Tốc độ dòng: 0,7ml/phút Nhiệt độ buồng cột: 40o
C Thể tích bơm mẫu: 20 l
Bảng 3: Chương trình dung môi
Thời gian (min) % dung môi pha động 1 % dung môi pha động 2
0 100 0 1 90 10 12 0 100 16 0 100 16,1 100 0 20 100 0 3.1.6. ác định
Bơm lần lượt dung dịch mẫu trắng , dung dịch mẫu thử , dung dịch mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi vào thiết bị sắc kí lỏng khối phổ . Xác định nồng độ của mẫu thử và mẫu kiểm tra hiệu suất thu hồi bằng đường chuẩn. Nếu nồng độ của mẫu thử nằm ngoài đường chuẩn thì điều chỉnh bằng cách pha loãng dung dịch phần mẫu thử (không pha loãng lượng mẫu bơm).
3.1.7. Tính kết quả
Dư lượng từng thuốc trừ sâu X, biểu thị bằng miligam trên kilogam (mg/kg), được tính theo công thức:
100 1 2 0 P m V V V X X E Trong đó:
X0 là nồng độ các dư lượng thuốc BVTV trong mẫu thử tính bằng microgam trên mililit (g/ml);
VE là thể tích phần mẫu thử thu được, tính bằng mililít (ml);
V1 là thể tích dịch chiết thu được tính bằng mililít (ml);
V2 là thể tích dịch chiết được lấy ra để cô cạn tính bằng mililit (ml);
m là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g);
P là độ tinh khiết của chất chuẩn, tính bằng phần trăm (%).
3.2. ác định dƣ lƣợng Methomyl trong thuốc trừ sâu [8] 3.2.1. Nguyên tắc
Hàm lượng methomyl được xác định bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao, với detector tử ngoại (UV). Dùng benzamide làm chất nội chuẩn.
3.2.2. Hóa chất
- Chất chuẩn methomyl, đã biết hàm lượng. - Chất nội chuẩn benzamide, độ tinh khiết 99 %. - Metanol, dùng cho HPLC.
- Axetonitril, dùng cho HPLC. - Chất chuẩn:
+ Dung dịch nội chuẩn, nồng độ 1,2mg/ml: Dùng cân phân tích cân 1,2 g chất nội chuẩn benzamide chính xác tới 0,00001 g vào bình định mức 1000ml thêm 100ml axetonitril hòa tan và định mức tới vạch bằng nước cất.
+ Dung dịch chuẩn làm việc: Dùng cân phân tích cân 0,012 g chất chuẩn methomyl chính xác tới 0,00001 g vào bình định mức 25ml). Dùng pipet thêm chính xác 10ml dung dịch nội chuẩn hòa tan và định mức đến vạch bằng metanol
+ Chất chuẩn bảo quản trong tủ lạnh phải được đưa về nhiệt độ phòng trước khi cân.
- Bình định mức, dung tích 25; 50; 100; 1000ml. - Pipet, dung tích 5; 25ml.
- Xyranh bơm mẫu, dung tích 20l, chia vạch đến 1l. - Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,00001g. - Màng lọc, có cỡ lỗ 0,45m.
- Thiết bị sắc ký lỏng, được trang bị như sau: + Detector tử ngoại (UV).
+ Cột Zorbax ODS C18, có chiều dài 150mm, đường kính 4,6mm hoặc loại tương đương.
+ Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng tay. + Máy tích phân hoặc máy vi tính.
3.2.4. Cách tiến hành
- Chuẩn bị mẫu:
Mẫu cần được làm đồng nhất trước khi cân: đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ thấp cần được làm tan chảy ở nhiệt độ thích hợp; đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều.
- Chuẩn bị dung dịch mẫu thử:
Dùng cân phân tích cân khoảng mẫu thử có chứa khoảng 0,012 g hoạt chất methomyl, chính xác tới 0,00001 g vào bình định mức 25ml. Dùng pipet thêm chính xác 10ml dung dịch nội chuẩn hòa tan và định mức đến vạch bằng metanol.Lọc dung dịch qua mnmàng lọc 0,45 trước khi bơm vào máy.
3.2.5. Điều kiện phân tích
- Pha động: Axetonitril : Nước = 8 : 92 (theo thể tích)
- Bước sóng: 254mm
- Tốc độ dòng: 1ml/min - Lượng mẫu bơm: 10 l - Nhiệt độ cột: 45 oC
3.2.6. ác định
Dùng xylanh bơm dung dịch mẫu chuẩn cho đến khi tỉ số của số đo diện tích của pic mẫu chuẩn và pic nội chuẩn thay đổi không lớn hơn 1%. Sau đó, bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc và dung dịch mẫu thử lặp lại 2 lần (tỷ số của số đo diện tích của pic mẫu chuẩn với pic nội chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 % so với giá trị ban đầu).
3.2.7. Tính kết quả
Hàm lượng hoạt chất methomyl trong mẫu, X, biểu thị bằng phần trăm (%) được tính theo công thức:
P m F m F X m c c m Trong đó:
Fm là giá trị trung bình của tỉ số số đo diện tích của pic mẫu thử với pic nội chuẩn.
Fc là giá trị trung bình của tỉ số số đo diện tích của pic mẫu chuẩn với pic nội chuẩn.
mc là khối lượng mẫu chuẩn, tính bằng gam (g).
3.3. ác định dƣ lƣợng Fenobucarb trong thuốc trừ sâu [9] 3.3.1. Phƣơng pháp sắc k khí.
3.3.1.1 Nguyên tắc
Hàm lượng fenobucarb được xác định bằng phương pháp sắc ký khí, với detector ion hóa ngọn lửa (FID). Dùng benzylbenzoat làm chất nội chuẩn.
3.3.1.2. Hóa chất
- Chất chuẩn fenobucarb, đã biết hàm lượng. - Chất nội chuẩn benzylbenzoate 99 %. - Axeton, dùng cho sắc ký khí.
- Khí nitơ, có độ tinh khiết không nhỏ hơn 99,9 %. - Khí hydro, có độ tinh khiết không nhỏ hơn 99,9 %. - Không khí nén, dùng cho máy sắc ký khí.
- Dung dịch nội chuẩn, nồng độ 3,3mg/ml:Dùng cân phân tích cân 0,33 g chất nội chuẩn benzylbenzoate , chính xác đến 0,0001 g vào bình định mức 100ml hòa tan và định mức đến vạch bằng axeton
- Dung dịch chuẩn làm việc: Dùng cân phân tích cân 0,1 g chất chuẩn fenobucarb, chính xác đến 0,0001 g vào bình định mức 100ml dùng pipet thêm chính xác 10ml dung dịch nội chuẩn, hòa tan và định mức đến vạch bằng axeton.
- Chất chuẩn bảo quản trong tủ lạnh phải được đưa về nhiệt độ phòng trước khi cân.
- Bình định mức, dung tích 10; 50; 100ml. - Pipet, dung tích 1; 10ml.
- Màng lọc, có kích thước lỗ 0,45m.
- Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,0001g. - Máy lắc siêu âm.
- Thiết bị sắc ký khí, được trang bị như sau: + Detector ion hóa ngọn lửa (FID).
+ Injector chia dòng và không chia dòng.
+ Cột mao quản HP-5, có chiều dài 30m, đường kính 0,32mm, chiều dày pha tĩnh 0,25m hoặc loại tương đương.
+ Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng tay. + Máy vi tính hoặc máy tích phân.
3.3.1.4. Cách tiến hành
- Chuẩn bị mẫu thử
Mẫu cần được làm đồng nhất trước khi cân: Đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ thấp cần được làm tan chảy ở nhiệt độ thích hợp, đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều.
- Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Dùng cân phân tích cân mẫu thử có chứa khoảng 0,1 g hoạt chất fenobucarb, chính xác đến 0,0001 g vào bình định mức 100ml , dùng pipet thêm chính xác 10ml dung dịch nội chuẩn , hòa tan và định mức đến vạch bằng axeton. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 trước khi bơm vào máy, nếu cần.
3.3.1.5. Điều kiện phân tích
- Nhiệt độ cột: 185 oC
- Nhiệt độ buồng bơm mẫu: 210 oC - Nhiệt độ detector: 230 oC - Khí mang nitơ: 1,8ml/phút - Khí hydro: 35ml/phút - Khí nén: 280ml/phút - Khí bổ trợ cho detector 40ml/phút - Thể tích bơm mẫu: 1 l - Tỷ lệ chia dòng: 50:1
3.3.1.6. ác định
Bơm dung dịch mẫu chuẩn cho đến khi tỉ số của số đo diện tích của pic mẫu chuẩn và pic nội chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 %. Sau đó, bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc và dung dịch mẫu thử , lặp lại 2 lần (tỷ số của số đo diện tích của pic mẫu chuẩn với pic nội chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 % so với giá trị ban đầu).
3.3.1.7. Tính kết quả
Dư lượng fenobucarb trong mẫu (X) biểu thị bằng phần trăm khối lượng (%) được tính theo công thức:
P m F m F X m c c m Trong đó:
Fm là giá trị trung bình của tỉ số đo diện tích của pic mẫu thử với pic nội chuẩn.
Fc là giá trị trung bình của tỉ số số đo diện tích của pic mẫu chuẩn với pic nội chuẩn.
mc là khối lượng mẫu chuẩn, tính bằng gam (g).
mm là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g).
P là độ tinh khiết của chất chuẩn, tính bằng phần trăm (%).
