- Tư liệu của quỏ trỡnh sắc ký
3.1.3.Khảo sỏt chọn điều kiện phỏt hiện chất phõn tớch.
b. Tốc độ giấy
3.1.3.Khảo sỏt chọn điều kiện phỏt hiện chất phõn tớch.
Để phỏt hiện và xỏc định chất phõn tớch, chỳng tụi đó chọn:
Loại detecter UV-VIS (vựng tử ngoại ). Đõy là loại detec ter cú độ nhậy tương đối cao và thụng dụng trong cỏc phũng thớ ngiệm. Vỡ thế trước hết phải chọn băng hấp phụ phự hợp với vựng nồng độ chất ngiờn cứu.
Việc chọn băng hấp thụ là chọn độ nhậy cho phộp đo. Băng hấp thụ cú chỉ số càng nhỏ thỡ độ nhậy càng cao.Do nồng độ của cỏc clophenol trong nươc cú nồng độ thấp nờn chỳng tụi đó chọn băng hấp thụ 0.02Aufs .Cho việc ghi tớn hiệu hấp thụ của chất ngiờn cứu .Với giỏ trị này thỡ khoảng nồng độ cú thể phỏt hiện và đo của cỏc clophenol nằm trong vựng từ nano gam(ng) đến microgam (àg). Tiếp đú là việc xỏc định bước súng hấp thụ cực đại của chất ngiờn cứu. Đối với cỏc clophenol cỏc tỏc giả nh Jitka Frộbortovỏ[21] . Đó chỉ ra cỏc vựng chỳng cú hấp thụ quang tốt. Vỡ thế chỳng tụi đó khảo sỏt ở cỏc bước súng từ 220--230nm , xem tại vựng súng nào chất phõn tớch cú độ hấp thụ và tỏch ra khỏi nhau tốt nhất .
Điều kiện khảo sỏt:
Cột sắc kớ pha ngược : hypersil - ODS,5àm.
Dung mụi pha động : metanol/acetolnitril/H2O (49:48: 3 theo v/v) Vũng bơm mẫu : 20àl Tốc độ pha động : 1,4ml/ phút Băng hấp thụ : 0.05Aufs Vũng bơm mẫu : 20àl thế ghi của pớc sắc kớ : 20mV Tố c độ giấy : 2mm/phỳt
Dung dịch khảo sỏt : Hỗn hợp cỏc clophenol 1ppm (từ mono cho đến penta).
Cỏc kết quả nghiờn cứu được trỡnh bày trong bảng 3.1 và hỡnh 3.2.
Bảng 3.1 Quan hệ giữa chiều cao pic sắc ký và cỏc bước súng hấp thụ
λ( nm) 225(nm ) 220 (nm) 230 (nm) 2. clophenol (mm 57mm 38,5mm 26mm 2.4 .diclophenol 31mm 21mm 16mm 2. 4.6 triclophenol 63mm 42mm 28,5mm 2.4.4.6tetraclophenol 13,5mm 17,5mm 12,5mm Penta.clophenol 10mm 7mm 4.5mm
Theo định luật lamber-beer thỡ độ hấp thụ quang của chất phõn tớch phụ thuộc vào nồng độ chất phõn tớch trong điều kiện đó chọn , độ hấp thụ được thể hiện ở chiều cao pic ( H) . Nếu trong cựng một điều kiện đó chọn thỡ ở
bước súng (λ) nào cú pic cao nhất thỡ tại đú chất phõn tớch sẽ cú độ hấp thụ tốt nhất.
Tại mỗi bước súng chỳng tụi khảo sỏt 2 lần để tỡm độ lặp lạivà lấy giỏ trị trung bỡnh của chiều cao pic. Nhỡn vào kết quả bảng 3.1 và hỡnh 3.2, ở bước súng λ = 225nm của detector. Chỳng tụi cú 5 pic cõn đối, cú thể tỏch hoàn toàn và xỏc định đồng thời cả 5 chất. Cũng tại bước súng đú pớc sắc kớ của 5 chất cú chiều cao cao nhất. Vỡ thế xột trờn 2 mặt là chiều cao pic và khả năng tỏch, chỳng tụi chọn bước súng này λ = 225nm cho cỏc nghiờn cứu tiếp theo.
hỡnh 3.1 Quan hệ giữa bước súng và chiều cao pic sắc kớ
Pha động:metanol/H :metanol/H20/ Acetolnitril (49:48:3 V/V) Tốc độ pha động:1.4ml/phỳt 1.4ml/phút
Mẫu hỗn hợp: 1:2clophenol; 3: 2.4Diclophenol; 2clophenol; 3: 2.4Diclophenol;
2: 2.4.6Triclophenol; 4: 2.3.4.6Tetraclophenol: 4: 2.3.4.6Tetraclophenol:
5: Pentaclophenol