(µg/liều) Liều tiêm/chuột (ml/liều) Đường tiêm Kháng nguyên 0,75µg 0,2 Dưới da KN + Al(OH)3 0,75µg 0,2 Dưới da KN + CS 0,75µg 0,2 Dưới da
KN + nano chitosan 0,75µg 0,2 Dưới da
2.3.3.2.Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng vacxin cúm A/H1N1 ñến ñáp ứng miễn dịch trên chuột nhắt trắng
Gây miễn dịch hai mũi vacxin trên chuột nhắt trắng theo các công thức (bảng 2.2), mũi thứ hai sau mũi thứ nhất 20 ngày. Mỗi nhóm gồm 30 chuột. Thu mẫu ở ngày 10, 20, 30 sau khi tiêm mũi ñầu. Các chỉ tiêu theo dõi là % ñáp ứng miễn dịch, kháng thể ñặc hiệu HIU.
Bảng 2.2: Công thức vacxin tiêm chủng chuột với hàm lượng kháng nguyên khác nhau Nhóm vacxin Hàm lượng kháng nguyên (µg/liều) Liều tiêm/chuột (ml/liều) Đường tiêm 0,375µg KN + nano CS 0,375 0,2 dưới da 0,75µg KN + nano CS 0,75 0,2 dưới da 1,5µg KN + nano CS 1,5 0,2 dưới da
2.3.3.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của khối lượng phân tử của tá chất nano chitosan ñến ñáp ứng miễn dịch trên chuột nhắt trắng
Gây miễn dịch hai mũi vacxin trên chuột nhắt trắng theo các công thức (bảng 2.3), mũi thứ hai sau mũi thứ nhất 20 ngày, mỗi nhóm gồm 30 chuột. Thu mẫu ở ngày 10, 20, 30 sau khi tiêm mũi ñầu. Các chỉ tiêu theo dõi là % ñáp ứng miễn dịch, kháng thể ñặc hiệu HIU.
Bảng 2.3: Công thức vacxin tiêm chủng chuột với tá chất nano chitosan có khối lượng phân tử khác nhau.
Nhóm vacxin Hàm lượng KN (µg/liều)
Liều tiêm (ml/liều)
Đường tiêm
KN + nano CS 20 kDa 0,75 0,2 Tiêm dưới da KN + nano CS 30 kDa 0,75 0,2 Tiêm dưới da KN + nano CS 300 kDa 0,75 0,2 Tiêm dưới da
2.3.3.4. Nghiên cứu thời gian bảo toàn hoạt tính của kháng nguyên cúm A/H1N1 sau khi hấp phụ trên hạt nano chitosan.
Cho vacxin hấp phụ với tá chất nano chitosan, bảo quản ở nhiệt ñộ: 2- 80C. Chủng vacxin cho chuột sau 15, 45, 90, 135 ngày sau hấp phụ.
Liều kháng nguyên ñược sử dụng ñể gây miễn dịch trên chuột là 0,75µg/1 liều/1chuột. Liều miễn dịch trên chuột là 0.2 ml/1chuột, trong ñó có chứa 0.75µg kháng nguyên và 0.21mg hạt nano chitosan. Lấy máu chuột, thu và xử lí huyết thanh, xác ñịnh % ñáp ứng miễn dịch, trị số HIU ở các ngày 10, 20, 30.
2.3.4. Phương pháp kiểm tra ñáp ứng miễn dịch trên chuột
2.3.4.1. Quy trình gây miễn dịch
- Gây miễn dịch hai mũi vacxin, mũi thứ hai sau mũi thứ nhất 20 ngày. - Liều tiêm: 0,2ml vacxin có tá chất/mũi
- Đường tiêm: tiêm dưới da bắp ñùi - Số lượng chuột: 27 con/lô
2.3.4..2. Quy trình lấy máu chuột
Tiến hành lấy màu chuột theo sơ ñồ sau:
M1: mũi tiêm vacxin lần 1 M2: mũi tiêm vacxin lần 2
M1 huộ M2 0 10 20 30