Kết quả thu được cho thấy, khâc với trường hợp sử dụng lectin sam đê tinh chế trong thí nghiệm trước, igG từ huyết thanh người mắc bệnh lupus ban đó khi liín kết với lectin sam ở đang thô, có độ hấp phụ quang trung bình cao hơn hỉi.1 (tăng khoảng 30%) so với IgC từ huyết thanh bình thường. Ảnh chụp bản thử xĩt nghiệm trín hình 8 đê minh họa cho kết quă năy: câc mđu huyết thanh bệnh (phăn 2) có cường độ mău lớn hơn so với câc mẫu huyết thanh bình thường (phẩn I ).
Như vậy lectin sam thô có khả năng nhạn biết IgG trong huyết thanh bệnh tốt hơn (có thể lă những dạng IgG khâc, đặc trưng cho loại bệnh năy) so với leclin đê tinh chế. Kít quả năy m ở ra triển vọng sử dụng lecíin sam ờ dạng (hô để phât hiện vă chẩn đoân bệnh lupus bai) đỏ, dựa trín sự sai khâc về hăm lượng vă đặc tính của IgG liín kết lectin có trong huyết thanh so với bình thường.
Bín cạnh nghiín cứu về bệnh lupus ban đỏ, lă một dạng đặc Hung cua bính tự miễn toăn thđn, chúng tôi cũng đê tiến hănh thử nghiệm trín huyết thanh người mac bệnh tự miín gđy tôn thương ở thận. Đíìy lă môt dang dặc trưng cua bệnh tư miễn biểu hiện khu trú ở cơ quan. Kết quâ dược trình băy trín bang 10 vă hình 9.
B â n g 1 0 : Đ ộ hấp thụ q u a n g của Ig(; (từ huyết thanh bình thường vă huyết th anh bệnh viím cầu th ậ n -V C T ) khi sử (lụng lectin sam thó
Mẩu huyết thanh bình
tliuòng
O I)4.,2mil lYĩiìu hu vết thanh bệnh viím cầu thận BT I 0,444 VCT 1 0.836 B T 2 0,505 VCT 2 0,930 B T 3 0,582 VCT 3 0 618 B T 4 0,462 VCT 4 0,596 BT 5 0,494 \ CT 5 0,194 BT 6- BT 20* 0,546- 0,658* T rung bình 0,582 Trung bình (1-4) 0,745
* độ hấp thụ quang cùa câc mẫu huyết thanh bình thường lư 6 đến 20 như trín bòng 9.
H ìn h 9 : B iểu đồ so sânh ctộ hấp thụ quang của Ig(ỉ từ huyết thanh người bình th ư ờ n g vă người bệnh viím cầu thận khi sử tlụng lectin sam thô
l .Đ ộ hấp thụ quang của IgCỊ từ huyết thanh bình thưùng. 2.ĐỘ liấp thụ quang của Ig(ĩ từ h u v ế t tlianli bệnh vỉíin cầu thận.
Kết quả ờ bảng 10 cho thấy trong 5 mẫu bệnh phẩm, 4 mẫu đầu có độ hấp thụ quang cao hơn hẳn (tăng 28%) so với giâ trị trung bình của 20 mẫu huyết thanh bình thường. Kết quả năy được biểu diễn trín biểu đồ ở hình 8. Còn mẫu thứ 5 lại có độ hấp thụ quang thấp hơn nhiều, có thể do người bệnh đê ở văo giai đoạn suy giảm miễn dịch nặng, lượng khâng thí sản xu At ra đê giảm mạnh.
Thử nghiệm ban đầu trín huyết thanh người bị suy thận mên (kết quả không trình băy ở đay) cũng cho thấy: một trong hai mẫu bệnh phẩm đươc phđn tích có sư tăng mạnh của độ hấp thụ quang IgG so với người bình thường (26%), còn mẫu kia lại giảm nhẹ (khoảng 5%).
Từ câc kết quả nghiín cứu trín đđy về bệnh tự miễn, có thể sơ bộ rút ra kết luận: trong đa số câc trường hợp, lectin sam (ứ dạng thô) đê giúp phâi hiín được sự
tăng bất thường của hăm lượng IgG trong huyết thaiửi người mắc bệnh (câc trường hợp ngoại lệ có thể đo bệnh đê ở văo giai đoạn suy giảm miễn dịch, nín lượng IgCi sản xuất ra thấp hơn bình thường, hoặc thănh phần IgG đê bị biến đổi). Câc kết quả năy lă phù hợp với kết quả xĩt nghiệm của cơ sở y tế cung cấp mẫu, khi dựa văo câc chỉ tiíu khâc để chẩn đoân (như chỉ tiíu hoâ sinh về enzym...). Do vậy có thể sử dụng lectin sam như một phương tiện để chẩn đoân thay thế cho câc xĩt nghiệm khâc.
