II.2 NGHIÊN CỨU VỀ KHẢ NĂNG KHỬ TRÙNG VÀ MỨC ĐỘ GÂY ĐỘC ĐỐI VỚICƠ THỂ VẬT NUÔI TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM. CƠ THỂ VẬT NUÔI TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM.
II.2.1 Nghiên cứu độc tính của Anôlít trên chuột
Mặc dù độc tính của Anôlít đã được nhiều công trình nghiên cứu xác nhận thuộc nhóm không độc hại, nhưng để đảm bảo an toàn vệ sinh môi trường chăn nuôi trước khi tiến hành nghiên cứu khảo nghiệm ứng dụng dung dịch Anôlít làm chất khử trùng chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu độc tính của dung dịch Anôlít được điều chế trên thiết bị ECAWA.
Mục tiêu nghiên cứu:
- Nghiên cứu ảnh hưởng của dung dịch Anôlít đối với chuột khi sử dụng dung dịch cho chuột uống trong thời gian dài (15 - 30 ngày) thông qua phân tích các thành phần máu nhằm xác định liều độc trường diễn.
- Xác định liều gây độc cấp tính trên chuột.
- Từ kết quả thu được, kết luận mức độ độc tính của dung dịch Anôlít và khả năng ứng dụng trong thực tiễn.
Đối tượng khảo nghiệm :
Chuột nhắt trắng có trọng lượng 18÷20g/con
Cách thức thực hiện :
Chuột được mua ở Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương và nuôi bằng thức ăn do Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp.
Dung dịch Anôlít có nồng độ clo hoạt tính 300mg/lít, được sản xuất trên thiết bị ECAWA.
II.2.1.1 Nghiên cứu hiệu ứng độc trường diễn của Anôlít
+ Chuột thí nghiệm được chia làm 3 lô thí nghiệm mỗi lô 10 con với điều kiện cho ăn giống nhau:
Lô 1: Uống nước sôi để nguội (lô đối chứng)
Lô 2: Uống nước sôi để nguội và Anôlít với liều lượng 1ml/con.ngày
Lô 3: Uống nước sôi để nguội và Anôlít với liều lượng 2ml/con.ngày.
+ Sau thời gian nuôi dưỡng 14 và 30 ngày, tiến hành lấy ngẫu nhiên 5 mẫu máu ở mỗi lô và gửi đi xét nghiệm tại khoa huyết học của bệnh viện Bạch Mai. Kết quả nghiên cứu hiệu ứng độc trường diễn của Anôlít thực hiện trên chuột được dẫn ra trên bảng 2.2 và 2.3 [phụ lục].
Từ những kết quả thực nghiệm trình bày trên bảng 2.2 và 2.3 [phụ lục] có thể thấy, đối với tất cả các lô chuột được cho uống liên tục trong thời gian dài (14 hoặc 30 ngày) mỗi ngày 1ml hoặc 2ml dung dịch Anôlít nồng độ 300mg/lít, các chỉ số về máu hầu như không thay đổi so với mẫu đối chứng trong khoảng sai số cho phép. Kết quả cho thấy, kể cả với thời gian thử nghiệm cho chuột uống liên tục 30 ngày mỗi ngày 2ml dung dịch Anôlít với nồng độ 300mg/lít, độc tính trường diễn của Anôlít thực tế không được phát hiện.
II.2.1.2 Nghiên cứu xác định liều gây độc cấp tính .
Chọn các lô chuột giống nhau về thể trạng có trọng lượng từ 18÷20g/con chia làm 4 lô nhỏ, mỗi lô 5 con:
Lô 1: Tiêm nước cất vào xoang bụng với liều lượng 4ml/con
Lô 2: Tiêm dung dịch Anôlít vào xoang bụng với liều lượng 4ml/con.
Lô 3: Tiêm nước cất vào xoang bụng với liều lượng 6ml/con
Lô 4: Tiêm dung dịch Anôlít vào xoang bụng với liều lượng 6ml/con.
Kết quả thí nghiệm : Sau khi tiêm và theo dõi chuột trong vòng 10 ngày không có con nào bị chết, chỉ thấy trong mấy giờ đầu chuột có biểu hiện bị kích thích rồi sau đó trở lại trạng thái bình thường. Theo phương pháp tính liều gây độc của Hodge và Sterner (1943) thì liều gây độc không thực tế là 5÷15mg/1g thể trọng. Lô 2 và Lô 4 được thử với liều 200mg dung dịch Anôlít trên 1g thể trọng chuột và 300mg/1g thể trọng chuột. Điều đó chứng tỏ Anôlít với nồng độ ≤
300mg/lít thực tế không gây độc hại cho động vật máu nóng.
Các kết quả này cùng với kết quả khảo sát độc tính trường diễn nêu trên phù hợp với các kết quả nghiên cứu về độc tố của Anôlít do các nhà khoa học thú y LB Nga công bố [17], trong đó khẳng định rằng, đối với các lô chuột bạch với trọng lượng cơ thể ~200g/con, nếu trong vòng 4 tháng liên tục tiêm vào xoang bụng của chuột mỗi ngày 10ml dung dịch Anôlít nồng độ clo hoạt tính 100mg/lít, thì chỉ phát hiện một số biểu hiện không đáng kể của quá trình ôxy hóa các protein chứa sunphohydrin và sự suy giảm ít nhiều hoạt tính cholinesterase trong mô não; còn với nồng độ [Cl]ht = 50mg/lít, thì Anôlít hoàn toàn không ảnh hưởng đến thành phần của các nhóm sunphohydrin và disunphua trong máu cũng như hoạt tính cholinesterase trong máu và trong mô não của chuột
II.2.2 Nghiên cứu trong phòng thí nghiệm hiệu lực của Anôlít trên đối tượng là vi sinh vật môi trường và vi khuẩn gây bệnh cho vật nuôi :
Mục đích nghiên cứu:
Xác định được hiệu lực của chế phẩm Anôlít diệt vi sinh vật môi trường và vi khuẩn gây bệnh. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
II.2.2.1 Đối tượng khảo nghiệm và Phương pháp thực hiện.
• Đối tượng khảo nghiệm
- Coliform - Staphyloccocus aureus
- E. coli - Pasterella multocida
- Salmonella. sp - Clostridium perfringens
- Aspergilus. sp - Tổng vi khuẩn hiếu khí
- Bacillus subtilis
• Phương pháp thực hiện
Phân lập và giám định các chủng vi sinh vật trong môi trường chăn nuôi gia cầm và gia súc. Các mẫu phân, chất thải, mẫu bệnh phẩm được thu thập từ các cơ sở chăn nuôi, phân lập và giám định các chủng vi khuẩn trên. Nuôi cấy trên môi trường cơ bản, đếm số và đưa vào sử dụng trong thí nghiệm. Nuôi cấy trong điều kiện 370C.
- Bố trí các lô thí nghiệm để đánh giá:
+ Đo nồng độ của Anôlít trong thí nghiệm + Thời gian tiếp xúc
+ Tỷ lệ sống sót (hoặc tỷ lệ chết) + Phân lập lại trên môi trường cơ bản
+ Đếm số trước và sau thí nghiệm (lặp lại thí nghiệm 3 lần)
II.2.2.2 Kết quả xác định khả năng diệt khuẩn của Anolit trong phòng thí nghiệm.
