Thử nghiệm đối chứng với cơng cụ đánh dấu nhập khẩu, cộng điều kiện giữ nguyên quy trình chuẩn bị mẫu phân tích, tiêu chuẩn lựa chọn các mẫu thử nghiệm:
- Các dịch mẫu phải tương thích với dịch sinh lý của vắc-xin sởi.
- Các mẫu cĩ phát quang màu xanh blue hoặc màu xanh vàng, để phù hợp với màu huỳnh quang xanh blue của cơng cụ đánh dấu nhập khẩu. Các cơng cụ này phải cĩ khả năng phân tán và ổn định trong mơi trường đệm cĩ chỉ số pH hợp lý và tương thích được với mơi trường sinh lý của vắc-xin sởi.
Quy trình chuẩn bị mẫu phân tích miễn dịch huỳnh quang nhận dạng vắcxin
Tế bào Vero nuơi từ 3 đến 4 ngày được tách ra khỏi chai Roux bằng cách
(ethylendiamintetraacetic acide - EDTA) 0,05%, duy trì tế bào ở dạng hỗn dịch
với nồng đợ cuối cùng là 200.000 tế bào/ml. Nhỏ 3ml hỗn dịch tế bào này vào lỡ
(cĩ đặt miếng lĩt nhỏ vào từng lỗ ) (ở đĩa loại 96 lỡ), ủ đĩa này ở 37oC trong 3
ngày trong buờng ủ có CO 2 5%. Hồi chỉnh bằng cách b ổ sung 5,5ml nước cất
vào lọ chứa vắc - xin sởi, sau đó trộn đều. Dung dịch vắc - xin được pha lỗng
10 lần bằng mơi trườ ng Eagle cơ bản tới thiểu (Minimum Essential Medium
Eagle - MEM) với huyết thanh bị 5%, ủ 0,1ml dung di ̣ch thu được ở 37o
C trong
60 phút. Bở sung th êm 3ml huyết thanh bị 2% MEM vào từng lỡ và ủ ở điều
kiê ̣n nhiê ̣t đơ ̣ 37oC và 5% CO2 trong 3 ngày. Lấy miếng lót ra kh ỏi lỡ và đặt nó
vào ống thủng đáy, khử hoạt tính của tế bào bằng axeton trong 15 phút, sau đĩ
rửa 3 lần bằng dung dịch nướ c muới đệm phosphat (phosphate buffered saline -
PBS). Làm khơ miếng lót và đ ặt nó lên phiến thủy tinh. Nhỏ vâ ̣t liê ̣u nano chứa
đất hiếm phát quang gắn IgG lên các tế bào trên bề mặt miếng lót. Đậy nắp và ủ
ở nhiê ̣t đơ ̣ 37o
C trong 60 phút. Tiếp theo, xử lý thêm 3 lần bằng PBS. Làm khơ miếng lót, sau đĩ quan sát hình ảnh bằng kính hiển vi huỳnh quang nhằm nhận dạng virút.[34]
Quy trình chuẩn bị này phù hợp với quy trình chuẩn bị mẫu đã cĩ sẵn ở Trung tâm Polyvac khi dùng cơng cụ đánh dấu nhập khẩu của Hoa Kỳ và Nhật Bản.