Phân lập các hợp chất

CHƯƠNG 2. THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.3. Phân lập các hợp chất

2.3.1. Phương pháp chung chiết xuất

Các mẫu Hải miên được rửa sạch, cắt thành các miếng nhỏ, sau đó được ngâm chiết siêu âm với methanol trên thiết bị siêu âm ở nhiệt độ 400C. Các dịch chiết sau đó được gom lại và tiến hành lọc bằng giấy lọc để loại bỏ cặn thô. Sau đó, dịch lọc được chưng cất để loại bỏ dung môi methanol bằng thiết bị quay cất chân không dưới áp suất thấp. Sau khi cất loại methanol ta thu được cặn chiết tổng methanol của mẫu nghiên cứu.

2.3.2. Phân lập các hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis

Mẫu Dysidea fragilis (2 kg) được rửa sạch, cắt thành các miếng nhỏ và được ngâm chiết siêu âm với methanol (6 L×3 lần, ở 40°C, thời gian 5h). Sau đó loại bỏ

dung môi dưới áp suất giảm thu được 120 g cặn chiết methanol (). Cặn chiết này được phân bố đều trong nước cất và chiết với CH2Cl2 thu được cặn CH2Cl2 (1, 45,0 g) và cặn nước (2, 75,0 g). Cặn 1 được tiến hành phân tách trên cột silica gel với hệ dung môi n-hexane:acetone (40:10:1, v/v) thu được 5 phân đoạn 1A (6,0 g), 1B (4,2 g), 1C (2,5 g), 1D (10,5 g) và 1E (20,0 g).

Phân đoạn 1B tiếp tục được phân tách trên cột sắc ký pha đảo RP-18 với hệ dung môi acetone:nước (3:1, v/v) thu được 2 phân đoạn nhỏ hơn ký hiệu là 1B1 (2,5 g) và 1B2 (1,0 g). Phân đoạn 1B2 được tinh chế trên cột sắc ký sử dụng silica gel pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane:EtOAc (4:1, v/v) thu được hợp chất 15 (20,0 mg).

Phân đoạn 1C được phân tách thành 4 phân đoạn nhỏ hơn, 1C1 (0,25 g), 1C2 (0,5 g), 1C3 (0,4 g) và 1C4 (0,45 g), trên cột sắc ký silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải n-hexane:CH2Cl2:acetone (1:1:0,05, v/v/v). Hợp chất 5 (8,0 mg) thu được từ phân đoạn 1C1 sau khi tiến hành sắc ký trên cột Sephadex LH-20 với dung môi rửa giải methanol. Phân đoạn 1C2 được tinh chế trên cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải n-hexane:EtOAc (3:1, v/v) thu được 2 hợp chất 7 (8,0 mg) và hợp chất 8 (15,0 mg). Phân đoạn 1C3 được tinh chế trên cột sắc ký pha đảo RP- 18 với hệ dung môi rửa giải acetone:nước (2:1, v/v)

Hình 2.3. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài hải miên Dysidea fragilis

thu được hai hợp chất 4 (8,0 mg) và hợp chất 11 (30,0 mg). Hợp chất 6 (6,0 mg) thu được sau khi tinh chế phân đoạn 1C4 trên cột pha đảo RP-18 với hệ dung môi rửa giải acetone:nước (1,5:1, v/v).

