2.1.2.1. Phương pháp nghiên cứu đặc điểm thực vật và vi phẫu.
Đặc điểm hình thái được mô tả theo phương pháp mô tả phân tích [21].
Phương pháp làm tiêu bản vi phẫu: thường được sử dụng phổ biến trong nghiên cứu thực vât: dược liệu cắt lát mỏng ngâm nước javen rửa sạch với nước ngâm trong acid acetic rửa sạch bằng nước nhuộm xanh metylen rửa sạch bằng nước nhuộm đỏ son phèn rửa sạch bằng nước đặt vi phẫu vào một giọt glycerin trên phiến kính, đậy lá kính, soi trên kính hiển vi [25].
2.1.2.2. Phương pháp xác định độc tính cấp tính của dịch chiết nghiên cứu
Chọn chuột nhắt trắng khỏe mạnh bình thường, không phân biệt giống, chia ngẫu nhiên thành nhiều lô, mỗi lô cho uống 1 liều. Cho chuột uống với liều cao nhất có thể cho uống được, sau đó giảm dần liều, theo dõi chuột trong vòng 72 giờ, nếu không có triệu chứng ngộ độc, không chết thì chế phẩm không độc ở liều thử. Nếu chuột có biểu hiện ngộ độc ở liều thử hoặc chết cần tiếp tục nghiên cứu để xác định LD50.
2.1.2.3. Phương pháp định lượng glucose huyết
Glucose huyết của chuột thí nghiệm được đo bằng máy đo glucose huyết Sure step kèm theo kít thử tương ứng.
Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng oxi hóa glucose thành acid gluconic được xúc tác bởi enzyme glucose oxidase (GOD) theo phản ứng (1):
Glucose + H2O + O2 GOD Acid gluconic + H2O2 (1) H2O2 tạo thành sẽ bị peroxidase phân huỷ và giải phóng oxy, oxy hóa O- Dianisidin để tạo thành phức chất có màu vàng nâu theo phản ứng (2).
O-Dianisidin + H2O2 Phức hợp màu vàng nâu + H2O (2)
Cường độ màu được xác định bằng phương pháp đo quang tương ứng với lượng glucose trong máu cần định lượng.
Máu đem định lượng glucose huyết là máu tĩnh mạch toàn phần được lấy từ đuôi chuột (bỏ đi giọt máu đầu tiên).
2.1.2.4. Phương pháp gây tăng glucose huyết bằng STZ.
Chuột nhắt trắng được nuôi ổn định trong phòng thí nghiệm, tiêm màng bụng STZ pha trong dung môi citrat (pH: 4,5-5) với liều duy nhất 150mg/kg. Định lượng glucose huyết của chuột trước và 72h sau khi tiêm, lựa chọn những con có glucose huyết tăng cao trên 10 mmol/l để tiến hành thí nghiệm.
2.1.2.5. Phương pháp đánh giá tác dụng hạ glucose huyết của dịch chiết nghiên cứu.
Động vật thí nghiệm được nuôi ổn định trong điều kiện phòng thí nghiệm, sau đó gây ĐTĐ bằng STZ với liều duy nhất 150mg/kg tiêm màng bụng. Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết bằng cách định lượng glucose huyết trước và sau khi cho uống thuốc 4 giờ. Song song tiến hành lô chứng (uống dung dịch pha thuốc) để so sánh.
Đánh giá tác dụng hạ glucose huyết của các lô nghiên cứu bằng phương pháp so sánh giá trị glucose huyết tại thời điểm trước khi uống và sau khi uống 4 giờ.
2.1.2.6. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu được xử lý bằng phương pháp thống kê với sự trợ giúp của phần mềm Microsolf Excel 2003. Sự khác nhau có ý nghĩa thống kê khi P< 0,05 [7].
Kết quả thí nghiệm được biểu thị bằng trị số trung bình cộng/trừ sai số chuẩn (M±SE).