Tất cả các nghiên cƣ́u trên hệ gen đều bắt đầu tƣ̀ việc tách chiết đƣợc DNA hệ gen ở dạng tinh sạch . Đậu tƣơng có hàm lƣợng protein và RNA cao , cho nên nghiên cƣ́u tách chiết để thu nhận dung dịch DNA tinh sạch sẽ gặp khó khăn hơn so với các đối tƣợng khác.
Lá non 7 ngày tuổi của 3 giống đậu tƣơng địa phƣơng có khả năng chịu
hạn khác nhau đã đƣợc phân tích ở trên là giống CYS, CPB, VNS đƣợc sƣ̉
dụng để tách DNA hệ gen . Lá non giữ ở - 850C cho tới khi sƣ̉ dụng . Lá non
đƣợc nghiền thành bột mịn trong cối chày sƣ́ để ở - 850
C. DNA của hệ gen đƣợc chiết ra khỏi tế bào nhờ dung dịch đệm rƣ̉a : Tris HCl 1M; EDTA 0,5M;
pH=8; Sorbotol 2M; NaH2PO4 0,4%; H2O và dung dịch đệm tách : Tris HCl
1M; EDTA 0,5M; pH=8; NaCl 5M; CTAB 4%; H2O. Đặc biệt, với đậu tƣơng,
tế bào của chúng chƣ́a nhiều protein nên chúng tôi xƣ̉ lý dịch chiết nhận đƣợc bằng chloroform để loại bỏ hoàn toàn protein ra khỏi chế phẩm DNA . Tƣ̀ 0,5g mẫu nghiên cƣ́u chúng tôi thu đƣợc 200 µl dung dịch chiết DNA . Các mẫu
DNA có độ tinh sạch đƣợc kiểm tra trên máy quang phổ ở bƣớc sóng λ=
260/280 nm và có đỉnh cƣ̣c đại ở bƣớc sóng 260 nm. Sau khi xác định nồng độ, chế phẩm DNA đƣợc kiểm tra bằng phƣơng pháp điện di trên gel agarose 0,8%.
Hình 3.1. Hình ảnh điện di DNA
tổng số 3 giống đậu tƣơ ng CYS,
CPB, VNS. Ghi chú: M. Marker
Kết quả cho thấy mẫu DNA thu đƣợc sáng rõ và gọn (hình 3.1). Điều này chứng tỏ DNA đƣợc tách chiết từ các giống đậu tƣơng đều tƣơng đối
sạch, không bị đƣ́t gãy , ít tạp chất và có thể sử dụng để nh ân gen bằng kỹ
thuật PCR.
Bảng 3.1. Phổ hấp thụ DNA ở bƣớc sóng 260 nm và 280 nm của 3
giống đậu tƣơng CYS, CPB, VNS
Tên giống A260 A280 A260/A280
Hàm lƣợng
DNA (ng/l)
CYS 0,422 0,214 1,970 1055
CPB 0,352 0,185 1,902 880,0
VNS 0,203 0,112 1,813 507,5
Bảng 3.1 cho thấy, tỷ số A260/A280 dao động trong khoảng 1,8 - 2,0 chứng tỏ rằng các mẫu DNA tách chiết có độ tinh sạch cao, ít lẫn protein có thể sử dụng để tiến hành các nghiên cứu tiếp theo.