3 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2Định tên chủng nấm 485
Chủng 485 được định tên bằng phương pháp đọc và so sánh trình tự gene 28S rRNA với trình tự của các chủng đã được công bố trên GenBank.
DNA của chủng 485 sau khi tách chiết được điện di trên gel 0,8% agarose. DNA tổng số đủ độ tinh sạch để tiến hành PCR (hình 3.3A). Sản phẩm PCR trên gel agarose có một băng với kích thước khoảng 600 bp (hình 3.3B), đúng với kích thước của gene 28S rRNA được khuếch đại bởi cặp mồi NL1-F và NL4-R theo lí thuyết.
Sản phẩm PCR được gắn trực tiếp vào vector pJET1.2 và được biến nạp vào tế bào khả biến E. coli DH5α. Các dòng plasmid tái tổ hợp (hình 3.3C) được lựa chọn và cắt kiểm tra bằng XhoI và XbaI. Sản phẩm cắt trên gel agarose 0,8% cho hai băng DNA, một băng có kích thước khoảng 3000 bp tương ứng với vector pJET1.2, băng còn lại có kích thước khoảng 600 bp tương ứng với đoạn DNA ngoại lai (hình 3.3D).
Hình 3.3.Điện di đồ DNA nhân gene 28S rRNA
DNA tổng số (A); sản phẩm PCR (B): M. Marker, 1. sản phẩm PCR;
Plasmid (C): ĐC. plasmid không mang gene 28S rRNA, P1, P2. plasmid mang gen 28S rRNA; sản phẩm cắt (D): M. Marker, 2. sản phẩm cắt.
Plasmid tái tổ hợp mang gene 28S rRNA mong muốn được tách và tinh sạch
3000 1000 750 500 250 (bp) 600 bp 3000 1000 750 500 250 (bp) 600 bp A B C D 1 M P1 P2 ĐC 2 M
Trình tự gene 28S rRNA của chủng 485 (604 nucleotide, hình 3.4A) có độ tương đồng 99,8% với các chủng L. lecanii trong GenBank (EF026003 và
EF026005) (hình 3.4B). Từ kết quả trên bước đầu có thể kết luận chủng 485 thuộc loài Lecanicillium lecanii.
A
1 GCATATCAAT AAGCGGAGGA AAAGAAACCA ACAGGGATTG CCCCAGTAAC
51 GGCGAGTGAA GCGGCAACAG CTCAAATTTG AAACCTGGCC CTTGGGTCCG
101 AGTTGTAATT TGTAGAGGAT GCTTTTGGCG AGGTGCCTTC CGAGTTCCCT
151 GGAACGGGAC GCCATAGAGG GTGAGAGCCC CGTCTGGTCG GACACCGAGC
201 CTCTGTAAAG CTCCTTCGAC GAGTCGAGTA GTTTGGGAAT GCTGCTCAAA
251 ATGGGAGGTA TATGTCTTCT AAAGCTAAAT ATTGGCCAGA GACCGATAGC
301 GCACAAGTAG AGTGATCGAA AGATGAAAAG CACTTTGAAA AGAGGGTTAA
351 AAAGTACGTG AAATTGTTGA AAGGGAAGCG CCTATGACCA GACTTGGGCC
401 CGGTGAATCA TCCAGCGTTC TCGCTGGTGC ACTTTGCCGG GCACAGGCCA
451 GCATCAGTTT GGCGCGGGGG AAAAAGGCTT TGGGAATGTG GCTCCCTCGG
501 GAGTGTTATA GCCCATTGTG TAATACCCTG CGCCGGACTG AGGTACGCGC
551 ATTGCAAGGA TGCTGGCGTA ATGGTCATCA GCGACCCGTC TTGAAACACG
601 GACC
B
Hình 3.4.Trình tự gene 28S rRNA của chủng 485 (A) và cây phân loại (B) Chủng 485 và các chủng từ GenBank (kèm theo mã số)
EF026004 Lecanicillium fusisporum
HM057107 Verticillium sp. AY312604 Verticillium sp. EF026003 Lecanicillium lecanii
EF026005 Lecanicillium lecanii Lecanicillium sp.485
80 70 60 50 40 30 20 10 0 82,7
3.3Ảnh hưởng của điều kiện môi trường lên sự sinh bào tử của L. lecanii 485 3.3.1 Ảnh hưởng của nguồn cơ chất