Theo phương phâp năy thì một đơn vị hoạt độ amylaza được biểu diễn bằng lượng enzyme có khả năng xúc tâc thuỷ phđn 1 gam tinh bột tan trong 1 giờ ở điều kiện nhiệt độ 30oC vă pH = 4,7 – 4,8. Đồng thời phải đảm bảo tỉ lệ giữa enzyme vă đối chất sao cho sau 10 phút lượng tinh bột được thuỷ phđn văo khoảng 20 – 70%.
9.2.1. Hoâ chất
Dung dịch amylaza, dịch tinh bột vă dung dịch đệm chuẩn bị tương tự như trong phương phâp so sânh mău bằng mắt thường. Còn dung dịch iốt được chuẩn bị như sau:
Cđn 0,25 gam I2 vă KI cho văo cốc 100ml. Sau đó cho từ từ 5 - 10ml nước cất, khuấy cho tan hểt rồi chuyển toăn bộ văo bình định mức 100ml vă thím nước cất tới ngấn bình. Dung dịch cần được bảo quản trong bình nđu vă đặt ở chỗ tối.
Trước khi lăm thí nghiệm ta chuẩn bị dung dịch iốt phđn tích bằng câch lấy 2ml dung dịch iốt cơ bản pha thănh 100ml. Dung dịch năy khi đo trín mây so mău quang điện phải có mật độ quang học văo khoảng D=0,160±0,01 ( với chiều dăy chất lỏng 1cm, kính lọc sâng có bước sóng λ=453milimicron).
Dung dịch HCL 0,1N
9.2.2. Tiến hănh
Lấy 2 ống nghiệm (cỡ 18×180) khô, rồi cho văo mỗi ống 10ml dung dịch tinh bột 1%. Đặt cả 2 ống văo mây điều nhiệt vă giữ nhiệt độ t = 30oC khoảng 10 phút. Sau đó dùng pipĩt cho văo ống nghiệm (1) 5ml nước cất (mẫu kiếm chứng), ống nghiệm (2) 5ml dung dịch amylaza (mẫu thí nghiệm). Khuấy nhanh vă giữ đúng 10 phút. Tiếp theo lấy 1ml của mẩu kiểm chứng cho văo ống nghiệm(3) chứa sẵn 10ml HCl 0,1N. Tương tự cũng lấy 1ml của mẫu thí nghiệm cho văo ống nghiệm (4) chứa
sẵn 10ml dung dịch HCl 0,1N. Mục đích lă để đình chỉ hoạt động của enzyme, giữ thời gian phản ứng 10 phút. Khuấy đều dung dịch trong ống nghiệm (3) vă(4) rồi từ đó mỗi ống 1ml cho văo câc ống nghiệm (5) vă(6) đê chứa sẵn 100ml dung dịch iốt phđn tích. Lắc đều rồi đem đo mật độ quang học trín mây so sânh mău với chiều dăy lớp chất lỏng lă 1cm vă kính lọc sóng có bước song λ=656 milimicron.
Mật độ quang học của dung dịch kiểm chứng ứng với một lượng tinh bột ban đầu, còn mật độ quang học của dung dịch thí nghiệm sẽ ứng với lượng tinh bột còn lại sau khi thuỷ phđn. Hiệu số mật độ quang học giữa dung dịch kiểm chứng vă dung dịch thí nghiệm sẽ tương ứng với lượng tinh bột đê chịu tâc dụng của amylaza.