(Thực hiện tại Phịng Sinh học Thực nghiệm, Viện Hố học các Hợp chất Thiên nhiên, Viện Khoa học và Cơng nghệ Việt Nam)
Xác định hoạt tính kháng ung thư theo phương pháp của Skelan & CS (1990) và Likhiwitayawuid & CS (1993). Phương pháp hiện đang được áp dụng tại Viện nghiên cứu ưng thư Quốc gia của Hoa Kỳ (NCI) và Trường ðại học Dược, ðại học Tổng hợp Illinois, Chicago, Hoa Kỳ.
Phương pháp thực hiện
Dịng tế bào: Hep-G2 (Heptatocellular carcinoma – ung thư gan), Lu (Lung cancer – ung thư phổi), RD (Rhabdosarcoma - ung thư màng tim ). Các dịng tế bào ung thư này
được cung cấp bởi Viện Vệ sinh Dịch tể Trung ương.
Mơi trường nuơi cấy tế bào: DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) hoặc MEME (Minimum Essential Medium with Eagle’s salt) cĩ bổ sung L-glutamine, sodium piruvat, NaHCO3, PSF (Penixillin-Streptomycin sulfate-Fungizone), NAA (Non-Essential Amino acids); 10% BCS (Bovine Calf Serum), Tripsin-EDTA 0.05%, DMSO (Dimethyl Sulfoside), TCA (Trichloro Acetic acid), Tris Base, PBS (Phosphate Buffered Saline); SRB (Sulfo Rhodamine B), acid acetic.
Chất chuẩn chứng dương tính (cĩ khả năng diệt tế bào ung thư): Ellipithine,
Vinblastine hoặc Taxol pha trong DMSO.
Trang 25
Tính kết quả
Giá trị CS: là khả năng sống sĩt của tế bào ở nồng độ nào đĩ của chất thử tính theo % so với chất đối chứng. Dựa vào kết quảđo được của chúng: OD (ngày 0), DMSO 10% và so sánh với giá trị OD khi trộn mẫu để tìm giá trị CS (%) theo cơng thức (2.2):
% ẫ à
à 100% (2.2)
Các mẫu cĩ biểu hiện hoạt tính (CS < 50%) sẽđược chọn ra để thử nghiệm tiếp để tìm giá trị IC50
Giá trị IC50: dùng giá trị CS của 10 thang nồng độ, dựa vào chương trình Table curve theo thang giá trị logarit của đường cong phát triển tế bào và nồng độ chất thử (2.3) để
tính giá trị IC50 .
!"#$% (2.3)
Trang 26
Chương 3:
KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN