1. GIỚI THIỆU CHUNG Kháng thể đa dòng và kháng thể đơn dòng
2.3 Tinh chế kháng thể
Trong kháng huyết thanh thu được, ngoài protein mục tiêu là kháng thể đa dòng (đơn dòng), còn có rất nhiều các tạp chất khác
Tùy theo từng nguồn sản xuất kháng thể khác nhau, tùy theo điều kiện phương thức tinh chếkhác nhau
353VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
2.3 Tinh chếkháng thể
Loại bỏcác tếbào máu
Ly tâm (đối với lượng máu ít)
Quy mô sản xuất lớn????
355VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
2.3 Tinh chếkháng thể
Các phương pháp
Tủa phânđoạn và loại muối
Sắc ký
2.3 Tinh chếkháng thể
Tủa phânđoạn
Dựa vào đặc tính sinh hóa của Ig và các phân tử sinh học khác Sử dụng một số hóa chất khác nhau,điều kiện khác nhauđể tủa, loại bỏtạp chất và thu hồi Ig
357VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
Tủa phânđoạn bị ảnh hưởng nhiều bởi pH, nhiệtđộvà nồngđộmẫu
Hầu hết phương pháp tủa phânđoạn thườngđược dùng trong sx có quy mô lớn
359VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
2.3 Tinh chếkháng thể
Tủa phânđoạn
(NH4)2SO4 :Hiệu quảtrong việc loại bỏcác đại phân tửtạp bao gồm albumin, trasferrin.
Cơ chế tủa protein bằng (NH4)2SO4 ???? (xem lại hóa sinh)
2.3 Tinh chếkháng thể
Tủa phânđoạn
(NH4)2SO4 :bão hòa 45%, over night, 4°C
Thu tủa (Abs)
Kiểm tra hoạt tính kháng thểtrong dịch nổi
361VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
2.3 Tinh chếkháng thể
Tủa phânđoạn
Loại muối :
Thẩm tích
Sắc ký lọc gel
363VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
365VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 2.3 Tinh chếkháng thể Sắc ký ái lực 367 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM
369VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 371 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 371 2.3 Tinh chếkháng thể Sắc ký ái lực Protein G và protein A
373
VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 375
2.3 Tinh chếkháng thể
Sắc ký traođổi ion
0.01M Tris-Cl pH 8.6
377
VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM 379
2.3 Tinh chếkháng thể
Đối với các sản phẩm kháng thể dùng trong điều trị bệnh có nguồn gốc từ động vật, Fc được cắt bỏ. Tùy theo từng quy trình khác nhau mà việc cắt bỏFcđược tiến hànhởtừng côngđoạn khác nhau.
2.3 Tinh chếkháng thể
Đối với các sản phẩm kháng thể dùng trong chẩn đoán hoặc test-kit phát hiện kháng nguyên/kháng thể, đoạn Fc được gắn thêm enzyme HRP, alkaline phosphatase Biotin/Streptavidin Fluorescent dyes Tandem dyes 381 VANHONGCAM.BIO@GMAIL.COM