PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1. đối tượng, ựịa ựiểm và thời gian nghiên cứu
3.1.1. đối tượng nghiên cứu
Đối tợng nghiên cứu của đề tài là 10 bò đực giống Holstein Friesian,
cã nguăn gèc tõ australia (HF Úc) Ờ nhẺp thịng 12 năm 2009 và có độ tuổi từ
27 tháng đến 30 tháng tuổi, khối lợng cơ thể từ 750kg đến 800kg.
Các bị đực này được chăm sóc, ni dưỡng theo quy trình kỹ thuật về quản lý và chăm sóc bị ựực giống gốc theo quyết ựịnh số 66/2005/ Qđ-BNN của Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn (Bộ Nông nghiệp và PTNT, 2005)[4].
Các bị đực giống HF được khai thác tinh vào buổi sáng, hai lần một tuần, được ni dưỡng bằng khẩu phẩn ăn theo tiêu chuẩn cơ sở (Bảng phụ lục).
3.1.2. địa ựiểm nghiên cứu
Trạm Nghiên cứu và sản xuất tinh đơng lạnh Moncada (Tản Lĩnh- Ba Vì - Hà Nội).
3.1.3. Thời gian nghiên cứu
Từ tháng 1 năm 2011 ựến tháng 6 năm 2012.
3.2. Nội dung nghiên cứu
3.2.1. Nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch của bị đực giống HF Úc. giống HF Úc. + Thể tắch tinh dịch (V ml) + Nồng ựộ tinh trùng (C tỷ/ml) + Hoạt lực tinh trùng (A %) + Màu sắc tinh dịch + pH tinh dịch
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 36 + Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K %)
+ Tỷ lệ tinh trùng sống (%)
+ Tổng số tinh trùng tiến thẳng (V.ẠC tỷ/lần khai thác)
3.2.2. Nghiên cứu khả năng sản xuất tinh đơng lạnh của bị đực giống HF Úc. Úc.
+ Tỷ lệ các lần khai thác tinh ựạt tiêu chuẩn (%).
+ Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ựược trong một lần khai thác tinh (liều/lần khai thác).
+ Hoạt lực tinh trùng sau giải đơng (%)
+ Số lượng tinh cọng rạ sản xuất/ năm và tỷ lệ tinh cọng rạ ựạt tiêu chuẩn sau ựông lạnh (%).
3.3. Phương pháp nghiên cứu
3.3.1. Phương pháp nghiên cứu một số chỉ tiêu số lượng, chất lượng tinh dịch của bị đực giống HF Úc. dịch của bị đực giống HF Úc.
+ Thể tắch tinh dịch: được xác định bằng quan sát trên ống đong có chia khắc ml.
+ Hoạt lực tinh trùng: được xác định bằng kắnh hiển vi có kết nối với màn hình.
+ đánh giá nồng ựộ tinh trùng bằng máy so màu Photometer SDM5 của hãng Minitub (đức).
+ Màu sắc tinh dịch xác ựịnh bằng quan sát sau mỗi lần khai thác tinh. + đo pH tinh dịch bằng giấy ựo pH của hãng Merck.
+ Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình được xác ựịnh bằng phương pháp nhuộm màu và đếm trên kắnh hiển vi 500 tinh trùng rồi tắnh tốn bằng phép tắnh số học thơng dụng.
Số lượng tinh trùng kỳ hình K (%) =
500 X 100
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 37 trùng chết phần ựầu bắt màu ựỏ của eosin, ựếm tổng số 500 tinh trùng rồi tắnh tỷ lệ %, bằng phép tắnh số học thơng thường.
Số lượng tinh trùng sống Tỉ lệ tinh trùng sống (%) =
500 X 100
+ Tổng số tinh trùng sống tiến thẳng trong một lần khai thác ựược xác ựịnh bằng cách nhân tắch của các chỉ tiêu V.ẠC
3.3.2. Phương pháp nghiên cứu khả năng sản xuất tinh đơng lạnh của bị ựực giống HF Úc . ựực giống HF Úc .
+ Tỷ lệ các lần khai thác tinh ựạt tiêu chuẩn ựược xác ựịnh bằng cách ghi chép và ựánh giá tất cả các chỉ tiêu với tinh tươi của từng lần lấy tinh rồi tắnh tốn theo phương pháp số học thơng thường.
Số lần khai thác tinh ựạt tiêu chuẩn Tỷ lệ các lần khai thác tinh ựạt tiêu chuẩn (%) =
Tổng số lần khai thác tinh X 100 + Số lượng tinh cọng rạ sản xuất ựược trong một lần khai thác tinh, là tổng số tinh bị đơng lạnh được sản xuất ra trong một lần khai thác tinh, ựược xác ựịnh bằng phương pháp ghi chép và thống kê thông dụng.
+ Hoạt lực tinh trùng sau giải đơng, sau khi ựông lạnh 24 giờ, tinh cọng rạ ựược lấy ngẫu nhiên từ 1 ựến 2 cọng rạ giải đơng ở nhiệt độ 36 đến 370C, thời gian 30 giây theo từng ngày sản xuất của từng bị đực giống và ựược đánh giá bằng kắnh hiểm vi có kết nối với màn hình.
+ Tỷ lệ tinh cọng rạ đạt tiêu chuẩn sau đơng lạnh.
Tổng số tinh cọng rạ ựạt tiêu chuẩn Tỷ lệ tinh cọng rạ ựạt tiêu
chuẩn sau đơng lạnh (%) = Tổng số tinh cọng rạ sản xuất X 100
3.3.3. Khai thác tinh dịch từ bị đực giống HF
- Chuẩn bị âm ựạo giả: Các bộ phận của âm ựạo giả ựã ựược khử trùng rồi lắp ráp và bảo quản trong tủ ấm 42 0C trước khi khai thác tinh.
- Chuẩn bị bị đực giống HF khai thác tinh: Bị đực giống HF đến lịch khai thác tinh, đầu giờ sáng bị ựực giống ựưa ra khu vực chờ khai thác tinh
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 tắm trải sạch sẽ bằng nước sạch và thụt rửa bao dương vật bằng nước muối sinh lý 0,9% trước khi lấy tinh 30 phút.
- Chuẩn bị bò làm giá và giá nhảy nhân tạo: Chọn bò làm giá hoặc giá giả thắch hợp với từng bị đực giống và vệ sinh sạch sẽ.
- Khai thác tinh bằng âm đạo giả: Kắch thắch tắnh dục cho bị đực giống thật hăng, rồi cho nhảy giá và khai thác tinh bằng âm ựạo giả (chỉ khai thác tinh một lượt). Sau khi thu nhận ựược tinh dịch từ bị đực giống trong lần xuất tinh, người lấy tinh chuyển ngay vào phịng thắ nghiệm để đánh giá các chỉ tiêụ
3.3.4. Các bước sản xuất tinh bị đơng lạnh dạng cọng rạ
- Chuẩn bị mơi trường pha lỗng tinh dịch.
Mơi trường pha lỗng tinh dịch, đã được pha chế sẵn theo cơng thức môi trường của Nhật Bản gồm: Môi trường A (Tris, Citric axit, Lactose, Fructose, Raffinose, nước cất 2 lần, lịng đỏ trứng gà, Peniciline, Steptomycine) và môi trường B (môi trường A + Glyceryl), được bảo quản trong tủ bảo quản có nhiệt ựộ 50C. Trước khi sử dụng, môi trường ựược lấy ra và ựặt trong Autobath có nhiệt ựộ 350C ựể cân bằng nhiệt ựộ với nhiệt ựộ tinh dịch.
- Pha loãng tinh dịch.
+ Pha lỗng với mơi trường A với lượng bằng 50% tổng lượng môi trường cần dùng và bảo quản ở nhiệt ựộ 50C trong 1 ựến 2 giờ.
+ Pha lỗng với mơi trường B bằng phương pháp nhỏ giọt trong 3 giờ. - In nhãn mác lên vỏ cọng rạ bằng máy in chuyên dùng.
- Nạp tinh và hàn ựầu cọng rạ bằng máy tự ựộng.
- Cân bằng glyceryl ở 50C, các cọng rạ ựược rải ựều một lớp trên giá chuyên dụng và ựặt trong buồng có nhiệt ựộ 50C trong 3 giờ.
- đông lạnh bằng máy ựông lạnh chuyên dụng, tự ựộng ựiều khiển hạ nhiệt ựộ dần dần xuống -1960C.
3.4. Xử lý số liệu
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ 39