Việc nghiín cứu câc loại bệnh tự miễn lă cần thiết, vì nó cho phĩp nhận rõ cơ ch ế gđy tổn thương cùa khâng thể chống lại câc thụ thể. Người ta đê tìm ra những đặc trưng liín quan đến bệnh lý của IgG trong nghiín cứu về câc bệnh tự miễn. Tuy một trong những dấu hiệu đầu tiín của câc bệnh năy lă sự tăng gam ma globulin trong mâu, nhưng mới chỉ có rất ít nghiín cứu về câc dưới lớp IgG (gồm có I g G l , I g 0 2 , IgG3 vă IgG4) vă sự phđn bô của tự khâng thể giữa câc nhóm năy, vă cũng chưa có được những nghiín cứu so sânh ở câc bệnh tự miễn khâc nhau. Người ta đê sử dụng sự khâc biệt trong liín kết đặc hiệu của câc dưới lớp globulin miễn dịch (với protein A của tụ cễ khuẩn vă protein G của tiểu cầu khuẩn) để tâch vă so sânh hăm lượng của chúng, vă để nghiín cứu đặc trưng tự khâng thể trong huyết thanh của một số bệnh tự miễn [6]. Kết quả cho thấy một số đặc trưng liín quan đến câc bệnh lý khâc nhau, biểu hiện ở sự tăng hoặc giảm hăm lượng câc dưới lớp ỉgG, gđy ra sự mất cđn bằng giữa chúng. Sự thay đổi năy có rhể phản ânh sự rối loạn chức nđng điểu khiển miễn dịch của tính tự miễn. Câc bệnh tự miễn ở
người bao gồm nhiều dạng khâc nhau như câc bính viím mên tính, bệnh tâi nhiễm vi sinh vật bín cạnh bệnh tự miễn hệ thống vă đặc hiệu cơ quan, một số có kỉm theo sự tăng nồng độ của câc tự khâng thể đặc hiệu gđy ra bệnh lý. Câc bệnh năy do nhiều yếu tố gđy nín: câc dấu hiệu di truyền, câc yếu tố môi trường. Hiện tượng di truyền bẩm sinh gđy ra câc bệnh lupus ban đỏ, viím khớp dạng thấp, tiểu dường phụ thuộc insulin... Còn về phía môi trường, nhiều nghiín cím cho răng chính câc vi sinh vật gay ra bệnh tự miễn, ví dụ như virut bệnh sởi, virus Epstein- Ban gđy bính viím khớp...Mối quan hệ giữa vi sinh vệt vă bệnh tự miễn có Ihể lă giân tiếp, nhưng tâc nhđn nhiễm khuẩn thường gđy ra câc bệnh viím thứ cấp (ví dụ viím loĩt đa dăy thường liín quan đến vi khuẩn Helicobacter pylori). Ngoăi ra sư thay đổi
cua câc vùng địa lý khâc nhau, như tố cơ địa (atopy) cũng gđy ra tỷ lệ mắc bệnh tư miẻn khâc nhau. Việc tìm hiíu câc tự khâng nguyín của bệnh tự miển có ý nghĩa í ất quan trọng, cho phĩp hoăn thiện câc xĩt nghiệm chẩn đoân đặc hiệu vă dự bâo
hướng điều trị.
Tóm lại, những nghiín cứu về mối quan hệ giữa câc globulin miễn dịch vă bệnh lý lă một hướng đi đúng đắn, cho phĩp chúng ta có thím kiến thức vă công cụ trong y học để chẩn đoân vă chữa bệnh, v ể phương điện năy, lectin lă một trợ thù quý giâ nhờ văo tính đặc hiệu liín kết của chúng, đặc biệt lă những lectin nhận biết được khâng thể. Khi thực hiện chức năng bảo vệ cơ thể, câc khâng thể giúp trung hoă câc độc tố vă loại bỏ khâng nguyín lạ, một phđn nhờ văo khả năng gAy ngưng kết (câc vi khuẩn, ký sinh trùng...). Phản ứng khâng nguyín- khâng thể mang tính đặc hiệu cao. Do vai trò quan trọng của mình, nín câc khâng thể có lất nhiều ứng dụng trong sinh học vă y học. Trong y học lđm săng, người ta có thể sứ dụng câc khâng thể đạc hiệu với bệnh để chẩn đoân, cũng như để tổng hợp câc khâng thể đùng lăm liệu phâp chữa bệnh. Trong nghiín cứu, chúng được sử đụng để chẩn đoân vă nghiín cứu ứng dụng. Chính sự đa dạng phong phú của câc globulin miễt) địch đê quyết định tính đặc hiệu vă chức nđng sinh học của chúng, đồng thời khiến cho sự biểu hiện trong câc dạng bệnh tý cũng khâc nhau.
