Sau khi thu được tinh dầu, chúng tôi đã tiến hành đo tỷ trọng, chỉ số khúc xạ, góc quay cực, độ hòa tan trong etanol, chỉ số axit.
2.4.1. Xác định tỷ trọng
Do điều kiện vật chất của phòng thí nghiệm chưa có bình tỷ trọng nên chúng tôi đã tiến hành đo tỷ trọng tinh dầu theo phương pháp thủ công.
Dùng một ống tiêm y tế (loại 1ml), trên thân ống tiêm được vạch một đường làm dấu.
Ban đầu, đem cân ống tiêm không và ghi số liệu lại (G).
Tiếp theo: Hút nước cất đến vạch (lưu ý trong ống tiêm không có bong bóng khí) đem cân và ghi lại số liệu (G1). Rồi xả bỏ nước trong ống tiêm, vẩy cho khô nước.
Cuối cùng: Hút tinh dầu khan đến vạch (lưu ý không để cho có bong bóng khí trong ống tiêm) đem cân và ghi lại số liệu (G2).
Tỷ trọng (d) được đo ở 250C được tính bằng công thức:
2 1 G G d G G Trong đó:
G: khối lượng của ống tiêm không, tính bằng gam (g).
G1: khối lượng của ống tiêm chứa nước cất, tính bằng gam (g). G2: khối lượng của ống tiêm chứa tinh dầu, tính bằng gam (g). Cứ như thế lặp lại thí nghiệm 3 lần và lấy giá trị trung bình.
1 2 3
3
d d d
d
2.4.2. Xác định độ hòa tan trong etanol
Dùng pipet (loại 1ml) hoặc ống tiêm hút chính xác 0,1ml tinh dầu vỏ quất khan vào một ống nghiệm nhỏ (ống nghiệm đã rửa sạch và dùng cồn tráng qua sau đó làm bay hơi hết cồn).
Thí nghiệm: Khảo sát độ hòa tan trong etanol 90%.
Cho etanol 90% vào buret (buret đã được rửa sạch và tráng qua etanol). Nhỏ từng giọt etanol vào ống nghiệm đã chuẩn bị sẵn tinh dầu, lắc hỗn hợp khoảng 30 giây rồi để yên 1 phút. Nếu hỗn hợp tinh dầu vẫn còn đục thì cứ tiếp tục nhỏ etanol
đến khi nào được một dung dịch đồng nhất thì ngưng và ghi lại thể tích etanol đã dùng.
Lặp lại thí nghiệm 3 lần rồi lấy giá trị trung bình.
2.4.3. Xác định chỉ số axit
Lượng tinh dầu được dùng là 0,5gam tinh dầu khan. Chuẩn bị dung dịch KOH 0,1N; phenolphthalein trung tính; etanol 960.
Hút 10ml etanol vào một bình tam giác (loại 50ml), cho 0,1ml tinh dầu khan vào bình tam giác trên và lắc cho đến khi hòa tan hoàn toàn. Cho thêm vào bình tam giác khoảng 10 giọt phenolphthalein trung tính.
Do thể tích dung dịch KOH dùng ít nên ở thí nghiệm này để chính xác hơn tôi dùng pipet (hoặc ống tiêm) 1ml để chuẩn độ.
Mỗi lần nhỏ một giọt KOH 0,1N vào hỗn hợp và lắc đều cho đến khi màu của hỗn hợp chuyển sang hồng bền không biến mất trong 30 giây thì ngưng, và ghi lại thể tích dung dịch KOH đã dùng.
Làm lại thí nghệm 3 lần và lấy giá trị trung bình.
2.4.4. Đo chỉ số khúc xạ
Chỉ số khúc xạ của tinh dầu vỏ quả quất được đo ở Viện Khoa học Vật liệu và Ứng dụng Thành phố Hồ Chí Minh.
2.4.5. Đo góc quay cực
Góc quay cực của tinh dầu vỏ quả quất được đo ở Viện Khoa học Vật liệu và Ứng dụng Thành phố Hồ Chí Minh.
2.4.6. Đo phổ GC-MS để xác định thành phần hóa học của tinh dầu
Thành phần hóa học có trong tinh dầu vỏ quả quất được xác định bằng cách đo phổ GC/MS ở Viện Khoa học Vật liệu và Ứng dụng ở Thành phố Hồ Chí Minh. Máy đo là Sắc kí khí – khối phổ ký liên hợp (GC – MS) Hewlett – Packard HP 6890N, cột HP – 5MS (dài 30m; đường kính cong 0,25mm; lớp phim dày 0,25 µm), liên hợp với HP 5973. khí mang He. Thư viện phổ: NIST (1998).
2.4.7. Thử hoạt tính sinh học của tinh dầu vỏ quả quất
Hoạt tính kháng khuẩn của tinh dầu được thực hiện tại Phòng Vi sinh Thực phẩm, Khoa Xét nghiệm, Viện Pasteur Tp.Hồ Chí Minh theo phương pháp khuếch tán trên đĩa thạch, đo đường kính vòng vô trùng tạo ra bởi đĩa giấy (D = 6 mm) tẩm
tinh dầu với các nồng độ thay đổi từ 100% (tinh dầu nguyên chất) đến các nồng độ pha loãng dần.