3.3.2. Phƣơng pháp sắc ký lỏng hiện năng cao 3.3.2.1. Nguyên tắc
Hàm lượng fenobucarb được xác định bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) với detector tử ngoại (UV).
3.3.2.2. Hóa chất
- Acetonitril, dùng cho HPLC.
- Dung dịch chuẩn làm việc: Dùng cân phân tích cân 0,1 g chất chuẩn fenobucarb chính xác đến 0,0001 g vào bình định mức 100ml hòa tan và định mức đến vạch bằng acetonitril
- Chất chuẩn bảo quản trong tủ lạnh phải được đưa về nhiệt độ phòng trước khi cân.
3.3.2.3. Dụng cụ, thiết bị
Thiết bị sắc ký lỏng hiệu năng cao, được trang bị như sau:
+ Cột RP 18, dài 150mm, đường kính 4,6mm, cỡ hạt pha tĩnh 5 hoặc loại tương đương
+ Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng tay.
3.3.2.4. Cách tiến hành
- Chuẩn bị mẫu
Mẫu cần được làm đồng nhất trước khi cân: đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ lạnh cần được làm tan chảy ở nhiệt độ thích hợp.
- Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Dùng cân phân tích cân mẫu thử có chứa khoảng 0,1 g hoạt chất fenobucarb, chính xác đến 0,0001 g vào bình định mức 100ml hòa tan và định mức đến vạch bằng acetonitril. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45 trước khi bơm vào máy (nếu cần).
3.3.2.5. Điều kiện phân tích
Pha động: H2O:ACN = 30 :70 (theo thể tích). Bước sóng: 230nm.
Tốc độ dòng: 1ml/phút. Thể tích vòng bơm: 20l.
3.3.2.6. ác định
Bơm dung dịch chuẩn làm việc cho đến khi số đo diện tích của pic mẫu chuẩn thay đổi không lớn hơn 1 %. Sau đó, bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc và dung dịch mẫu thử, lặp lại 2 lần (số đo diện tích của pic mẫu chuẩn thay đổi không lớn hơn 1% so với giá trị ban đầu).
3.3.2.7. Tính kết quả
Dư lượng Fenobucarb trong mẫu (X) biểu thị bằng phần trăm khối lượng (%) được tính theo công thức:
P m S m S X m c c m
Trong đó: Sm là số đo diện tích của pic mẫu thử;
Sc là số đo diện tích của pic mẫu chuẩn;
mc là khối lượng mẫu chuẩn, tính bằng gam (g);
mm là khối lượng mẫu thử, tính bằng gam (g);
3.4. ác định dƣ lƣợng Carbaryl trong thuốc trừ sâu[10] 3.4.1. Nguyên tắc
Xác định bằng HPLC, với detector tử ngoại UV.
3.4.2. Hóa chất
- Axetonitril, dùng cho HPLC
- Chất chuẩn: Carbaryl đã biết hàm lượng chính xác.
- Dung dịch chuẩn làm việc: Dùng cân phân tích, cân khoảng 0,01g chất chuẩn Carbaryl vào bình định mức 20ml, thêm vào 10ml Axetonitril, lắc siêu âm trong 10p, để nguội định mức tới vạch bằng Axetonitril.
- Chất chuẩn bảo quản trong tủ lạnh được đưa về nhiệt độ phòng trước khi cân.
3.4.2. Dụng cụ, thiết bị
Sử dụng các dụng cụ thiết bị thông thường của phóng thí nghiệm cụ thể như sau: - Bình định mức 20ml, 50ml.
- Pipet 5m, 10ml.
- Xylanh bơm mẫu dung tích 50l.
- Cân phân tích, có độ chính xác đến 0,00001g. - Màng lọc 0,45m.
- Máy lắc siêu âm.
- Thiết bị sắc kí lỏng, được trang bị như sau: + Detector tử ngoại (UV).
+ Cột sắc kí Lichrospher 100RP 18,5m có chiều dài 250mm, đường kính 4,0mm hoặc loại tương đương.
+ Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm bằng tay. + Máy tích phân kế hoặc máy vi tính.
3.4.3. Chuẩn bị mẫu
Mẫu được làm đồng nhất trước khi cân: đối với mẫu dạng lỏng lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ thấp cần được làm tan chảy ở nhiệt độ thích hợp, đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử: dùng cân phân tích cân mẫu thử có chứa 0,01g hoạt chất carbaryl vào bình định, định mức 20ml, thêm 10ml acetonitrile,lắc siêu âm trong 10 phút, để nguội và định mức tới vạch bằng acetonitrile. Lọc dung dịch qua mạng lọc 0,45m, trước khi bơm vào máy.
3.4.4. Điều kiện phân tích
Tốc độ dòng: 1ml/phút. Lượng bơm mẫu: 10l. Nhiệt độ cột: 45oC.
