ựúc bằng parafin, nhuộm Hematoxilin Ờ Eosin (HE)
Ớ Cố ựịnh bệnh phẩm: Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10%
(chú ý bệnh phẩm phải ngập trong formol), tối thiểu là 1 tuần.
Ớ Vùi bệnh phẩm: Tiến hành lần lượt các bước sau:
- Rửa formol: Lấy tổ chức ra khỏi bình formol 10%, cắt thành các miếng có chiều dài, rộng khoảng 0,5-1cm, cho vào khuôn ựúc bằng nhựa. đem rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong 24h ựể rửa sạch formol.
- Sau ựó ựưa mẫu vào hệ thống máy chuyển ựúc mẫu tự ựộng trong 18 h lấy mẫu ra và tiến hành ựúc block.
Hệ thống máy chuyển ựúc mẫu tự ựộng gồm 12 bình:
Bình Hóa chất Thời gian (giờ)
1 Cồn 600C 1: 00 2 Cồn 600C 1: 00 3 Cồn 700C 1: 30 4 Cồn 800C 1: 30 5 Cồn 960C 1: 30 6 Cồn 1000C 1: 30 7 Cồn 1000C 1: 30 8 Cồn 1000C 1: 30 9 Xylen I 1: 30 10 Xylen II 1: 30 11 Parafin I 2: 00 12 Parafin II 2: 00
Ớ đúc Block: đặt miếng bệnh phẩm nằm theo ý muốn vào chắnh giữa
khuôn block ựổ nhanh parafin lỏng vào block. đặt khuôn ựã ựúc sang bàn lạnh của máy làm nguội block. để nguội từ từ ựến khi ựông cứng và chắc là ựược.
Ớ Cắt mảnh: Cắt bằng máy Microtom HM 325, với bề dày mảnh cắt
khoảng 3- 5ộm, sao cho mảnh cắt không rách nát, phần tổ chức phải còn nguyên vẹn.
Ớ Tãi mảnh: Sau khi cắt ựược, dùng panh kẹp mảnh cắt ựặt vào nước lạnh
sau ựó dùng phiến kắnh sạch, trong, không xước hớt mảnh cắt cho sang nước ấm 48oC rồi lấy kắnh vớt mảnh cắt sao cho vị trắ mảnh cắt ở 1/3 phiến kắnh. Sau ựó ựể tủ ấm 37oC ựến khi bệnh phẩm khô (thường là trên 24 giờ).
Ớ Nhuộm tiêu bản:
Bước 1: Khử parafin: Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ: Xylen I: 30 phút
Xylen II: 30 phút Xylen III: 30 phút
Bước 2: Khử Xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ: Cồn 1000C: 2 lần (mỗi lần 1 phút)
Cồn 950C: 1 lần Cồn 700C: 1 lần Cồn 500C: 1 lần
Bước 3: Khử cồn: Cho dưới vòi nước chảy 5 phút (chú ý: mở nước chảy nhỏ ựể không rửa trôi bệnh phẩm).
Bước 4: Nhuộm Hematoxylin (nhuộm nhân tế bào).
Khi nhấc tiêu bản ra khỏi nước lau khô xung quanh tiêu bản, ngâm tiêu bản ngập trong dung dịch thuốc nhuộm Hematoxylin. để trong
khoảng 5-20 phút (tùy thuộc thuốc nhuộm và loại tổ chức ựược nhuộm), sau ựó rửa nước. đem lau sạch nước xung quanh tiêu bản và ựể khô. Kiểm tra màu sắc, tắnh chất bắt màu thuốc nhuộm trên kắnh hiển vi (nếu thấy nhân tế bào bắt màu xanh tắm là ựược).
Bước 5: Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương)
Ngâm tiêu bản ngập trong dung dịch thuốc nhuộm Eosin (khoảng 5-10 phút tùy theo thực tế màu Eosin). Sau ựó rửa nước chảy 5 phút cho hết Eosin thừa.
Bước 6: Khử nước, ngâm tiêu bản qua 3 lọ cồn tuyệt ựối, mỗi lọ 1 phút. Bước 7: Tẩy cồn, làm trong tiêu bản, ngâm tiêu bản ựi qua 3 lọ xylen, mỗi lọ 3 phút.
Bước 8: Gắn Baume canada.
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vừa nhúng vào xylen trong tủ ấm. đẩy hết bọt khắ ra ngoài.
Ớ đánh giá kết quả
đem soi tiêu bản nhuộm dưới kắnh hiển vi quang học vật kắnh 10. Nếu thấy nhân bắt màu xanh tắm, bào tương bắt màu ựỏ tươi, tiêu bản trong sáng, không có nước, không có bọt khắ là ựược.