1. Thu nhận trứng từ buồng trứng
Buồng trứng được thu nhận từ lò mổ, đặt trong nước muối 9o/oo ấm (25- 30oC), có bổ sung kháng sinh. Chuyển nhanh về phòng thí nghiệm.Trứng chỉ sử dụng được trong vòng từ 3 - 4 giờ sau đó.
Rửa buồng trứng nhiều lần bằng nước muối ấm đến khi sạch máu, sau đó để buồng trứng vào nước muối sạch và giữ ở 38oC trong điều kiện vô trùng đến khi sử dụng.
Sử dụng một buồng trứng, giữ buồng trứng phía trên becher có chứa dung dịch tyrode (khoảng 50ml) và dùng dao mổ tạo những vết cắt dọc theo
giảng TH CNSHĐV
những nang trứng cho đến khi thấy được dung dịch trong buồng trứng chảy vào becher.
Nhúng buồng trứng vào becher và khuấy mạnh nhiều lần cho trứng có thể rơi vào dung dịch. Lấy buồng trứng ra khỏi becher.
Để trứng lắng trong 5 phút. Dùng pipet hút bỏ dung dịch phía trên, chừa lại khoảng 20ml. Cẩn thận ở bước này, nếu không sẽ mất nhiều trứng. Nếu khi hút dung dịch bị xáo trộn, phải ngưng lại và đợi vài phút cho trứng lắng trở lại.
Rửa như trên hai lần, chừa lại khoảng 20ml dung dịch ở đáy. Chuyển dung dịch tyrode có trứng vào đĩa petri.
Soi trứng dưới kính lúp, đánh giá phân loại trứng. Căn cứ vào vùng tế bào cumulus để đánh giá chất lượng trứng.
Thu nhận trứng bằng dụng cụ hút trứng.
Trứng thu nhận được chuyển vào các epperdorf có 1ml Tyrode. (Chú ý: làm nhanh, chuẩn và tránh để trứng quá lâu ngoài không khí).
giảng TH CNSHĐV
29
Thao tác mổ dọc buồng trứng theo thứ tự A,B,C,D.
THAO TÁC VỚI TRỨNG ĐÃ ĐƯỢC TÁCH RỜI
giảng TH CNSHĐV
Loại dung dịch Tyrode theo thứ tự A,B,C,D.
2. Đánh giá tinh dịch
Trong phần thực tập này, sinh viên khảo sát hai chỉ tiêu để đánh giá vi thể tinh dịch động vật: xác định nồng độ tinh trùng bằng phòng đếm hồng cầu và xác định tỷ lệ tinh trùng sống bằng nhuộm màu tinh trùng.
a. Nồng độ tinh trùng (C) là số tinh trùng hiện diện xác suất trong 1ml tinh
dịch.
Thực hiện việc đếm tinh trùng heo bằng phương pháp đếm hồng cầu.
+ Pha loãng tinh trùng trong ống trộn bạch cầu bằng dung dịch pha loãng (được chuẩn bị trước).
+ Đếm số lượng tinh trùng trong 400 ô nhỏ (của 25 ô lớn) của phòng đếm. (Sinh viên xem lại cách tính trong giáo trình Thực tập Sinh học đại cương). Trong phần này, tinh dịch được pha loãng 20 lần bằng ống trộn bạch cầu. Công thức tính như sau:
C = 10000xDxN
