3. NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.2.Thứ tự tiến hành nghiên cứu
Thu mẫu:
Cá dùng ựể nghiên cứu là cá sống hoặc cá vừa mới chết, chưa bị khô nhớt, ắt bị tổn thương do ựánh bắt. (kỹ thuật giải phẫu cá)
Trên thân, vây có những nốt, nó là bao nang chứa ựầy các bào tử của trùng bào tử có sợi tơ. Dùng dùi giải phẫu nhẹ nhàng lấy bào nang ra ựể vào lam kắnh sạch, thêm 1-2 giọt nước sạch cho bào nang khỏi khô. đĩa petri ựậy lại cho khỏi bụi.
đưa các cung mang lên lam kắnh, xem cẩn thận bằng mắt thường, sau ựó xem dưới kắnh hiển vi. Nếu phát hiện thấy bào nang thì lấy chúng ra ựể lên lam kắnh sạch khác, thêm 1-2 giọt nước và thực hiện các bước như trên. Trên mang, da, vây thường gặp các bào nang Myxobolus, Thelohanellus, Henneguya...Sau ựó nghiên cứu tất cả các cơ quan bên trong, nếu phát hiện các bào nang thì phải lấy riêng. đặc biệt thận trọng xem xét nước tiểu và túi mật. Trong túi mật thường gặp Chloromyxum, túi nước tiểu thường gặp
Trình tự nghiên cứu ựược thể hiện ở hình.3.1
Hình 3.1: Sơ ựồ tiến hành nghiên cứu ký sinh trùng
Nghiên cứu KST trên cá chép
Thu mẫu cá ngẫu nhiên 50 Ờ 100/ựợt 0con/ựợt Nghiên cứu KST ký sinh trên cá chép đo kắch thước và khối lượng của cá
Tìm hiểu sơ bộ về môi trường, ựiều kiện nuôi tại
nơi thu mẫu
Kiểm tra, phát hiện Thu thập, cố ựịnh, bảo quản Làm tiêu bản KST đo, ựếm và phân loại KST So sánh thành phần loài, mức ựộ nhiễm ở cá chép giống Xác ựịnh thành phần giống loài KST trên cá chép Kết luận và ựề xuất ý kiến đề xuất biện pháp phòng trị bệnh cho cá chép
Nghiên cứu ký sinh trùng sống:
Túi mật, túi nước tiểu ựược ựể riêng trên tấm kắnh lớn (hoặc lam kắnh), dùng kéo cắt túi. Chất chứa trong các cơ quan này ựược dàn mỏng rồi ựậy lamen và xem dưới kắnh hiển vi từ ựộ phóng ựại nhỏ ựến lớn. Cạo nhớt phắa trong thành túi mật và túi nước tiểu ựưa lên lam kắnh ựậy lamen, xem dưới kắnh hiển vi, có thể gặp phôi amip và các bào tử. Bào tử rất nhỏ, bởi vậy chỉ có thể xem chúng dưới kắnh hiển 10x100. Khi phát hiện bào tử, vẽ cấu tạo, ựo chiều dài, rộng, dày và các thông số khác.
Chuẩn bị tiêu bản cố ựịnh:
Các lam kắnh thu mẫu dùng dùi giải phẫu chọc thủng bào nang, các bào tử
sẽ lan toả ra xung quanh. để tiêu bản khô trong không khắ có thể nhuộm AgNO3 hoặc gắn tiêu bản luôn. Dùng Gelatin-Glycerin (có thể cho thêm xanh Malachit ựể chống nấm phát triển) ựể làm tiêu bản. Khi lam kắnh vừa khô, dùng dao nhỏ lấy một mẩu Gelatin- Glycerin vừa ựủ, hơ nóng ựưa lamen ra khỏi lam kắnh ựể ngửa sang một bên. Khi lamen nóng và chảy (chú ý không ựể sôi) trên ngọn ựèn cồn. Cẩn thận ựậy lamen lên, dùng dùi giải phẫu ựè nhẹ ựẩy hết bọt khắ ra ngoài. Nếu làm tiêu bản tốt thì Gelatin-Glycerin vừa dàn ựủ lamen. để cho tiêu bản khỏi bị khô, xung quanh lamen bôi một lớp sơn dầu, Parafin hoặc nhựa bom Canada.
Phân loại ký sinh trùng:
Xem xét, ựo, vẽ cấu tạo bào tử của từng loài. Dựa vào bảng phân loại trùng bào tử có sợi tơ ựể phân loại ựến loài và ghi chép. Chú ý ựến cấu tạo bào tử, vỏ, vị trắ xắp xếp của các cực nang, mỏm giữa cực nang.