3.4.5. ác định
Dùng xylanh bơm dung dịch mẫu chuẩn cho đến khi tỉ số đo diện tích của pic mẫu chuẩn thay đổi không lớn hơn 1%. Sau đó bơm lần lượt dung dịch chuẩn làm việc và dung dịch mẫu thử,lặp lại 2 lần( tỷ số của số đo diện tích của pic mẫu chuẩn thay đổi không lớn hơn 1% so với giá trị ban đầu).
3.4.6. Tính toán kết quả
Dư lượng Carbaryl trong mẫu (X) biểu thị bằng phần trăm khối lượng (%) được tính theo công thức: m c c m S m X P S m Trong đó:
Sm là giá trị trung bình của số đo diện tích pic của mẫu thử. Sc: giá trị trung bình của số đo diện tích của pic mẫu thử. mc là khối lượng mẫu chuẩn (g).
mm: là khối lượng mẫu thử (g). P: độ tinh khiết của chất chuẩn (%).
3.5 ác định dƣ lƣợng Carbosulfan trong thuốc trừ sâu b ng phƣơng pháp sắc hí [11]
3.5.1. Ngu n tắc
Hàm lượng carbosulfan được xác định bằng phương pháp sắc ký khí, với detector ion hóa ngọn lửa (FID). Dùng triphenylphosphate làm chất nội chuẩn. Kết quả được tính dựa trên sự so sánh giữa tỷ số số đó diện tích pic mẫu thử với pic nội chuẩn và tỷ số số đo diện tích pic mẫu chuẩn với pic nội chuẩn.
3.5.2. Hóa chất
- Chất chuẩn carbosulfan, đã biết hàm lượng. - Chất nội chuẩn triphenylphosphate, 98%. - Axeton
- Khí nitơ, có độ tinh khiết không nhỏ hơn 99,9%. - Khí hydro, có độ tinh khiết không nhỏ hơn 99,9%. - Không khí nén, dùng cho máy sắc ký khí.
- Dung dịch nội chuẩn, nồng độ 8,8mg/ml:
+ Dùng cân phân tích cân 0,88g chất nội chuẩn triphenylphosphate, chính xác đến 0,0001g vào bình định mức và định mức đến vạch bằng axeton
Dung dịch chuẩn làm việc:
+ Dùng cân phân tích cân 0,01g chất chuẩn carbosulfan chính xác đến 0,00001g vào bình định mức 10ml, dùng pipet thêm chính xác 1ml dung dịch nội chuẩn (hòa tan và định mưucs đến vạch bằng axeton.
Chất chuẩn bảo quản trong tủ lạnh phải được đưa về nhiệt độ phòng trước khi cân.
3.5.3. Dụng cụ thiết bị
Sử dụng các thiết bị, dung cụ của phòng thử nghiệm thông thường và cụ thể như sau:
- Bình định mức, dung tích 10; 100ml. - Pipet, dung tích 1; 10ml.
- Màng lọc, có kích thước lỗ 0,45µm.
- Cân phân tích, có thể cân chính xác đến 0,00001g. - Máy lắc siêu âm.
- Thiết bị sắc ký khí, được trang bị như sau: + Detector ion hóa ngọn lửa (FID);
+ Injector chia dòng và không chia dòng;
+ Cột mao quản HP-5, có chiều dài 30m, đường kính 0,32mm, chiều dày pha tĩnh 0,25µm hoặc loại tương đương;
+ Bộ bơm mẫu tự động hoặc bơm mẫu bằng tay; + Máy vi tính hoặc máy tích phân.
3.5.4. Cách tiến hành
- Chuẩn bị mẫu thử nghiệm
Mẫu cần được làm đồng nhất trước khi cân, đối với mẫu dạng lỏng phải lắc đều, nếu bị đông đặc do nhiệt độ tan chảy thấp cần được làm ở nhiệt độ phòng đối với mẫu dạng bột, hạt phải được trộn đều.
- Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Dùng cần phân tích cân mẫu thử có chưa khoảng 0,01g hoạt chất Carbosulfan, chính xác đến 0,00001g vào bình định mức 10ml, dùng pipet thêm chính xác 1ml dung dịch nội chuẩn, hòa tan và định mức đến vạch bằng axeton. Lọc dung dịch qua màng lọc 0,45µm trước khi bơm vào máy (nếu cần).
3.5.5. Điều iện phân tích
- Nhiệt độ detector: 270oC - Nhiệt độ cột: 250oC - Khí mang nitơ: 2,5ml/phút - Khí hydro: 35ml/phút - Khí nén: 280ml/phút - Khí bổ trợ cho detector: 20ml/phút - Thể tích bơm mẫu: 1µl - Tỷ lệ chia dòng: 50 : 1.