- Tủ ấm, 35 0C - Cân - Máy xay - Pipet 1ml và 10ml
- Ống nghiệm các loại - Bình tam giác
B. Môi trường và thuốc thử:
1. Chuẩn bị mẫu:
- Trứng: Loại bỏ các dính bám trên bề mặt vỏ trứng. Khử trùng bằng cồn 70% và dung dịch I/KI. Nhấn chìm trứng trong dung dịch rửa ít nhất 10 giây rồi lấy ra làm khô. Tay đeo găng đập vỡ trứng cho vào túi chuẩn bị mẫu. Trộn mẫu đầu bằng tay cho đến khi lòng trắng và đỏ trộn đều hoàn toàn vào với nhau. Lấy 25 ml mẫu và bổ sung 225 ml canh thang TSB bổ sung sunfat sắt, lắc đều. Ủ ở 350C trong 24h.
- Thịt và các sản phẩm thực phẩm khác: Cân vô trùng 25g mẫu, bổ sung 225ml dung dịch BPW và trộn đều trong 2 phút. Đậy kín và để ở nhiệt độ phòng 24h.
Các phảnứng sinh hóa và huyết thanh học của Salmonella:
Kết quả Tên thử nghiệm /
Cơ chất Dương tính Âm tính
Phản ứng của các
Salmonella
Glucose (TSI) Phần đáy ống có màu vàng Phần đáy ống có màu đỏ + Lysine decarboxylase (LIA) Phần đáy ống có màu tía Phần đáy ống có màu vàng + H2S (TSI và LIA) Ống có màu đen Không có màu đen +
Urease Ống có màu tía Ống có màu vàng -
Canh thang Lysine decarboxylase
Ống có màu tía Ống có màu vàng +
Canh thang dulcitol – đỏ phenol
Ống có màu vàng, có/ không có sinh hơi
Không đổi màu, không sinh hơi
+
Canh thang KCN Có phát triển Không phát triển -
Canh thang Malonate
Ống có màu xanh Không đổi màu -
Thử nghiệm Indole Màu tím trên bề mặt Màu vàng trên bề mặt - Thử nghiệm KN – H
đa giá
Ngưng kết Không ngưng kết +
Thử nghiệm KN – O đa giá
Ngưng kết Không ngưng kết +
Canh thang lactose đỏ phenol
Ống màu vàng, có/ không sinh hơi
Không sinh hơi, không đổi màu
- Canh thang sucrose
đỏ phenol
Ống màu vàng, có/ không sinh hơi
Không sinh hơi, không đổi màu - Thử nghiệm Voges – Proskauer Ống màu hồng đến đỏ
Không đổi màu -
Thử nghiệm đỏ Methyl
Màu đỏ Màu vàng +
Simon citrate Phát triển, ống màu xanh
Không phát triển, không đổi màu
2. Phân lập Salmonella:
- Lắc nhẹ mẫu cấy. Chuyển 0,1ml hỗn hợp mẫu vào 10ml canh thang RV rồi vortex. - Nuôi cấy trên môi trường làm giàu chọn lọc: Nuôi cấy trên RV ở nhiệt độ 420C trong 24h
- Khuấy đều và cấy ria vi khuẩn từ các môi trường RV lên các đĩa XLD, HE, BS. Ủ ở nhiệt độ 350C trong 24h.
- Kiểm tra các đĩa tìm khuẩn lạc nghi ngờ là Salmonella.
Quy trình tóm tắt xác định Salmonella
Bài 12: VIBRIO