- Tư liệu của quỏ trỡnh sắc ký
Kết quả nghiờn cứu và bàn luận
3.1. Chọn cỏc thụng số cho mỏy hplc
3.1.1.Chọn van bơm mẫu
Van bơm mẫu là một dụng cụ để đưa một lương mẫu chớnh xỏc mẫu phõn tớch vào cột sắc ký thụng qua vũng mẫu . Vũng mẫu là một yếu tố xỏc định cú thể thay đổi được thay đổi được, tuỳ theo lượng mẫu ta cần bơm. . Vũng mẫu cũng là nguyờn nhõn gõy ra sự doóng pớc.
Núi chung sự doóng pớc sắc ký ngoài cỏc yếu tố và điều kiện tỏch trong cột sắc ký quyết định cũn cú cỏc yếu tố khỏc cộng thờm vào nh van bơm mẫu, detecter hệ thống ống dẫn... Nờn độ rộng tổng cộng của pic sắc kớ sẽ do cỏc yếu tố này gõy nờn . Cỏc yếu tố này là những yếu tố khụng mong muốn . Nếu loại trừ những yếu tố này hay chọn được điều kiện thớch hợp để cho nó khụng bị thay đổi và cú giỏ trị nhỏ nhất , như vậy chúng ta mới cú hiệu suất tỏch tốt , và pớc sắc ký mới phản ỏnh đỳng quỏ trỡnh tỏch trong cột sắc kớ. Theo tỏc giả Phạm Luận [3] . thành phần này khụng được chiếm hơn 10% trong tổng độ rộng của pớc sắc kớ.
Với một thể tớch mẩu nhất định nhỏ hơn thể tớch v0, thỡ khi mẫu được bơm vào cột tăng thỡ chiều cao của pic sắc kớ cũng tăng một cỏch tuyến tớnh. Nếu lượng mẫu nạp vào cột vs lớn hơn so với v0 thỡ chiều cao của pớc khụng tăng tuyến tớnh với lượng mẫu mà độ rộng của pic tăng nhanh (doóng pớc).
Trong thực tế phõn tớch HPLC, người ta thường bơm một lượng mẫu nhỏ hơn v0.
Để cú hiệu quả tỏch cao nhất hệ van 6 chiều ngày nay cú thể bơm mẫu trực tiếp bằng micro-xylanh theo thể tớch mẫu mong muốn , khi lượng mẫu nhỏ hơn kớch thước vũng mẫu thỡ van này cũng rầt thuận tiện vỡ ta khụng phải pha loóng mẫu.
Trong phần thưc ngiệm này, chúng tụi chọn loại van bơm mẫu 6 chiều và vũng mẫu loại 20àl, để nạp mẫu vào cột tỏch với thể tớch mẫu chớnh xỏc là 20àl cho mỗi lần sắc kớ.
3.1.2 . Điều kiờn ghi pic sắc kớ.
Để ghi nhận và theo dừi kết quả của sự tỏch sắc kớ , chỳng tụi đó dựng mỏy tự ghi để ghi lại sắc đồ tỏch ở dạng cỏc pic sắc kớ , vỡ thế cần phải chọn 2 yếu tố sau: