4.1 Kết quả mô tả triệu chứng bệnh khảm lá trên 2 giống khoai mì bị bệnh KM505
và KM140
4.1.1 Kết quả mô tả triệu chứng trên lá non bị bệnh của giống KM505 QO Thông tin và đặc điểm:
Giống khoai mì KM505 có một số đặc điểm như thân thắng, không phân cành, bột trang, hàm lượng bột từ 27,5% - 28.4%. Có năng suất từ 34-36 tan/ha, thích nghi với vùng
sinh thái Duyên Hải Nam Trung Bộ.
QO) Triệu chứng:
Vết đốm vàng bat đầu xuất hiện ở dau thùy lá của lá non, các vùng mô màu xanh lá và màu vàng tương phản nhau, lá bị nhiễm virus gây bệnh làm cho mép lá bị biến dạng nhẹ, ở đầu thùy lá có thé cong ít hoặc nhiều, trên bề mặt lá nơi có vết đốm vàng có biểu hiện san sùi nhẹ, không bị biến dạng nhiều, phan lá xanh vẫn còn chiếm phan lớn. Sự cong các thùy lá ở giai đoạn lá còn non làm giảm diện tích tiếp xúc ánh nắng mặt trời qua đó làm giảm hiệu quả quá trình quang hợp dẫn đến sự sinh trưởng của cây và năng suất của
củ giảm rõ rệt.
Hình 4. 1 Triệu chứng gây hại trên lá non của giống khoai mì KM505
19
4.1.2 Kết quả mô tả triệu chứng trên lá già bị bệnh của giống KM505
L] Triệu chứng:
Khi lá già đi cũng là lúc virus gây bệnh khảm đã phân tán trên khắp bề mặt lá làm cho vết đốm trải đài trên toàn bộ bề mặt lá, từ đầu thùy lá đi vào sâu trong cuống lá, mép lá biến dạng nhiều, teo nhỏ, làm thu hẹp diện tích bề mặt lá, các thùy lá lúc này biến dạng
nhiêu, vai chỗ xuât hiện vet cháy mau nâu.
Hình 4. 2 Triệu chứng gây bệnh trên lá già của giống khoai mì KM505 4.1.3 Kết quả mô tả triệu chứng trên thân bị bệnh của giống KM505
Khi so sánh thân cây có biểu hiện bệnh với thân cây của giống khỏe mạnh thì không có dấu hiệu khác thường. Nhưng qua sự phát triển trong quá trình sinh trưởng có thé thấy được những cây bị bệnh sẽ còi cọc, lùn và kém phát triển hơn so với những giống khỏe
mạnh bình thường.
20
—
`
rằ Vv
_xX
a) Thân cây giống khảm KM505 b) Thân cây giống khỏe mạnh HN1
Hình 4. 3 So sánh giữa thân giống KM505 và giống HN1 4.1.4 Kết quả mô tả triệu chứng trên lá non bị bệnh của giống KM140
1 Thông tin và đặc điểm của giống KM140:
Giống khoai mì KM140 Là con lai của tô hợp lai KM98-1 x KM36, được công nhận chính thức vào năm 2010 và được Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn cho phép sản xuất trên toàn quốc. Giống KM140 có một số đặc điểm như:
- Thời gian thu hoạch hợp lý từ 7-10 tháng sau khi trồng.
- Bình quân năng suất củ tươi đạt 33,4 tân/ha, hàm lượng tinh bột 27,2%
- Thân xanh, thắng, ngọn xanh, cây cao vừa phải, không phân nhánh, thích hợp với điều kiện sinh thái Việt Nam.
- Dạng củ đồng đều, thịt củ màu trắng, thích hợp với chế biến và thị trường
C1 Triệu chứng:
Tương tự như KM505, Lá non của giống KM140 bị bệnh khảm cũng xuất hiện vết đốm vàng trên lá, nhưng biểu hiện nặng hơn rất nhiều, vết đồm xuất hiện hầu như trên toàn bộ thùy lá, phiến lá hay bề mặt lá có vết san sùi, bệnh làm cho lá bị cong và xoăn nhiều. Mép lá biến dang nặng, teo nhỏ, thu hẹp vào bên trong gân lá.
21
Hình 4. 4 Triệu chứng gây bệnh trên lá non của giống khoai mì KM140 4.1.5 Kết quả mô tả triệu chứng trên lá già bị bệnh của giống KM140
L] Triệu chứng:
Ở lá già của giống KM140 cũng có những biểu hiện đặc trưng của bệnh kham lá, dom vàng khắp bề mặt lá, xuất hiện nhiều hơn trên lá non, nơi xuất hiện đốm vàng làm bề mặt
lá trở nên sân sùi, mép lá teo nhỏ, thùy lá cong veo, một vai chỗ xuât hiện vét cháy.
4.1.6 Kết quả mô tả triệu chứng trên thân bị bệnh của giống KM140
So sánh với thân cây của giống khỏe mạnh thì thân cây bị mắc bệnh khảm của giống KM140 không có nhiều khác biệt.
a) Thân cây giống khảm KM140 b) Thân cây giống khỏe mạnh HN5
Hình 4. 6 So sánh thân giống KM140 và giống HN5
4.2 Kết quả phát hiện các chủng virus gây bệnh khảm lá khoai mì bằng phương
pháp Multiplex PCR
4.2.1 Kết quả điện di tổng số DNA của 6 giống thu thập được
(1-5): Giống HN97; (6-10): Giống HN3; (11-15): Giống HN5; (16-20): Giống HN1;
(21-26): Giống KM505; (27-32): Giống KM140
23
Vì hàm lượng và chất lượng DNA có trong mẫu là vô cùng quan trọng khi thực hiện thí nghiệm nên khi thiếu hụt hoặc DNA không đủ tiêu chuẩn cũng sé ảnh hưởng ít nhiều đến những thí nghiệm sau này. Từ hình 4.7 cho thấy quá trình thực hiện ly trích DNA và điện đi tổng số thu được DNA có chất lượng tương đối tốt, tinh sạch, không lẫn protein và các tạp chất, không đứt gãy, đáp ứng được yêu cầu cho phản ứng PCR phát hiện virus khảm
lá trên khoai mì.