Thí nghiệm 1 : 9ml canh trùng của các loại vi khuẩn ở các nồng độ khác nhau được xử lý với 1 ml dung dịch Anôlit. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần vào những thời điểm khác nhau. Kết quả khử trùng của Anôlít với nồng độ 30 mg/lít thể hiện trên bảng 2.4 a,b,c [phụ lục] cho thấy cả 3 lần thí nghiệm đều cho kết quả tương đương nhau: đa số các loài vi sinh vật khảo sát đều bị tiêu diệt sau 15 phút tác dụng của Anôlít, riêng nấm (Aspergilus sp.) và nha bào (B. Subtilis) – 90 - 95%. Các tế bào nấm chỉ bị tiêu diệt hoàn toàn sau 30 phút tác dụng của Anôlít với nồng độ 30 mg/lít, trong khi để tiêu diệt hoàn toàn nha bào đòi hỏi thời gian tác dụng hoặc nồng độ clo hoạt tính phải lớn hơn nữa.
Thí nghiệm 2 : Kết quả của thí nghiệm 1 cho thấy nồng độ 30 mg/lít của Anôlít chưa đủ mạnh để có thể giảm mật độ vi khuẩn xuống tới mức độ cần thiết. Vì vậy chúng tôi đã tiến hành thực hiện thí nghiệm thứ hai, trong đó 9 ml dung dịch Anôlit được thêm vào 1ml canh trùng của mỗi
loài vi khuẩn để thu nhận dung dịch hỗn hợp với nồng độ clo hoạt tính 270 mg/lít. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần vào những thời điểm khác nhau. Kết quả khử trùng của Anôlít nồng độ 270 mg/lít trình bày trên bảng 2.5 a,b,c [phụ lục] cho thấy hầu hết các loài vi khuẩn với mật độ 1012 vi khuẩn đã bị vô hiệu hóa hoàn toàn sau 5 tiếp xúc, trong khi tổng VKHK giảm 10 bậc, bào tử
B. subtilis giảm 9 bậc và nấm Aspergilus sp. với nồng độ 1011cfu/ml bị tiêu diệt hoàn toàn. Sau 30 phút tác dụng với Anôlít tất cả các loài vi sinh vật bị tiêu diệt hoàn toàn, ngoại trừ vài chục con Bacillus subtilis sống sót.
− Kết quả nghiên cứu về độc tính trường diễn và cấp tính đã khẳng định dung dịch HHĐH Anôlít điều chế trên thiết bị ECAWA là một chất khử trùng không có biểu hiện độc tính ngay cả trong trường hợp chuột thí nghiệm (cân nặng 18-20g/con) nhận một lượng đáng kể dung dịch Anôlít nguyên chất (2ml mỗi ngày trong thời gian một tháng, hoặc tiêm xoang bụng 6ml/con mỗi ngày trong thời gian 10 ngày).
− Tác động của Anôlít lên các đối tượng vi sinh vật môi trường và vi khuẩn gây bệnh đã được khảo sát trên 9 loài bao gồm vi khuẩn, nấm và bào tử. Kết quả cho thấy với nồng độ clo hoạt tính 270 mg/lít (Dịch vi khuẩm : Anôlít = 1 : 9) Anôlít có khả năng làm giảm mật độ của hầu hết các loài vi khuẩn xuống 12 bậc trong 15 phút tiếp xúc; riêng đối với vi khuẩn bào tử - từ 9 đến 10 bậc.
Qua các kết quả nghiên cứu trong phòng thí nghiệm và được sự kiểm định của VIỆN VỆ SINH DỊCH TỄ TRUNG ƯƠNG kết luận[ phụ lục 2,3]: Dung dịch anônít có khả năng diệt hoàn toàn các chủng vi khuẩn thí nghiệm Ecoli và Colifrom, có tác dụng diệt vi khuẩn Gram âm, Gram dương, trực khuẩn lao, vi khuẩn có nha bào và nấm trong 1phút, 5 phút, 10 phút tiếp xúc. Đồng thời không có mùi khó chịu, không gây dị ứng, đảm bảo an toàn cho người sử dụng.và có thể dùng được trong các lĩnh vực gia dụng và y tế,có thể sử dụng để xử lý môi trường bệnh viện, môi trường chăn nuôi…