CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP CỐ ĐỊNH
2.2.7.3 Xác định hoạt tính amylase hòa tan.
Hóa chất:
- Dung dịch tinh bột 1%: Cân 1g tinh bột cho vào 10ml nước cất và xử lý nhiệt ở 100oC cho đến khi tinh bột được hòa tan. Sau đó định mức dung dịch trên thành 100ml bằng dung dịch đệm phosphate pH 6.
- Dung dịch đệm:
• Dung dịch mononatri orthophosphate 0,2M (a): 31,2g NaH2PO4 hòa tan và định mức đến 1000ml.
• Dung dịch dinatri hydrophosphate 0,2M (b): 53,05g Na2HPO4.7H2O hoặc 71,6g Na2HPO4.12H2O hòa tan và định mức đến 1000ml.
A C
Bảng 2.4: Tỷ lệ pha dung dịch đệm.
Cách tiến hành xác định hoạt tính enzyme hòa tan:
- Pha loãng enzyme.
- Cho vào erlen: 25ml hồ tinh bột 1% ở pH 6 ủ ở 50oC. Sau khi mẫu đạt 50oC cho vào 1ml enzyme đã pha loãng, ủ 10 phút.
- Sau khi thủy phân, rút 1ml mẫu cho vào ống nghiệm đã chứa sẵn 2ml DNS. - Mẫu trắng: 1ml nước và 2ml DNS.
- Đun cách thủy các ống nghiệm ở 100oC trong 5 phút. Sau đó làm nguội nhanh bằng nước lạnh, rồi thêm vào mỗi ống nghiệm 10ml nước cất.
- Lắc đều và đo mật độ quang ở bước sóng 540nm.
Cách tiến hành xác định hoạt tính enzyme cố định:
- Cho vào erlen: 1g enzyme cố định ủ ở 50oC. Sau đó cho vào 25ml hồ tinh bột 1% ở pH 6 ủ 10 phút.
- Sau khi thủy phân, lọc để thu dung dịch đường, định mức lên 100ml. - Rút 1ml mẫu cho vào ống nghiệm đã chứa sẵn 2ml DNS.
- Mẫu trắng: 1ml nước và 2ml DNS.
- Đun cách thủy các ống nghiệm ở 100oC trong 5 phút. Sau đó làm nguội nhanh bằng nước lạnh, rồi thêm vào mỗi ống nghiệm 10ml nước cất.
- Lắc đều và đo mật độ quang ở bước sóng 540nm.
Dựa vào đường chuẩn tính được hàm lượng glucose tạo thành. Công thức tính hoạt tính enzyme:
Với:
G là lượng đường khử tính theo glucose tạo ra sau phản ứng thủy phân, mg F là hệ số pha loãng enzyme
V là thể tích dung dịch enzyme dùng trong phản ứng, ml (hoặc khối lượng chế phẩm enzyme, g)