* Nguyên tắc:
Dựa vào nồng độ vi trùng coli trong một khối lượng nước nhất định mọc thành khuẩn lạc trên màng lọc được đặt và nuơi cấy trên thạch Endol ở 37oC ± 0,5oC trong 24h. Đếm khuẩn lạc cĩ ánh kim và tính tổng số coli phân.
* Tiến hành:
Khối lượng nước đem phân tích khơng được lấy ít hơn 350 ml và phải được lọc qua ít nhất hai màng lọc. Tùy chất lượng nước, chọn sao cho mỗi màng lọc cĩ số khuẩn lạc vi trùng coli khơng quá 30. Cần căn cứ vào các lần phân tích trước để chọn cho thích hợp.
Cĩ thể dùng màng lọc mới hoặc đã được tái tạo sau khi sử dụng, nhưng màng lọc khơng được rách.
Dùng bơng tầm cồn đốt lên để thanh trùng phễu lọc và đế lọc, đặt tiếp phễu lên và vặn chặt lại.
Đổ nước lọc được vơ trùng vào phễu lọc, cho máy hút chân khơng hoạt động. Ban đầu lọc từng tý nước một, sau đĩ lọc phần cịn lại. Khi lọc một lượng nước nhỏ (khoảng 1 ml) trước hết lọc 10 ml nước cất, sau đĩ mới lọc nước đem phân tích.
Sau khi lọc hết nước, nhấc cẩn thận màng lọc ra, đặt trên mặt thạch Endol (tránh tạo thành bọt khí giữa màng lọc và bề mặt thạch), đặt mặt tiếp xúc với nước lọc ngửa lên trên. Sau đĩ, đặt mơi trường endol cĩ màng lọc vào tủ cĩ nhiệt độ 37oC trong 18 - 24h.
Tính chỉ số coli hay coli-tit với phương pháp màng lọc:
Chỉ số coli (hay coli-index): là số trực khuẩn coli phân cĩ trong 1 lít nước và được xác định theo cơng thức:
Coli -index = 1000.n Q
Trong đĩ:
n - số khuẩn lạc coli phân;
Q - lượng nước đã đem lọc, tính bằng ml;
Chuẩn độ coli (hay colitit): là lượng nước ít nhất cĩ chứa một vi khuẩn coli. Tính bằng ml.
Giữa chuẩn độ coli và chỉ số coli cĩ mối quan hệ như sau:
Chuẩn độ Coli = 1000 Chỉ số coli
Nếu trên màng lọc khơng thấy cĩ vi trùng mọc hoặc cĩ khuẩn lạc, vi trùng mọc nhưng khơng điển hình của coli phân, khơng sinh ánh kim thì chỉ số coli được quy ước < 3 âm tính.
Khi cĩ khuẩn lạc điển hình của coli phân mọc trên màng lọc - dương tính.
Ví dụ 1: Chuẩn độ coli cĩ trong nước phân tích là 250 cĩ nghĩa là trong 250 ml cĩ 1 tế
bào coli và như vậy chỉ số coli là: 1000/250 = 4: chỉ số coli trong 1 lít nước là 4, cĩ nghĩa là trong 1 lít nước cĩ 4 tế bào coli. Người ta cĩ thể dùng chỉ số coli cho 1 đơn vị thể tích là 1 ml, 1 đơn vị khối lượng là 1 gam.
Ví dụ 2: Khi cấy một mẫu nước nhưng chia làm 3 lần, mỗi lần 100 ml và lọc qua màng
lọc, trên màng lọc mọc 3 khuẩn lạc coli cĩ ánh kim, cịn 2 màng cịn lại khơng cĩ khuẩn lạc nào, thì chỉ số coli là : (3.1000)/300 = 10 coli/l nước.
Ví dụ 3: Nếu chỉ lọc 10 ml qua một màng lọc, 100 ml qua một màng lọ khác, sau khi
cấy thấy một khuẩn lạc coli mọc ở màng lọc kia, thì chỉ số coli : (6.1000)/110 = 54 coli/l nước.