C vs vật: mua tại ngân hàng AT gồm Vi khuẩn Gr (+): Bacillus subtilis AT 2
3.3.3.Chiết tách alginate
A: Acid Alginic F: Fucoidan
3.3.3.Chiết tách alginate
Cân 25,00g bột rong nâu Sargassum swartzii, thêm 800ml formaldehyde 2%, (Ďể loại bỏ các hợp chất phenol có trong rong tránh Ďược sản phẩm biến màu nâu hay thay Ďổi Ďộ nhớt trong quá trình chiết bằng kiềm), khuấy Ďều, duy trì hỗn hợp trong vòng 24h tại nhiệt Ďộ phòng, thỉnh thoảng khuấy trộn. Tiếp Ďó lọc Ďể loại bỏ chất béo và chất màu trong dịch lọc, thu hồi bã, rửa sạch lại bã bằng nước cất và cho thêm 800 ml HCl 0,2 M vào bã trên, Ďể trong vòng 24h.
Trong rong nâu, acid alginic tồn tại chủ yếu ở dạng muối canxi của acid alginic, một phần nhỏ ở dạng muối của magie, kali và natri. Cho HCl và khoảng thời gian qua Ďêm là Ďủ Ďể chuyển hóa các muối canxi và magie không tan thành natri alginate tan. Hơn nữa, việc xử lý bằng acid HCl còn có tác dụng chuyển hóa một số hợp chất dạng cacbohydrate có trong thành phần tế bào rong như fucoidan, laminaran thành dạng hòa tan tách ra khỏi rong trước khi chiết bằng kiềm. Ngoài ra HCl Ďủ mạnh Ďể loại bỏ các hợp chất phenol tan trong acid.
Sau Ďó lọc và rửa sạch lại bã bằng nước cất. Cho 200ml dung dịch Na2CO3 2% vào bã, Ďun sôi trong khoảng thời gian 3h. Vẩy li tâm trong khoảng thời gian 30 phút, thu Ďược 10,12g cặn chiết. Thêm 30ml C2H5OH 95% vào, khuấy kỹ, lọc và thu Ďược bột natri alginate thô. Rửa lại bột thô này bằng acetone (100ml x 2 lần), sấy ở 650
C. Hòa tan natri alginate thô thu Ďược này trong 100ml nước cất, cho thêm 300 ml C2H5OH 95% Ďể kết tinh lại. Thẩm tách qua màng MWCO (100 kDa) Ďể thu Ďược bột natri alginate có kích thước nhỏ hơn 100 kDa, sấy ở 650C thu Ďược 8,65g natri alginate sạch (34,60%).
Quy trình chiết tách và tinh chế alginate từ rong nâu Ďược tóm tắt ở Sơ Ďồ 3.4.
Sơ đồ 3.4. Quy trì ết t v t ế t
Hiệu suất chiết tách alginate theo phương pháp này là 34,60% tính theo trọng lượng mẫu rong khô.
Rong khô (25g)
Bã lọc
Kết tinh Bã Lọc
Natri alginate thô Muối natri thô (10,12g) Dịch lọc Kết tinh lại 1. Sấy 65oC 2. H2O cất (100ml) Sấy 65oC 1. H2O 2. HCl 0,2M (800ml, 24h) 1. H2O cất 2. Na2CO3 2% (100oC, 3h). HCHO 2% (800ml) 24h, t0phòng Dịch lọc Vẩy C2H5OH 95% (30ml) CH3COCH3 (100ml x 2) Natri alginate sạch (8,65g) 3. C2H5OH 95% (300ml)
Sau khi khảo sát các quy trình chiết tách, chúng tôi chọn các sản phẩm của quy trình chiết tách fucoidan theo Sơ Ďồ 3.3 và alginate theo Sơ Ďồ 3.4 bởi vì phương pháp chiết tách này cho hiệu suất chiết tách và Ďộ sạch của sản phẩm cùng khá cao.
Một trong các yếu tố quan trọng trong việc Ďánh giá quy trình chiết tách và tinh chế polysaccharide là mức Ďộ phân bố trọng lượng phân tử. Chúng tôi Ďã sử dụng phương pháp sắc ký thẩm thấu gel GPC (Gel Permeation Chromatography) Ďể kiểm tra mức Ďộ phân bố trọng lượng phân tử của fucoidan và alginate thu Ďược. Hình 3.2 và Hình 3.3. là sắc ký Ďồ GPC của fucoidan từ rong nâu Sargassum henslowianum và alginate từ rong nâu Sargassum swartzii.
Hì 3.3. Sắ đồ GPC t t r u S r ssu sw rtz
Qua 2 sắc Ďồ ta thấy fucoidan và alginate thu Ďược có mức Ďộ phân bố trọng lượng phân tử rất hẹp.