năm 2010.
Chỳng tụi tiến hành kiểm tra mẫu với triệu chứng điển hỡnh là xoăn vàng lỏ cà chua, cỏc mẫu được thu ngoài đồng ruộng ở Hà Nội, cỏc vựng phụ cận và cỏc mẫu đươc chuyển ra từ Lõm Đồng. Sau khi tiến hành chọn cỏc mẫu chỳng tụi tiến hành lấy sản phẩm tỏch chiết axitnucleic tổng số để chạy PCR. Chu trỡnh và húa chất chạy PCR được trỡnh bày ở phần vật liệu nghiờn cứụ
Đầu tiờn, chỳng tụi sử dụng cặp mồi chung đặc hiệu cho DNA-A của nhiều loài begomovirus (BegoAFor1/BegoARev1) nhằm phỏt hiện sự cú mặt của virus trong mẫu bệnh. Hiện nay, tại miền Bắc Việt Nam mới chỉ phỏt hiện sự cú mặt của 2 begomovirus gõy bệnh xoăn vàng lỏ cà chua là ToLCVV và TYLCVNV. Để kiểm tra sự cú mặt của 2 virus này trờn 12 mẫu cà chua nhiễm begomovirus, chỳng tụi đó sử dụng 2 cặp mồi đặc hiệu cho mỗi virus, kết quả được thể hiện qua hỡnh 10, bảng 15.
Bảng 15: Kết quả kiểm tra PCR phỏt hiện begomovirus trờn cà chua thu thập ngoài đồng ruộng năm 2010
TT Mó mẫu Địa điểm Cõy
(giống) Begomovirus (H.1) TYLCVV (H.2) ToLCVV (H.3) 1 TVN29 Lõm Đồng Cà chua + - - 2 TVN33 Lõm Đồng Cà chua + - - 3 TVN34 Lõm Đồng Cà chua + - - 4 TVN39 Lõm Đồng Cà chua + - - 5 TNN40 Lõm Đồng Cà chua + - - 6 TVN41 Lõm Đồng Cà chua + - - 7 TVN42 Lõm Đồng Cà chua + - - 8 TVN52 Lõm Đồng Cà chua - - - 9 TVN53 Lõm Đồng Cà chua - - -
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 70 10 TVN59 Lõm Đồng Cà chua - - - 11 TVN61 Lõm Đồng Cà chua - - - 12 TVN62 Lõm Đồng Cà chua - - - 13 TVN5 Lõm Đồng Cà chua - - 14 TVN6 Lõm Đồng Cà chua - - 15 TVN11 Lõm Đồng Cà chua - - 16 TVN12 Lõm Đồng Cà chua - - - 17 TVN19 Lõm Đồng Cà chua - - - 18 TVN20 Lõm Đồng Cà chua - - - 19 TVN32 Lõm Đồng Cà chua + - - 20 TVN43 Lõm Đồng Cà chua + - - 21 TVN44 Lõm Đồng Cà chua + - - 22 TVN54 Lõm Đồng Cà chua - - - 23 TVN55 Lõm Đồng Cà chua + + - 24 TVN58 Lõm Đồng Cà chua - - -
25 VB20 Mờ Linh - Hà Nội Cà chua - - -
26 VB28 Vĩnh Tường - Vĩnh Phỳc Cà chua + + -
27 VB49 Phổ Yờn - Thỏi Nguyờn Cà chua - - -
28 VB63 Lạng Giang - Bắc Giang Cà chua - - -
29 VB78 Khỏnh Nhạc - Ninh Bỡnh Cà chua + + +
30 VB79 Lõm Thao - Phỳ Thọ Cà chua - - -
31 VB74 Thanh Hà - Hải Dương Cà chua + - +
32 VB65 Cao Lộc - Lạng Sơn Cà chua + - +
33 TH408 Long Biờn - Hà Nội Cà chua - - -
34 TB101 Vũ Thư - Thỏi Bỡnh Cà chua + + -
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 71
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
M 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
Hỡnh 10: Kết quả xỏc định Begomovirus bằng cặp mồi BegoAFor1/BegoARev1 giếng số 1 đến giếng số 24 tương ứng là cỏc mẫu theo thứ tự trong bảng 15.
Kết quả sử dụng cặp mồi chung cho thấy: phản ứng PCR đều tạo ra 1 sản phẩm cú kớch thước khoảng 1200 bp trờn tất cả 12 mẫu thử đầu tiờn, chứng tỏ sự cú mặt của begomovirus trong mẫu
Như vậy hiện nay bệnh do begomovirus gõy hại trờn cà chua ở vựng Hà Nội và vựng phụ cận, Lõm Đồng, Lạng Sơn…là phổ biến chỳng tụi cũng thấy rằng cặp mồi begoAFor1/begoAReV1 cú khả năng phỏt hiện tốt sự cú mặt của begomovirus.
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 72
M TB101 TVN5 TVN55 TH408 VB20 VB28 VB49 VB63 VB64 VB78 VB79 VB65
Hỡnh 11 : Kết quả kiểm tra PCR bằng cặp mồi TYF1/TYR1 (đặc hiệu TYLCVNV
M TVN1 VB20 VB28 VB49 VB63 VB78 VB79 VB74 VB65
Hỡnh 12: cặp mồi ToF2/ToR2 (đặc hiệu ToLCVV) M là thang DNA (GeneRuler 1 kb, Fermentas)
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 73 Kết quả sử dụng cặp mồi TYLCVNV-sp-R1 / TYLCVNV-sp-F1 (đặc hiệu TYLCVNV) cho thấy mẫu tạo ra tạo cỏc băng đơn và khụng rừ với kớch thước khoảng 1386 bp (Hỡnh 11, Bảng 15), xỏc nhận sự cú mặt của TYLCVNV.
Kết quả sử dụng cặp mồi ToLCVV-sp-F2 / ToLCVV-sp-R2 (đặc hiệu ToLCVV) cho thấy mẫu thử tạo cỏc băng đơn và khụng rừ với kớch thước khoảng 450 bp (Hỡnh 12, Bảng 15), xỏc nhận sự cú mặt của ToLCVV.
Kết quả kiểm tra PCR, chỳng tụi đó phỏt hiện thấy cỏc mẫu từ mẫu số 1 đến mẫu số 7, mẫu 19, 20, 21,cú kết quả (+) với cặp mồi chung chứng tỏ cỏc mẫu này đó nhiễm Begomovirus, nhưng cú kết quả (-) cả 2 virus ToLCVV và TYLCVNV Kết quả này gợi ý rằng cỏc begomovirus nhiễm trờn 2 mẫu này cú thể khụng phải là ToLCVV hay TYLCVNV. Tuy nhiờn danh tớnh của chỳng chỉ xỏc định được dựa trờn phõn tớch trỡnh tự chuỗi gen virus.
Mẫu VB78 cú kết quả (+) với cả 2 virus ToLCVV và TYLCVNV. Kết quả này khụng ngạc nhiờn vỡ nhiễm bệnh hỗn hợp 2 hay nhiều begomovirus trờn cựng một cõy là hiện tượng khỏ phổ biến đối với begomovirus (Fauquet
et al., 2005). Nhiễm bệnh hỗn hợp cú thể gõy hậu quả lớn về tiến húa của begomovirus vỡ chỳng cú thể tỏi sinh thụng qua cơ chế tỏi tổ hợp (Jeske et al.,
2001) dẫn tới hỡnh thành cỏc loài begomovirus mớị Thực tế là virus TYLCVNV đó được phõn lập từ một cõy cà chua nhiễm hỗn hợp với cả ToLCVV và cả 2 virus này chia sẻ một vựng gần như đồng nhất khoảng 1000 nts ở vựng bờn phải của bộ gen (Ha et al., 2008).
Nhận thấy cỏc mẫu từ 8 đến 18, 22, 24, 25, 27, 28, 30, 33 cho kết quả (-) với 3 mồi đặc hiệu chứng tỏ cỏc mẫu này khụng nhiễm begomovirus
Trường Đại học Nụng Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nụng nghiệp……….. 74
PHẦN V
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