CARBON:
Các vi sinh vật được đặc trưng bằng khả năng sử dụng khác nhau nguồn hydrat carbon để làm nguồn năng lượng.
1. Khả năng lên men đường.
Thường sử dụng các loại đường Glucose, Lactose, Galactose, Frutose, Saccharose, Maltose, Rhamnose, và một số rượu như Glycerin, Mannit,…
ØCơ chế:
VSV Các acid +
CO2
Đường Acid pyruvic
Các acid
khơng CO2
Vi sinh vật cĩ các enzyme phân giải các loại đường trên, tạo các acid hữu cơ, làm pH của mơi trường nuơi cấy giảm, và cĩ thể tạo một số chất khí như H2, CO2. pH của mơi trường giảm, làm chỉ thị màu
59
phenol red chuyển từ đỏ sang vàng. Các chất khí sinh ra sẽ tích tụ vào ống Durham, phát hiện được bằng mắt thường.
ØMơi trường:
- Canh dinh dưỡng (NB) bổ sung 1% đường, pH ≈ 7 ( mơi
trường lên men đường).
- Chỉ thị màu phenol red.
- Ống durham.
ØThao tác: cấy VK (E.coli ) vào mơi trường lên men đường, sau
khi ủ ở nhiệt độ 37oC/24h lấy ra đọc kết quả.
ØKết quả:
- Lên men, sinh hơi: Phenol red trong ống mơi trường chuyển
từ đỏ sang vàng, ống Durham cĩ hơi. Ký hiệu: ( +, h ) hoặc ( +, G ).
- Lên men, khơng sinh hơi: Phenol red trong ống mơi trường chuyển từ đỏ sang vàng, ống Durham khơng cĩ hơi. Ký hiệu: (+).
- Khơng lên men: Phenol red vẫn giữ nguyên màu đỏ. Tất
nhiên, ống Durham khơng cĩ hơi. Ký hiệu: (-).
60
Ø Cơ chế: Một số nhĩm đường ruột như E. coli, Salmonella,…
chuyển hĩa glucose thành acid pyruvic.Rồi tiếp tục chuyển hĩa acid pyruvic thành ethanol, acid acetic, acid lactic, acid
succinic. Các acid tạo ra làm pH mơi trường giảm mạnh, pH ≈ 4
– 4,5. Ở pH này methyl red màu đỏ, ngược lại, pH cao hơn thì Methyl red sẽ chuyển sang màu vàng.
Ø Mơi trường và thuốc thử: MT Clark – Lubs pH ≈ 7, thuốc thử Methyl red
Ø Thao tác: Cấy VK E. coli, vào MT Clark – Lubs, ủ
37oC/48h,lấy ra nhỏ 5 – 10 giọt MR, đọc kết quả.
Ø Đọc kết quả:
- Phản ứng Methyl red dương tính: dung dịch Methyl red
trong mơi trường vẫn giữ nguyên màu đỏ. Ký hiệu: MR (+).
- Phản ứng Methyl red âm tính: dd Methyl red trong mơi
trường chuyển từ đỏ sang vàng. Ký hiệu: MR (-).
3. Phản ứng VP ( Voges – Proskauer ).
Ø Cơ chế: Vi sinh vật chuyển hĩa glucose thành acid pyruvic.Rồi
tiếp tục chuyển hĩa acid pyruvic thành acetyl methyl carbinol (
AMC ). AMC tác dụng với α - naphtol trong mơi trường kiềm
tạo thành diacetyl. Diacetyl phản ứng với nhân guanidine (arginine) cĩ trong pepton để cho hợp chất màu hồng đỏ.
+- -
61
Ø Mơi trường và thuốc thử: MT Clark – Lubs pH ≈ 7, thuốc thử
NaOH 40% ( KOH 10%) và α - naphtol 10% trong cồn.
Ø Thao tác: Cấy VK ( Bacillus anthracis, B. cereus ) vào MT
Clark – Lubs, ủ 37oC/24h,lấy ra nhỏ khoảng 10 giọt NaOH
40%, hơ nĩng nhẹ, nhỏ tiếp khoảng 10 – 15 giọt α - naphtol, lắc
đều, để yên 5 – 10 phút. Đọc kết quả.
Ø Đọc kết quả:
-Phản ứng VP dương tính: mơi trường chuyển màu đỏ cam. Ký hiệu: VP(+).
-Phản ứng VP âm tính: mơi trường cĩ màu vàng hoặc màu nâu đất. Ký hiệu: VP(-).
4. Phản ứng tìm khả năng thủy phân tinh bột.
Ø Cơ chế: Vi sinh vật tiết enzym amylase, enzym này khuếch tán
ra xung quanh khĩm, phân giải tinh bột cĩ trong mơi trường thành đường. Khi nhỏ dung dịch thuốc thử Lugol vào, nơi nào trên mơi trường cĩ tinh bột thì Iod tác dụng với tinh bột tạo màu xanh tím. Nếu quanh khĩm VSV khơng cịn tinh bột thì quanh khĩm cĩ vịng trong.
Ø Mơi trường và thuốc thử: Đĩa mơi trường Sabouraud, bổ sung
1% tinh bột, thuốc thử đ Iod 0.02N hay Lugol.
Ø Thao tác: Sau khi đã chuẩn bị xong MT, cấy VSV ( Aspergillus
) theo từng khĩm trên đĩa, ủ 37oC/24 – 48h, lấy ra nhỏ 1 – 2 ml
dd Iod 0.02N hay Lugol, đọc kết quả.
+- -
62
Ø Đọc kết quả:
- Phản ứng dương tính: mơi trường xung quanh nấm khơng
màu, trong suốt. Đĩ là vịng phân giải tinh bột. Nơi khác cĩ màu xanh tím.
- Phản ứng âm tính:tồn bộ mơi trường xung quanh nấm màu
xanh.
Chú ý: vịng phân giải càng lớn, khả năng thủy phân tinh bột của vi sinh vật càng mạnh.