3. NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.3.Phương pháp làm tiêu bản.
- Mẫu tiến hành thu thập theo phương pháp phết kắnh ựược nhuộm bằng 2 loại hóa chất là Hematoxylin và AgNO3.
Nhuộm bằng Hematoxylin: dùng ựể nhuộm KST ựơn bào (Protozoa) như: Apiosoma, Hemiophays. Thao tác nhuộm như sau:
- Làm trùng no nước: ngâm trùng qua các thang cồn có nồng ựộ giảm dần 700, 500 ,300,100. Mỗi thang ựể 10 Ờ 20 phút.
- Cho bào tử trùng vào dung dịch Feric sulfattamoni 700 bộ tiêm mao trùng (Ciliata ) ngâm 2 Ờ 4h, bộ tiên mao trùng (Flagellata) ngâm 6 Ờ 10h. Sau ựó rửa nước cất 2 lần, mỗi lần 5 phút.
- Cho vào dung dịch Hematoxylin 2 Ờ 10 phút ựể trùng bắt màu. Rồi rửa qua nước 30Ỗ Ờ 1h.
- Nếu trùng bắt màu quá ựậm có thể làm nhạt màu bằng cách rửa qua dung dịch Feric sulfattamoni 4%, khi nào thấy trùng có màu xanh tro hoặc màu xanh tắm thì lấy ra. Rửa qua nước chảy nhẹ 1 Ờ 2h.
- Làm mất nước bằng cách cho qua các thang cồn có nồng ựộ cao dần: 100, 300, 500, 700, 900, 1000, cồn Ờ Xylen (1:1).
- Cuối cùng gắn tiêu bản bằng Bom Canada.
Nhuộm bằng AgNO3 2%: dùng ựể nhuộm ký sinh trùng thuộc giống Trichodina, Tripartiella, Paratrichodina. Ưu ựiểm của phương pháp này là vòng răng trên cơ thể thấy rõ, thuận lợi cho quá trình phân loại. Các bước thực hiện:
- Lấy lamen có trùng xếp một lượt vào ựĩa lồng có dung dịch AgNO3 2%, chú ý lamen ngập trong dung dịch AgNO3 2% .
- Lấy mẫu ra rửa bằng nước cất nhiều lần. Tiếp tục ngâm mẫu trong nước, ngập 1 - 1,5cm, ựem phơi nắng 30 Ờ 60 phút tùy theo cường ựộ ánh sáng mặt trời. - Rửa lại bằng nước cất nhiều lần, dựng nghiêng cho khô.
- Gắn tiêu bản bằng bom Canada, tránh ựể có bọt. - Cuối cùng chọn tiêu bản ựẹp lưu lại.