THỰC NGHIỆM
2.1. Nội dung và phƣơng pháp nghiên cứu
2.1.1. Nội dung nghiên cứu
Nghiên cứu để xây dựng qui trình xác định đồng thời paracetamol, clopheniramin maleat và dextromethorphan hydrobromit trong các mẫu thuốc Coldko bằng phương pháp trắc quang.
Nội dung nghiên cứu của đề tài tập trung vào các vấn đề sau:
- Khảo sát các điều kiện tối ưu và các yếu tố ảnh hưởng đến phép đo
quang đối với paracetamol, clopheniramin maleat và dextromethorphan hydrobromit.
+ Môi trường thuận lợi cho phép đo quang + pH tối ưu của dung dịch cho phép đo quang.
+ Khảo sát sự ảnh hưởng của thời gian đến độ hấp thụ quang. + Khảo sát sự ảnh hưởng nhiệt độ đến độ hấp thụ quang.
+ Ảnh hưởng của các cấu tử với nhau (kiểm tra tính cộng tính).
+ Rút ra kết lu ận về các điều kiện tối ưu cho phép đo quang để ứng dụng trong thực tế như: môi trường, thời gian dung dịch có độ h ấp thụ quang ổn định, khoảng pH tối ưu.
- Đánh giá phương pháp phân tích.
- Khảo sát giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng, khoảng tuyến tính khi xác định riêng rẽ từng cấu tử.
- Phân tích mẫu pha chế và mẫu thực tế.
2.1.2. Phương pháp nghiên cứu
- Nghiên cứu các điều kiện tối ưu cho phé p đo paracetamol, clopheniramin maleat và dextromethorphan hydrobromit.
- Tiến hành xác định đồng thời 2 chất trong các mẫu giả tự pha. - Tiến hành xác định đồng thời 3 chất trong các mẫu giả tự pha.
- Sử dụng chương trình lọc Kalman để xác định đồng thời các cấu tử trong hỗn hợp.
2.2. Hóa chất, dụng cụ và thiết bị thí nghiệm
2.2.1. Hóa chất
- Chất chuẩn paracetamol, clopheniramin maleat và dextromethorphan hydrobromit do viện kiểm nghiệm dược cung cấp.
- Các loại axit đặc: HCl, H2SO4, HNO3 của Merck.
- Thuốc viên Coldko được sản xuất bởi công ty cổ phần dược phẩm Nam Hà – Việt Nam.
* Pha chế các dung dịch chuẩn.
- Dung dịch HCl, HNO3 có nồng độ 0,1M, 0,01M, 0,001M được pha từ dung dịch HCl 37% (d=1,19), HNO3 65% (d=1,39).
- Dung dịch H2SO4 có nồng độ 0,05M, 0,005M, 0,0005M được pha từ dung dịch H2SO4 98%(d=1,84).
2.2.2. Dụng cụ, thiết bị
- Các dụng cụ thủy tinh như: Bình định mức, cốc, pipet các loại
- Máy quang phổ UV-VIS 1700 PC - Shimazu (Nhật Bản) có kết nối máy tính, khoảng bước sóng từ 190- 900 nm, cuvet thạch anh chiều dày l = 1cm.
- Cân phân tích Scientech SA 210 độ chính xác 0,0001g.
2.3. Đánh giá độ tin cậy của quy trình phân tích
2.3.1. Xác định giới hạn phát hiện, giới hạn định lượng.
2.3.1.1. Giới hạn phát hiện (LOD)
Giới hạn phát hiện được coi là nồng độ thấp nhất của chất nghiên cứu mà hệ thống phân tích cho tín hiệu phát hiện phân biệt với tín hiệu nền. Trong phân tích trắc quang LOD tính theo phương trình hồi quy có công thức như sau:
y
3.S LOD =
B (2.1)
Trong đó:
Sy: là độ lệch chuẩn của tín hiệu y trên đường chuẩn.
2.3.1.2. Giới hạn định lượng (LOQ)
Giới hạn định lượng được coi là nồng độ thấp nhất của chất nghiên cứu mà hệ thống phân tích định lượng được với tín hiệu phân tích khác, có ý nghĩa định lượng với tín hiệu nền và đạt độ tin cậy tối thiểu 95% và thường người ta sử dụng công thức:
y
10.S LOQ =
B (2.2)
2.3.2. Đánh giá độ tin cậy của phương pháp
- Đánh giá độ đúng của phương pháp đối với các hỗn hợp PAR, CPM và DEX tự pha chế thông qua sai số tương đối RE. Sai số tương đối của các phép phân tích đối với mẫu chuẩn tự pha chế thông qua việc tính tỷ số giữa độ sai lệch của nồng độ tính toán được với nồng độ thực đã biết của mẫu theo công thức:
Tinh toan 0 0 C - C RE% = .100% C (2.3) Trong đó:
RE% là sai số tương đối của phép xác định nồng độ các cấu tử. CTinh toan là nồng độ tính toán được từ chương trình lọc Kalman.
C 0 (µg/mL) là nồng độ đã biết của dung dịch PAR, CPM hoặc DEX trong hỗn hợp.
- Đánh giá độ đúng của phương pháp đối với các mẫu thuốc nghiên cứu thông qua độ thu hồi bằng phương pháp thêm chuẩn. Độ thu hồi (Rev) được tính theo công thức sau:
TC - C - Re = .100% a a C v (2.4)
Trong đó: CT: nồng độ (µg/mL) của dung dịch PAR, CPM hoặc DEX xác định được trong mẫu sau khi thêm chuẩn;
Ca: nồng độ (µg/mL) của dung dịch PAR, CPM hoặc DEX xác định được trong mẫu khi chưa thêm chuẩn.
a: nồng độ (µg/mL) của dung dịch chuẩn PAR , CPM hoặc DEX thêm vào mẫu (đã biết).
- Độ lặp lại của phương pháp được đánh giá thông qua độ lệch chuẩn (S) hoặc độ lệch chuẩn tương đối (RSD).
n n 2 2 i i i=1 i=1 -μ -C S = = k k C C (2.5) RSD .100 (%) S C (2.6) Trong đó:
Ci là các giá trị n ồng độ (µg/mL) của dung dịch PAR, CPM hoặc DEX tính được lần thứ i;
là giá trị nồng độ thực của mẫu;
C là giá trị nồng độ trung bình tính được sau n lần xác định; k là số bậc tự do.
2.3.3. Đánh giá kết quả phép phân tích theo thống kê
Khoảng tin cậy của phép xác định nồng độ được tính theo công thức:
P,k
t .S
X ± ε = X ±
n (2.7)
Trong đó:
- tP, k là hệ số phân bố chuẩn Student ứng với xác suất P và bậc tự do - k được tra trong bảng.
- X là giá trị trung bình của tập số liệu các kết quả nghiên cứu. - S là độ lệch chuẩn.
Chƣơng 3