a Thử nghiệm
Sốlượng kháng nguyên Chất lượng kháng nguyên
◦Các test kiểm tra Ag-Ab
◦Các test kiểm tra an toàn
◦Test trênđộng vật
205VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
1.6 Kiểm tra - Thửnghiệm
Sốlượng kháng nguyên
◦Định lượng vi khuẩn/vi nấm/virus
◦Vaccine sống vs. vaccine chết
◦Định lượng và định tính sub-unit (protein/DNA/RNA/PS….)
207VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
209
213VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
1.6 Kiểm tra - Thửnghiệm
Chất lượng kháng nguyên
◦Các test kiểm tra Ag-Ab
◦Agglutination (ngưng kết) vs. Precipitaion (tủa)
◦Hiệu giá kháng thể, Hiệu giá ngưng kết kháng nguyên, Hiệu giá HA, Hieuj giá HI
◦ELISA , Western Blot, Immunofluorescene
◦Thửnghiệm trênđộng vật
215VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
217
221
225VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM PHỐI TRỘN THÀNH PHẦN Thành phần của vaccine ◦Kháng nguyên ◦Tá chất ◦Chất bảo quản ◦Chất phụgia
◦Dưlượng các chất khác trong quá trình tinh chế
227VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Là chất được thêm vào vaccine để kích thích đáp ứng MD ban đầu (innate); tăng hiệu quả của vaccine
Tá chất
Là thành phần của Vaccine – hiệu quả trong việc phân phối các antigen đến tiếp xúc với các tế bào trình diện kháng nguyên
229VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Vaccine tái tổhợp. Kháng nguyên protein tái tổhợp thường thiếuđi:
◦Hầu hết cấu trúc của tác nhân gây bệnh (ví dụ cấu trúc gây kích thích miễn dịch),
◦Khảnăng nhân và sản xuất lượng lớn antigen
◦ Đápứng miễn dịch kémCần có tá chấtđể tăngđápứng miễn dịch
Tá chất
Yêu cầu của tá chất
◦Không tăngđápứng MD gia tăng Ig E
◦Tăng cườngđápứng MD tếbào, dịch thể, và niêm mạcđối với kháng nguyên mục tiêu
231VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Adjuvant Adjuvant class
Components Vaccines (disease)
Alum* (1924) Mineral salts AlPO4 or Al(OH)3 Various MF59 (Novartis; 1997) Oil-in-water emulsion Squalene, Tween 80; Span 85
Fluad(seasonal influenza),
Focetria(pandemic influenza)Aflunov(pre- pandemic influenza) AS03 (GlaxoSmit hKline; 2009) Oil-in-water emulsion Squalene, Tween 80, α- tocopherol Pandremix(pandemic influenza), Prepandrix (pre-pandemic influenza) 233
Một sốtá chấtđược sửdụng trên người
VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Adjuvant Adjuvant class
Components Vaccines (disease)
Virosomes (Berna Biotech; 2000)
Liposomes Lipids, hemagglutinin
Inflexal (seasonal influenza), Epaxal(hepatitis A) AS04*(Gla xoSmithKli ne; 2005) Alum- absorbed TLR4 agonist Aluminium hydroxide, MPL Fendrix(hepatitis B), Cervarix(human papilloma virus) Tá chất Adjuvant Adjuvant class Components CpG 7909, CpG 1018 TLR9 agonist CpG oligonucleotides alone or combined with alum/emulsions Imidazoqui nolines TLR7 and TLR8 agonists Small molecules
PolyI:C TLR3 agonist Double-stranded RNA analogues
235
Một sốtá chấtđangđược thửnghiệm trên người
VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Adjuvant Adjuvant class
Components
Pam3Cys TLR2 agonist Lipopeptide
Flagellin TLR5 agonist Bacterial protein linked to antigen Iscomatrix Combination Saponin, cholesterol,
