Vật liệu khử trựng: Đoạn thõn củ chứa chồi bờn sa nhõn tớm.
Phƣơng phỏp xử lý mẫu: (i) Cõy sa nhõn non đƣợc rửa sạch bằng xà phũng dƣới vũi nƣớc chảy, cắt bỏ ngọn, gọt sạch phần rễ và vỏ ở phần củ; (ii) xịt cồn đƣa mẫu vào trong tủ cấy vụ trựng, tiếp tục tỏch bẹ để lấy phần đỉnh sinh trƣởng bờn trong; (iii) Phần đỉnh sinh trƣởng đƣợc lắc qua cồn 700
trong Giai đoạn tỏi sinh chồi Mẫu: Chồi sa nhõn tớm Giai đoạn tạo vật liệu
khởi đầu Mẫu: chồi bờn, thõn
củ sa nhõn tớm
Giai đoạn nhõn nhanh cụm chồi Mẫu: Chồi invitro
Giai đoạn tạo cõy hoàn chỉnh Mẫu: Chồi in vitro Giai đoạn vƣờn ƣơm
Mẫu: Cõy con in vitro
Cõy sa nhõn tớm nuụi cấy
mụ
vũng 30 giõy đến 1 phỳt; (iv) Trỏng mẫu (đỉnh sinh trƣởng)1-2 lần bằng nƣớc cất vụ trựng; (v) Lắc mẫu nuụi cõy (đỉnh sinh trƣởng) trong húa chất khử trựng với thời gian khử trựng theo nội dung từng cụng thức cụ thể; (vi) Trỏng sạch mẫu 4 – 5 lần bằng nƣớc cất vụ trựng; (vii) Cấy mẫu đó khử trựng vào mụi trƣờng nuụi cấy (Cỏc thao tỏc từ bƣớc ii đến bƣớc vii đƣợc thực hiện trong điều kiện vụ trựng).
Hoỏ chất khử trựng: H2O2 và HgCl2
Mụi trƣờng nuụi cấy: MS (Murashige & Skoog , 1962) [32], bổ sung saccharose 30 g/lớt; agar 6,8 g/lớt; inositol 100 mg/l, pH = 5,8.
Cỏc cụng thức đƣợc bố trớ theo kiểu ngẫu nhiờn hoàn toàn với 3 lần nhắc lại, 90 mẫu/ 1 cụng thức.
* Cỏc thớ nghiệm tiến hành
Thớ nghiệm 1: Nghiờn cứu ảnh hưởng của H202 nồng độ 20% đến khả năng vụ trựng mẫu
Thớ nghiệm 2: Nghiờn cứu ảnh hưởng của HgCl2 nồng độ 0,1% đến khả năng vụ trựng mẫu
Cụng thức thớ nghiệm Thời gian và nồng độ khử trựng Cụng thức thớ nghiệm Thời gian và nồng độ khử trựng
CT1 Khụng xử lý CT 2 20% + 5 phỳt CT 3 20% + 10 phỳt CT 4 20% + 15 phỳt CT5 20% + 20 phỳt CT6 20% + 25 phỳt
CT1 Khụng xử lý CT 2 0,1% + 5 phỳt CT 3 0,1% + 10 phỳt CT 4 0,1% + 15 phỳt CT5 0,1% + 20 phỳt CT6 0,1% + 25 phỳt
* Cỏc chỉ tiờu theo dừi ( theo dừi sau 20 ngày) + Tỷ lệ mẫu nhiễm:
Tổng số mẫu nhiễm
Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) = 100 Tổng số mẫu nuụi cấy
+ Tỷ lệ mẫu sạch:
Tổng số mẫu sạch
Tỷ lệ mẫu sạch (%) = 100 Tổng số mẫu nuụi cấy
+ Tỷ lệ mẫu chết do húa chất
Tổng số mẫu chết do húa chất
Tỷ lệ mẫu chết (%) = 100 Tổng số mẫu nuụi cấy