Phân đoạn 1D được phân tách trên cột silica gel với hệ dung môi n- hexane:CH2Cl2:acetone (1:1:0,3, v/v/v) thu được 4 phân đoạn nhỏ hơn ký hiệu là 1D1-1D4. Phân đoạn 1D1 (1,35 g) được tinh chế bằng cột sắc ký pha đảo RP-18 với hệ dung môi rửa giải acetone:nước (1,5:1, v/v) thu được 2 hợp chất 13 (13,0 mg) và hợp chất 14 (13,0 mg). Phân đoạn 1D2 (1,3 g) được chạy sắc ký trên cột silica gel với hệ dung môi n-hexane:CH2Cl2:methanol (1:1:0,015, v/v/v) thu được hợp chất 1 (10,0 mg), hợp chất 2 (10,0 mg) và hợp chất 10 (8,0 mg). Phân đoạn 1D3 (0,6 g) được chạy sắc ký trên cột pha đảo RP-18 rửa giải bằng hệ dung môi acetone:nước (2:1, v/v) thu được 2 hợp chất 3 (11,0 mg) và hợp chất 9 (20,0 mg). Hợp chất 12 (6,0 mg) thu được từ phân đoạn 1D4 (0,5 g) sử dụng sắc ký cột silica gel với hệ dung môi CH2Cl2:acetone (3,5:1, v/v).

2.3.3. Phân lập các hợp chất từ loài hải miên Haliclona oculata

Mẫu hải miên Haliclona oculata (3,2 kg) được rửa sạch, cắt thành các miếng nhỏ và được ngâm chiết siêu âm với methanol (5 L×3 lần, ở 40°C, thời gian 5h). Dịch chiết được cô, loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cặn chiết MeOH (HO, 160 g). Cặn chiết này tiếp tục được phân bố trong nước và chiết phân đoạn với CH2Cl2; cất loại dung môi thu được cặn chiết CH2Cl2 (30,0 g) và cặn nước (130,0 g). Cặn chiết CH2Cl2 được phân tách trên cột sắc ký silica gel pha thường, rửa giải với hệ dung môi n-hexane:acetone (100:1→0:1, v/v) nhận được 5 phân đoạn HOD1– HOD5.

Phân đoạn HOD2 (6,1 g) được tiến hành chạy sắc ký cột trên cột silica gel pha thường rửa giải với hệ dung môi dichloromethane:acetone (10:1, v/v) thu được 3 phân được nhỏ hơn ký hiệu là HOD2A-HOD2C. Hợp chất 16 (6,0 mg) được phân lập từ HOD2A (150 mg) bằng sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải n- hexane:EtOAc (3,5:1, v/v). Phân đoạn HOD2B (200 mg) được phân tách trên cột pha đảo RP-18 rửa giải bằng hệ dung môi acetone:nước (5:1, v/v) thu được hợp chất 19 (15,0 mg). Hợp chất 20 (14,0 mg) được phân lập từ HOD2C(210 mg) bằng sắc ký cột silica gel pha thường với hệ dung môi rửa giải n-hexane:acetone (4:1, v/v).

Hình 2.4. Sơ đồ phân lập các hợp chất từ loài Haliclona oculata

Phân đoạn HOD3 (4,2 g) được phân tách trên cột pha đảo RP-18 rửa giải bằng hệ dung môi acetone: nước (2,5:1, v/v) thu được 2 phân đoạn HOD3A (220 mg) và HOD3B (310 mg). Hợp chất 21 (12,0 mg) được phân lập từ phân đoạn HOD3B trên cột silica gel rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2:acetone (7:1, v/v).

Phân đoạn HOD4 (5,8 g) được phân tách trên cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane:acetone (2:1, v/v) thu được 2 phân đoạn HOD4A (500 mg) và HOD4B (720 mg). Hợp chất 17 (23,0 mg) được phân lập từ phân đoạn HOD4B trên cột pha đảo RP-18 rửa giải bằng hệ dung môi acetone:nước (2,5:1, v/v).

Phân đoạn HOD5 (8,7 g) được phân tách trên cột silica gel pha thường rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane:EtOAc (1,5:1, v/v) thu được 3 phân đoạn HOD5A (820 mg), HOD5B (620 mg) và HOD5C (560 mg). Hợp chất 18 (12,0 mg) được phân lập từ phân đoạn HOD5C trên cột silica gel rửa giải bằng hệ dung môi CH2Cl2:acetone (2:1, v/v).