dipalmitoylphosphatidylcholine AS01 Combination Liposome, MPL, saponin (QS21)
Tá chất
Adjuvant Adjuvant class
Components
AS02 Combination Oil-in-water emulsion, MPL, saponin (QS21)
AF03 Oil-in-water emulsion Squalene, Montane 80, Eumulgin B1 PH CAF01 Combination Liposome, DDA, TDB
IC31 Combination Oligonucleotide, cationic peptides
237
Một sốtá chấtđangđược thửnghiệm trên người
VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Phân loại
◦Theo bản chất
◦Muối kim loại
◦Nhũtương ◦Thành phần từtếbào sinh vật ◦Theo cơchếtácđộng Tá chất Phân loại ◦Theo cơchếtácđộng 239 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM Tá chất
Cơchếcòn nhiềuđiều chưa rõ ràng
◦”Kho” chứa kháng nguyên (tại vị trí tiêm vaccine), giải phóng kháng nguyên chậm
◦Ổnđịnh cấu trúc epitope
◦”Dẫn dụ” tếbào APC
◦Điều hòa sản xuất cytokine
241
Tá chất
Muối vô cơ
◦Aluminum phosphate
◦Aluminum hydroxide
◦Potassium Aluminum Sulfate
◦Calcium phosphate 245 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 247 Tá chất Alum ◦Kích thích chủyếu TH2
◦Không hiệu quảtrong việc kích thích TH1và TC
◦Các nghiên cứu gần đây: Alum có liên quan đến NLRP3 inflammasome trong quá trình gây đáp ứng miễn dịch
Tá chất
Alum – US cấp giấy phép cho phép bổsung tá chất Aluminum vào các vaccine:
◦DPT vaccine
◦Một sốHib vaccine (H. influenzaetype b)
◦Pneumococcal cọnugate vaccine
◦Hepatitis B vaccines; Hepatitis A vaccines
◦HPV vaccine
◦Vaccine bệnh than (Anthrax)
◦Vaccine dại
249VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Alum – Các vaccine không chứa thành phần Aluminum
◦IPV vaccine (inactivated Polio Virus)
◦MMR vaccine (sởi – quai bị- uốn ván)
◦Vaccine thủyđậu
Tá chất
Alum - Tác dụng phụ???
◦Nhôm: Độc tố thần kinh có liên quan đến bệnh Alzheimer và các chứng rối loạn thần kinh khác (evidences?)
◦Macrophagic myofasciitis (MMF) là một bệnh cơ đầu tiênđược xácđịnh trong năm 1993, và có liên quanđến vaccine có chứa tá dược nhôm
251VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Tá chất nhũtương – Oil-based adjuvant
◦Kháng nguyênđược bao bọc bởi lớp dầu
◦Nhiều loại nhũ tương khác nhau: mỡ tự nhiên, dầu khoáng….
Tá chất
Tá chất nhũtương – Oil-based adjuvant
◦Sửdụng loại dầu/chất béo nàođể
◦Tạo ra hỗn hợp w/o hoặc o/w
◦Giọt dầu có kích thước nhỏ d <1µm
253VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Oil-based adjuvant
◦Freund's Complete Adjuvant (1956)
◦MF59 (1997)
Tá chất
Freund
◦Dùng cho vaccine thú y
◦Complete form: Mycobacteria (M.tuberculosis) bất hoạt, khô
◦Incomplete form: không có mycobacteria
255VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Freunds complete adjuvant
◦Đápứng MD mạnh
Tá chất
MF59 (US 10/246,195 (March 2008)
◦4-5% v/v squalene
◦polyoxyethylenesorbitan monooleate and sorbitan trioleate (1%) ◦o/w ◦d <1µm 257 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM Tá chất
MPL (AS04 = APL + Alum)
◦MPL = 3(')-O-deacylated monophosphoryl lipid A
◦Nguồn gốc LPSSalmonella
◦TLR4 agonist
◦Loại bỏphầnđộc tố
◦Giữphần gâyđápứng miễn dịch
259VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tá chất
Tá chất
261
265VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM