- Lựa chọn cá bố mẹ: Cá bố mẹ đƣợc kéo từ ao nuôi cá bố mẹ lên, dựa quan sát hình thái bên ngoài và kết hợp với vuốt trứng, sẹ để có thể lựa chọn nhanh cá đực, cá cái đáp ứng yêu cầu sinh sản. Cá đực, cá cái đã thành thục sẽ đƣợc tách riêng ở những bể khác nhau để chuẩn bị cho việc thu sản phẩm sinh sản (trứng, sẹ). Cá bố mẹ đƣợc lựa chọn cần có những đặc điểm sau:
+ Cá cái: Bụng to, mềm, có phần phụ sinh dục màu hồng đỏ, mọng, nhô hẳn ra bên ngoài. Vuốt nhẹ hai bên thành bụng thấy có trứng chảy ra là những con cái đã đến thời điểm có thể thu trứng.
+ Cá đực: Bụng mềm, phần phụ sinh dục lồi ra ngoài, vuốt nhẹ 2 bên thành bụng thấy có sẹ màu trắng sữa chảy ra và tan nhanh trong nƣớc là những con có thể thu sẹ cho sinh sản.
- Thu sản phẩm sinh sản, thụ tinh, ấp trứng:
+ Trƣớc lúc thu trứng, tinh trùng, cá bố mẹ cần phải đƣợc gây mê bằng cách ngâm vào bể nƣớc có chứa thuốc mê. Bể có thể tích khoảng 50 – 60 L nƣớc, chứa thuốc mê MSS 222 (30 – 40 ppm) kết hợp với muối ăn (1‰), sục khí liên tục đảm bảo hàm lƣợng oxy hòa tan trên 6 mg/L. Thời gian gây mê cá bố mẹ khoảng 30 - 40 giây.
+ Thu trứng, tinh trùng, thụ tinh và ấp trứng: Lau khô cá, vuốt trứng và tinh trùng riêng, sau đó tƣới tinh trùng lên trứng và trộn đều. Sau khoảng 30 giây, bổ sung nuớc vào vừa đủ ngập trứng và trộn tiếp. Cả quá trình khoảng 20 phút. Lúc này trứng hấp thụ nƣớc và tăng kích thƣớc khoảng 20%. Sau đó cấp thêm nƣớc, rửa trứng và đƣa vào khay ấp.
Khay ấp đƣợc sử dụng kiểu khay ấp của Phần Lan. Trong quá trình ấp, trứng hỏng đƣợc hút ra 4 lần/ngày, bể ấp đƣợc xi phông 1 lần/ngày. Dòng nƣớc chảy trong bể đƣợc điều chỉnh nhẹ nhàng để không làm trứng xáo trộn. Giữ nhiệt độ dao động trong khoảng 12 - 13oC trong suốt quá trình ấp. Cứ 2 - 3 ngày tiến hành ngâm trứng trong dung dịch iodine với tỷ lệ 1:600 (5 – 10 phút) để phòng bệnh (chủ yếu là nấm và vi khuẩn).
Tiến hành xác định một số chỉ tiêu sinh sản nhƣ: Sức sinh sản tuyệt đối, sức sinh sản tƣơng đối, sức sinh sản thực tế, tỷ lệ cá cái đẻ trứng, tỷ lệ thụ tinh, tỷ lệ nở, năng suất trứng, năng suất ra bột,…
2.2.2.3. Nghiên cứu ảnh hƣởng của mật độ ƣơng từ giai đoạn cá bột lên cá giống
Quá trình ƣơng giống cá hồi vân đƣợc chia thành 2 giai đoạn: Từ cá bột thành cá hƣơng 3 - 4 gam/con; từ cá hƣơng thành cá giống 10 – 12 g/con.
Giai đoạn cá bột lên cá hương:
Bố trí thí nghiệm
Hình 2.3. Sơ đồ thí nghiệm ảnh hƣởng của mật độ ƣơng từ cá bột lên cá hƣơng Ảnh hƣởng của mật độ ƣơng lên sinh trƣởng và tỷ lệ sống
của cá hồi vân giai đoạn cá bột lên cá hƣơng
1000 con/m2 1500 con/m2 2000 con/m2
Đánh giá các chỉ tiêu:
- Tốc độ tăng trƣởng về chiều dài và khối lƣợng: AGR, WG
- Tỷ lệ sống
- Các yếu tố môi trƣờng nƣớc - Tình trạng sức khỏe của cá
Hình 2.4. Bể ƣơng cá hồi vân giai đoạn cá bột lên cá hƣơng
+ Bể thí nghiệm: Sử dụng bể composite hình chữ nhật có thể tích 0,4 m3 (2 x 0,5 x 0,4 m). Mức nƣớc trong bể ƣơng đƣợc duy trì trong khoảng 0,2 - 0,3 m tăng dần theo sự gia tăng kích thƣớc của cá. Bể ƣơng đƣợc lắp đặt hệ thống nƣớc chảy tự động với lƣu tốc nƣớc 10 – 15 L/phút. Toàn bộ hệ thống bể ƣơng đƣợc đặt trong nhà có mái che nhằm ổn định các yếu tố môi trƣờng trong suốt quá trình thí nghiệm.
+ Nguồn giống: Cá bột đƣa vào thí nghiệm là nguồn trứng đã thụ tinh đƣợc nhập từ Mỹ. Trứng đƣợc nhập về khi ở giai đoạn xuất hiện điểm mắt, đƣợc ấp nở trong khoảng thời gian 7 ngày để nở ra cá bột. Tuy nhiên, do nguồn trứng này đƣợc thu từ những cá bố mẹ khác nhau, đẻ khác thời điểm nên thời gian để chúng nở hoàn toàn thành cá bột thƣờng kéo dài từ 7 – 12 ngày. Sau 12 ngày tiếp theo, cá bột tiêu hóa hết lƣợng noãn hoàng dự trữ và bắt đầu chuyển sang sử dụng thức ăn ngoài. Khi đó, tiến hành thu vớt cá để bố trí vào các bể thí nghiệm. Nguồn nƣớc: Dùng chung nguồn nƣớc ƣơng cá giai đoan từ bột lên hƣơng. Cá đƣa vào thí nghiệm là những cá thể khỏe mạnh, vận động linh hoạt, đồng đều về kích cỡ, màu sắc tự nhiên, tƣơi sáng, không dị hình, không có biểu hiện bệnh.
+ Nguồn nƣớc cấp: Nƣớc suối trong rừng chảy qua hệ thống ống dẫn bằng nhựa tổng hợp. Trƣớc khi đƣa vào bể ƣơng, nƣớc đƣợc lọc qua lớp mút mịn. Lƣu tốc nƣớc cấp cho mỗi bể ấp khoảng 10 - 15 L/phút.
+ Mật độ ƣơng: Cá hồi vân đƣợc bố trí ƣơng ở 3 mật độ khác nhau 1.000, 1.500 và 2000 con/m2. Thí nghiệm đƣợc thực hiện với 3 lần lặp, thời gian thí nghiệm cho giai đoạn này là 60 ngày.
+ Thức ăn: Trong quá trình ƣơng, cá đƣợc cho ăn thức ăn công nghiệp nhập ngoại Skretting (Pháp) với hàm lƣợng protein (54 – 55%), lipid (16 – 18%) và kích thƣớc (0,4 – 1,1 mm) thay đổi tùy theo giai đoạn phát triển của cá.
+ Khẩu phần thức ăn: Cá đƣợc cho ăn với tỷ lệ 4 – 6% khối lƣợng thân/ngày tùy theo nhiệt độ môi trƣờng (thƣờng là 16oC, tăng khi nhiệt độ nƣớc tăng), kích cỡ (giảm khi kích cỡ cá tăng) và khả năng ăn mồi của cá. Khẩu phần thức ăn đƣợc chia làm 6 – 8 lần ăn/ngày.
Giai đoạn cá hương lên cá giống:
+ Bể thí nghiệm: Sử dụng bể composite hình tròn có đƣờng kính 2 m, độ sâu 0,8 m tƣơng ứng với thể tích 1,8 – 2,0 m3. Mức nƣớc trong bể ƣơng đƣợc duy trì trong khoảng 0,3 - 0,5 m tăng dần theo sự gia tăng kích thƣớc của cá. Bể ƣơng đƣợc lắp đặt hệ thống nƣớc chảy tự động với lƣu tốc nƣớc 10 – 15 L/phút. Toàn bộ hệ thống bể ƣơng đƣợc đặt trong nhà có mái che nhằm ổn định các yếu tố môi trƣờng trong suốt quá trình thí nghiệm.
Hình 2.5. Sơ đồ thí nghiệm ảnh hƣởng của mật độ ƣơng từ cá hƣơng lên cá giống
+ Nguồn nƣớc cấp: Nƣớc suối trong rừng chảy qua hệ thống ống dẫn bằng nhựa tổng hợp. Trƣớc khi đƣa vào bể ƣơng, nƣớc đƣợc lọc qua lớp mút mịn. Lƣu tốc nƣớc cấp cho mỗi bể ấp khoảng 10 - 15 L/phút.
Ảnh hƣởng của mật độ ƣơng lên sinh trƣởng và tỷ lệ sống của cá hồi vân giai đoạn cá hƣơng lên cá giống
200 con/m2 300 con/m2 400 con/m2
Đánh giá các chỉ tiêu:
- Tốc độ tăng trƣởng về chiều dài và khối lƣợng: AGR, WG
- Tỷ lệ sống
- Các yếu tố môi trƣờng nƣớc - Tình trạng sức khỏe của cá
Hình 2.6. Bể ƣơng cá hồi vân giai đoạn cá hƣơng lên cá giống
+ Nguồn giống: Cá đƣa vào thí nghiệm đƣợc ấp nở tƣơng tự nhƣ thí nghiệm trên và ƣơng cho đến khi đạt giai đoạn cá hƣơng (3 – 4 g/con). Khi đạt kích cỡ này, tiến hành thu vớt cá để bố trí vào các bể thí nghiệm. Cá đƣa vào thí nghiệm là những cá thể khỏe mạnh, vận động linh hoạt, đồng đều về kích cỡ, màu sắc tự nhiên, tƣơi sáng, không dị hình, không có biểu hiện bệnh.
+ Mật độ ƣơng: Cá hồi vân đƣợc bố trí ƣơng ở 3 mật độ khác nhau 200, 300 và 400 con/m2. Thí nghiệm đƣợc thực hiện với 3 lần lặp, thời gian thí nghiệm cho giai đoạn này là 40 ngày.
+ Thức ăn: Trong quá trình ƣơng, cá đƣợc cho ăn thức ăn công nghiệp nhập ngoại Skretting (Pháp) với hàm lƣợng protein (52%), lipid (18%) và kích thƣớc (1,5 – 1,9 mm) thay đổi tùy theo kích cỡ cá.
+ Khẩu phần thức ăn: Cá đƣợc cho ăn với tỷ lệ 3 - 4% khối lƣợng thân/ngày tùy theo nhiệt độ môi trƣờng (thƣờng là 16oC, tăng khi nhiệt độ nƣớc tăng), kích cỡ (giảm khi kích cỡ cá tăng) và khả năng ăn mồi của cá. Khẩu phần thức ăn đƣợc chia làm 4 – 6 lần ăn/ngày.
Chăm sóc quản lý:
Thƣờng xuyên kiểm tra nhiệt độ nƣớc, chỉ tiêu ôxy hòa tan (2 lần/ngày, 7 giờ và 14 giờ), pH, hàm lƣợng NH3 và H2S (1 tuần/lần) hoặc khi có dấu hiệu bất thƣờng (mƣa gió, cá hoạt động bất thƣờng,…) bằng các dụng cụ đo môi trƣờng thông dụng (Nhiệt kế, test oxy, pH, NH3 và H2S). Hàng ngày, bể ƣơng đƣợc tiến hành xi phông, chà rửa thành và đáy nhằm loại bỏ thức ăn thừa và cá chết, giữ cho môi trƣờng bể nuôi luôn trong sạch và ngăn ngừa nguy cơ nhiễm bệnh.
Tốc độ sinh trƣởng của cá đƣợc xác định định kỳ (10 ngày/lần) bằng cách thu ngẫu nhiên 30 con trong mỗi bể ƣơng. Khối lƣợng cá đƣợc xác định bằng cân điện tử có độ chính xác 0,1 g.
2.2.3. Phƣơng pháp thu thập và xử lý số liệu
Phương pháp tính toán một số chỉ tiêu:
Hệ số thành thục Gonado Somatic Index - GSI (%): 100
x BW GW
Trong đó: GSI – Hệ số thành thục
GW – Khối lƣợng tuyến sinh dục (g) BW – Khối lƣợng cơ thể cá (g)
Sức sinh sản tuyệt đối (Absolute Fecundity - AF): Sức sinh sản tuyệt đối là toàn bộ số trứng trong buồng trứng ở giai đoạn IV. Sức sinh sản tƣơng đối (Relative Fecundity - RF) là số trứng trên một gam khối lƣợng cơ thể, theo công thức sau:
BW AF
RF (trứng/g)
Xác định số lƣợng trứng ở buồng trứng bằng cách lấy 3 mẫu ở 3 phần khác nhau (đầu, giữa, cuối) của buồng trứng với khối lƣợng ≤ 1g/mẫu. Đếm tất cả các trứng có trong mẫu, lấy trung bình số trứng/1g buồng trứng.
Sức sinh sản thực tế (trứng/kg cá cái):
Sức sinh sản thực tế = Toàn bộ số trứng thu đƣợc sau khi cá đẻ (trứng/kg cá cái) Tỷ lệ đẻ (%):
Tỷ lệ đẻ = (Số cá đẻ trứng / Tổng số cá cho đẻ) x 100% Tỷ lệ thụ tinh (%):
Tỷ lệ thụ tinh = (Số trứng thụ tinh / Số trứng đƣa vào ấp) x 100% Tỷ lệ nở (%):
Tỷ lệ nở = (Số trứng nở / Số trứng thụ tinh) x 100% Năng suất trứng (trứng/kg cá cái):
Năng suất trứng = Số trứng thu đƣợc / KL cá cho đẻ (trứng/kg cá cái) Năng suất cá bột (cá bột/kg cá cái):
Năng suất cá bột = Số cá bột thu đƣợc / KL cá cái cho đẻ (cá bột/kg cá cái) Tốc độ sinh trƣởng tuyệt đối AGR (g/ngày):
1 2 1 2 t t W W AGR (g/ngày)
Tốc độ sinh trƣởng tƣơng đối WG (%):
1 1 2 W W W WG x 100%
Trong đó: W1, W2 – Khối lƣợng cá ở thời điểm t1, t2 (g) t1, t2 – Thời điểm cân cá lần trƣớc và lần sau (ngày) Tỷ lệ sống (%):
Tỷ lệ sống = (Số cá khi kết thúc thí nghiệm / Số cá ban đầu) x 100%
Phương pháp xử lý số liệu:
Toàn bộ số liệu thu đƣợc ở các thí nghiệm xử lý trên phần mềm SPSS 16.0 Phƣơng pháp thống kê mô tả đƣợc sử dụng để phân tích các đặc điểm sinh học sinh sản của cá hồi vân bố mẹ. Phƣơng pháp phân tích phƣơng sai một yếu tố (oneway – ANOVA) và kiểm định Duncan test đƣợc sử dụng để kiểm định sự khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) về giá trị trung bình của các thông số giữa các nghiệm thức trong từng thí nghiệm nhằm đánh giá ảnh hƣởng của mật độ ƣơng lên sinh trƣởng và tỷ lệ sống của cá hồi vân giai đoạn từ cá bột lên cá giống.
Số liệu đƣợc trình bày trong báo cáo là giá trị Trung bình (TB) ± Độ lệch chuẩn (SD) và Trung bình (TB) ± Sai số chuẩn (SE).
CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. Nghiên cứu một số đặc điểm sinh học sinh sản của cá hồi vân 3.1.1. Phân biệt đực cái 3.1.1. Phân biệt đực cái
Việc phân biệt cá hồi vân đực cái bằng đặc điểm hình thái ngoài có ý nghĩa quan trọng trong tuyển chọn và sinh sản nhân tạo loài cá này. Bằng mắt thƣờng, không thế phân biệt đƣợc cá hồi vân đực, cái cho đến khi cá thành thục và chuẩn bị bƣớc vào mùa sinh sản. Khi thành thục, cá hồi vân có thể phân biệt đực cái khá dễ dàng thông qua những dấu hiệu hình thái đặc trƣng xuất hiện trên đầu, trên cơ quan sinh dục ngoài và màu sắc cơ thể cá.
Cá cái thành thục sinh dục có phần phụ sinh dục lồi nhô hẳn ra bên ngoài, tròn và có màu hồng đỏ. Dọc theo cơ quan đƣờng bên và nắp mang có vân màu hồng. Màu sắc của cá sáng. Khi đã thành thục bụng cá to và mềm. Phần đầu cá cái trong hơn và hàm trên dài gần bằng hàm dƣới (Hình 3.1).
Cá đực thành thục, toàn thân cá có màu sậm hơn cá cái, kể cả ở các vây. Hai bên nắp mang và dọc cơ quan đƣờng bên có vân màu hồng đỏ sậm, bụng cá nhỏ hơn. Phần phụ sinh dục lồi, nhô ra ngoài, nhọn và có màu hồng. Đầu cá đực nhọn và phần hàm dƣới kéo dài hơn so với hàm trên (Hình 3.1).
Hình 3.1. Cơ quan sinh dục ngoài (a) và hình dạng đầu (b) của cá hồi vân đực (1) và cái (2)
3.1.2. Quá trình phát triển tuyến sinh dục
Trong nghiên cứu này, sự phát triển tuyến sinh dục của cá hồi vân đƣợc chia làm 6 giai đoạn theo phƣơng pháp phân chia của Nikolski (1963) và Sakun & Butskaia [99]. Kết quả theo dõi sự phát triển tuyến sinh dục của cá hồi vân cái trong 1 năm nuôi tại
Lâm Đồng cho thấy, tuyến sinh dục của loài cá này trải qua đầy đủ 6 giai đoạn tƣơng tự nhƣ nghiên cứu của các tác giả khác cũng trên loài cá này [116, 120, 130].
Giai đoạn I:
Về tổ chức học: Noãn sào ở giai đoạn này gồm có các noãn nguyên bào và các noãn bào non thuộc thời kỳ sinh trƣởng về nguyên sinh chất. Giai đoạn này chỉ tồn tại 1 lần trong đời và tồn tại ở những cá thể thành thục sinh dục lần đầu.
Về ngoại hình: Noãn sào là 2 dải mỏng dài, trong suốt chạy dọc 2 bên cột sống. Hệ thống mạch máu trên bề mặt buồng trứng không có hoặc rất mờ nhạt. Quan sát bằng mắt thƣờng chƣa thể phân biệt đƣợc đực hay cái, để phân biệt phải dựa vào mẫu nhuộm kiểm tra trên kính hiển vi. Thời gian của giai đoạn này dài ngắn khác nhau tùy theo điều kiện chăm sóc, chế độ dinh dƣỡng và môi trƣờng sống [99]. Đối với điều kiện nuôi tại Lâm Đồng, thời gian của giai đoạn này thƣờng kéo dài trong khoảng 1 tháng (Hình 3.2A).
Hình 3.2. Buồng trứng giai đoạn I (A) và tinh sào giai đoạn I (B)
Buồng sẹ cũng có dạng sợi chỉ mảnh trong suốt. Tế bào sinh tinh ở dạng tinh nguyên bào. Giai đoạn này cũng chỉ có ở thời kỳ ấu niên (Hình 3.2 B).
Giai đoạn II:
Về tổ chức học: Đại đa số các tế bào sinh dục trong buồng trứng ở giai đoạn II là những noãn bào thuộc thời kỳ sinh trƣởng nguyên sinh chất (Noãn bào thuộc pha 2 và 3) hoặc một số đã kết thúc sinh trƣởng nguyên sinh chất (Cuối pha 3). Phân tích tiêu bản lát cắt tế bào trứng và đo kích thƣớc của noãn bào cho thấy noãn bào đang tăng dần về mặt kích thƣớc và có thể phân biệt đực, cái vào cuối của giai đoạn phát triển
này. Ngoài ra, buồng trứng còn có noãn nguyên bào và những noãn nguyên bào đang ở những pha đầu tiên của thời kỳ sinh trƣởng nguyên sinh chất, chúng là nguồn noãn bào dự trữ (Hình 3.3 A).
Hình 3.3. Buồng trứng giai đoạn II: Tổ chức học (A) và ngoại hình (B)
Về ngoại hình: Buồng trứng to lên rõ rệt, có màu trắng đục, xanh dƣơng hay vàng nhạt. Dọc theo buồng trứng là một mạch máu lớn, từ đây chúng phân chia thành nhiều mạch máu nhỏ. Vào cuối giai đoạn này, noãn bào có thể quan sát, phân biệt đƣợc bằng mắt thƣờng và tuyến sinh dục chiếm thể tích nhỏ trong xoang bụng của cá. Giai đoạn này tồn tại dài nhất trong quá trình phát triển tuyến sinh dục của cá hồi vân. Trong điều kiện Lâm Đồng, giai đoạn này kéo dài khoảng 13 - 14 tháng (Hình 3.3 B).
Tinh sào cũng có sự gia tăng về kích thƣớc, bắt đầu phồng lên, có màu hồng. Giai đoạn này các tinh nguyên bào bắt đầu phân cắt mạnh để tăng số lƣợng và hình thành các tinh bào.
Giai đọan III:
Về tổ chức học: Trong buồng trứng bắt đầu xuất hiện các noãn bào ở pha không bào hóa. Các noãn bào này chuẩn bị bƣớc vào thời kỳ tích lũy chất noãn hoàng. Noãn