Phương pháp Kaufmann dựa trên phản ứng của Br2 và NaBr lên các nối đôi của acid béo chưa no. Dung dịch này được pha trong rượu methylic.
NaBr.Br2 là một hợp chất không bền trong dung dịch. Ái lực hóa học của hợp chất này không đủ để xảy ra phản ứng thay thế hydro. Phản ứng giữa NaBr.Br2 và các nối đôi của acid béo xảy ra như sau:
NaBr.Br2 + - CH=CH - - CH(Br) – CH(Br) - + NaBr
Dùng KI để giải phóng I2 từ lượng NaBr.Br2 dư; sau đó chuẩn độ I2 tạo thành bằng Na2S2O3 như sau:
Nabr.Br2 + 2KI NaBr + 2KBr + I2 I2 + Na2S2O3 Na2S4O6 + 2NaI
4.1.3.5. Dụng cụ
- Erlen có nút nhám - Pipet
- Buret 25ml - Cân phân tích 4.1.3.6. Hóa chất - Chloroform. - Dung dịch KI 15%. - Hồ tinh bột 1%.
- Dung dịch Na2S2O3 0,1N pha từ ống chuẩn
- Thuốc thử Kaufmann; 1l methanol + 150g NaBr khuấy kỹ đến bão hòa. Lọc và thêm vào đó 5,5 mo Brom lỏng. Bảo quản trong chai thủy tinh màu nâu.
4.1.3.7. Tiến hành
Cân vào erlen khoảng 100-150mg mẫu. Thêm vào 5ml chloroform khan để hòa tan chất béo và 5ml thuốc thử Kaufmann, đậy nắp lại. Lắc đều và để vào chỗ tối 30 phút, lấy ra, thêm vào 5ml KI 15%, lắc đều và thêm vào 25ml nước cất, lắc tròn thật kỹ. Định phân lượng iod bằng Na2S2O3 0,1N cho đến khi có màu vàng nhạt, thêm vài giọt hồ tinh bột, dung dịch có màu sẫm, định phân tiếp đến khi mất màu. Lắc kỹ để tránh iod còn nằm trong chloroform.
Thực hiện 2 mẫu thí nghiệm ( mẫu thử) và 2 mẫu kiểm chứng ( mẫu trắng).
Việc cân mẫu thử thay đổi theo chỉ số iod dự kiến, được qui định như sau: Chỉ số iod dự
kiến
Khối lượng mẫu thử
Chỉ số iod dự kiến
Khối lượng mẫu thử <5 5-20 21-50 3,00 1,00 0,40 51-100 101-150 151-200 0,20 0,13 0,10 Na2S2O3 0,1N
Lấy trị số trung bình của 2 lần thử với điều kiện sai số tối đa là:
Chỉ số iod Sai số 1-50 50-100 100-200 0,4 0,8 1,0
Kết quả chỉ được chấp nhận với điều kiện các phép thử phải được tiến hành liên tiếp nhau, cùng một người phân tích, sử dụng cùng các thiết bị trên cùng một mẫu thử.