Có thể xảy ra những cơ chí không bình thường trong tổng hợp globulin miễn địch. Trong câc bệnh thiếu hụt miễn dịch, sự thiếu hụt có thể thuộc về quâ trình tổng hợp khâng thể, hoặc thiếu hụt về quâ trình miễn dịch qua trung gian tế băo hoặc thiếu hụt cả hai. Câc globulin miền dịch có thể vẫn được tổng hợp với sô lượng đầy đủ, nhưng khả nđng bảo vệ có thể bị giảm sút hoặc mất đi, nếu có những thay đổi khâc thường trong cấu trúc phđn tử của chúng. Câc thiíu hụt về cơ chế miễn dịch có thể lă bẩm sinh (có trường hợp thiếu toăn bộ trong tổng hợp câc globulin miễn dịch, ví dụ thiếu gamma globulin huyết kiểu Bruton, khi nồng đô IgG trong mâu thấp hơn 1 mg/ ml, vă nồng đô IgA, IgM chí bằng 1% giâ trị bình thường) hoặc có thể lă hđu quả của quâ timli bệnh ly.
Hiện tượng ngược lại lă sự tăng globulin miễn dịch. Thông thường đó lă câc trường hợp tăng đa clon miễn dịch, khi cơ thể đâp ứng kích thích khâng nguyín băng câch sản xuất khâng thể gôm nhiều dưới lóp có độ di đông điện khâc nhau, ví
dụ sự tăng IgG, hay IgA đa clon. Nhưng cũng có trường hợp chỉ tăng một dòng globulin miễn dịch. Ví dụ trong bệnh u tuý (myeloma), chỉ một nhóm tí băo plasma nhất định được phât triển theo câch âc tính. Nhóm tế băo đặc biệt năy thuộc vể một clon tế băo, chúng có khả năng sinh sản nhanh chóng, tạo ra một lớp globulin miễn dịch đặc biệt, có thể lă IgG, IgA, IgD hoặc IgE. Câc Ig đơn dòng năy của huyết thanh có thể gđy ra sự rối loạn bệnh lý do nồng độ quâ cao, do tính đặc hiệu vă cấu trúc bất thường của chúng, ví dụ như lăm tđng hăm lượng protein vă độ nhớt của mâu, tăng tốc độ lắng của hồng cầu, gêy tổn thương tim mạch, biến chứng chảy mâu vă nhiễm trùng, gđy câc chứng bệnh do lắng cặn ở câc mô thận, tim, gan...Một số trường hợp bệnh lý có liín quan đến sự thay đổi hăm lượng khâng thể đê được nghiín cứu tỉ mỉ [7, 9]. Chúng tôi cũng mong muốn trong thời gian tới có thể tiếp tục đề tăi theo hướng sử dụng lectin sam để nghiín cứu sđu hơn về khâc biệt trong câc dạng IgG biểu hiện trong câc bệnh liín quan đến câc khâng thể.
Câc khâng thể trong huyết thanh có thể được tâch vă tinh chí bằng câc phương phâp lọc gel, sắc ký trao đổi ion vă sắc ký âi lực [4, 6, 8], Trong số năy sắc ký âi lực chiếm ưu thế vì đạt được độ tinh sạch cao vă ít tốn thời gian thu chế phẩm nhưng lại chỉ sử dụng được khi có câc khâng nguyín đặc hiệu. Những kết quả chúng tôi thu được đê gợi mở hướng sử dụng lectin sam để tạo cột sắc ký âi lưc dùng trong tinh chế IgG phục vụ cho nghiín cứu khoa học, miễn dịch bệnh lý vă liệu phâp miễn dịch, hoặc giúp xâc định hăm lượng IgG trong huyết thanh một câch chính xâc góp phần văo chẩn đoân vă định hướng điều trị một số bệnh hiểm nghỉo ở người.
KẾT LUẬN
1.Đê tinh c h ế được lectin sam có độ sạch cao nhờ kỹ thuật sắc ký âi lực trín cột IgG- sepharose 4B.
2.Chế phẩm lectin sam (cũng như lectin ở dạng thô) biểu thị tính đặc biện tương tâc với khâng thể lớp IgG vă không nhận biết IgA.
3.Việc sử dụng ch ế phẩm lectin sam trong xĩt nghiệm huyết thanh để nghiín cứu ung thư cho thấy: hăm lượng IgG ờ người bị bệnh ung thư gan vă ung thư mâu
không có biến động khâc thường, CÒI1 ở người bị ung thư vú có giảm đi. Khi sỉr dụng lectin sam thô đê phât hiện có sự giảm tiliẹ hăm lượng IgG ờ bệnh nhđn ung
thư mâu.
4.Trong xĩt nghiệm huyết thanh để nghiín cứu câc bệnh do nhiễm virul có sử dụng ch ế phẩm lectin sam, kết quả cho thấy hăm lượng IgG ở câc bệnh nhđn bị viím nêo giảm 18%, còn ử bệnh nhan bị sởi t;ằng 27%.
5.Trong nghiín cứu câc bệnh tự miễn, việc sử dụng lectin sam thô cho phĩp phât hiện sự tăng mạnh hăm lượng IgG so với bình thường ở người bệnh lupus ban đỏ (30%) vă người bệnh viím thận (26-28%).
6.Có thể sử dụng lectin sam trong tinh chế vă trong định lượng IgG để phục vụ cho nghiín cứu vă cho liệu phâp miễn dịch. Đó lă một công cụ đắc lực cho chẩn đoân, có thể tiến tới dùng trong điều trị một sô bệnh hiểm nghỉo ở người.