4.2.2 Kết quả PCR va Multiplex PCR phát hiện các chủng virus trên giống bị kham
KMS505
4.2.2.1 Kết quả PCR phát hiện chủng virus SLCMV trên giống bi khảm KM505 Sau khi điện di tổng số kiểm tra chất lượng và sự hiện diện của DNA, ta thực hiện phan ứng PCR va Multiplex PCR dé xác định các chủng virus gây bệnh kham lá trên các giống khoai mì. Thực hiện PCR phát hiện chủng Sri Lankan Cassava Mosaic virus (SLCMV) với tô hợp primer SLCMV-E và SLCMV-R xác định sự hiện diện của virus dựa trên band có cùng kích thước với đối chứng dương là (1056 bp).
M (Œ) () M5051) M505(3) M505(5)
M505(2) M505(4) M505(6)
10000
1056 bp SLCMV
Hình 4. 8 Kết qua phan ứng PCR phát hiện SLCMV trên 6 mẫu của giống KM505;
M: ladder Ikb ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm ; Ký hiệu giống KM505: M505;
Dựa vào kết điện di sản pham sau PCR ở hình 4.8 cho thấy cả 6 mẫu lá khoai mì giống KM505 đều xuất hiện band có kích thước (1056 bp) trùng với kích thước của đối chứng dương. Tỉ lệ mẫu nhiễm bệnh là 100%.Trong đó, mẫu thứ 6 là mẫu lá khoai mì KM505 chưa biểu hiện triệu chứng rõ ràng, qua kết quả trên ta thay mặc dù chưa biểu hiện ra bệnh khảm lá rõ ràng nhưng bên trong mẫu lá đó đã bị nhiễm virus và thời gian sau lá sẽ bắt đầu có triệu chứng.
24
4.2.2.2 Kết quả Multiplex PCR phát hiện 2 chủng virus ACMV và EACMV trên giống bị khảm KM505
Thực hiện phản ứng Multiplex PCR phát hiện 2 chủng virus African Cassava Mosaic Virus (ACMV) có kích thước (368 bp) va East African Cassava Mosaic Virus
(EACMV) có kích thước (650 bp) với tổ hop primer gồm CMBRep/F, ACMVRep/R,
EACMVRep/R, trong đó primer CMBRep/F là Forward Primer cho cả 2 chủng Virus.
Hình 4. 9 Kết qua phản ứng Multiplex PCR
phát hiện AMCV và EACMV trên 6 mẫu của giống KM505;
M: ladder 100bp ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm;
Ký hiệu giống KM505: M505;
Kết quả hình 4.9 cho thấy sự hiện diện của cả 2 chủng virus trên cả 6 mẫu của giống khoai mì KM505, DNA của virus được khuếch đại sau khi điện di xuất hiện band có kích thước lần lượt là (368 bp) và (650 bp) cùng kích thước với đối chứng dương. Tỉ lệ mẫu
nhiễm bệnh kham lá là 100%. Tương tự mẫu thứ 6 là mẫu chưa có triệu chứng, nhưng cũng xuất hiện band có kích thước tương tự nên mẫu lá này đã có sự hiện diện của 2 chủng virus
ACMV và EACMV.
4.2.3 Kết quả PCR và Multiplex PCR phát hiện các chủng virus trên giống bị khảm
KM140
4.2.3.1 Kết quả PCR phát hiện chủng virus SLCMV trên giống bi khảm KM140
25
SLCMV
Hình 4. 10 Kết quả phản ứng PCR phát hiện SLCMV trên 6 mẫu của giống KM140;
M: ladder Ikb ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm;
Ký hiệu giống KM140: M140;
Dựa vào hình 4. 10 cho kết quả phản ứng PCR phát hiện SLCMV với tỉ lệ mẫu nhiễm là 100%. Mẫu thứ 6 là mẫu lá chưa biéu hiện triệu chứng kham lá nhưng bên trong cũng đã nhiễm virus. Cả 6 mẫu đều cho đoạn khuếch đại DNA virus có kích thước (1056 bp) trùng với đối chứng dương.
4.2.3.2 Kết quả Multiplex PCR phát hiện 2 chủng virus ACMV và EACMV trên giống bị khảm KM140
(+) (-) M1401) M1403) M140(5)
M4402) M140(4) M140(6)
EAMCV
Oe SSeS =
Hình 4. 11 Kết qua phản ứng Multiplex PCR
phát hiện ACMV và EACMV trên 6 mẫu của giống KM140;
M: ladder 100bp ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm;
Ký hiệu giống KM140: M140;
Đối với phản ứng Multiplex PCR phát hiện ACMV và EACMV kết quả ở hình 4.11 cho thấy tỉ lệ mẫu nhiễm bệnh là 100%. Cả 6 mẫu sau điện di đều xuất hiện 2 band có kích thước trùng với đối chứng dương lần lượt là (368 bp) và (650 bp). Trong đó mẫu thứ 6 là mẫu lá non chưa có triệu chứng nhưng cũng đã nhiễm đồng thời 2 chủng virus trên.
26
4.2.4 Kết quả PCR và Multiplex PCR phát hiện các chủng virus trên 2 giống kháng
khảm HN97 và HN3
4.2.4.1 Kết quả PCR phát hiện SLCMV trên 2 giống kháng khảm HN97 và HN3
M (+) ˆ (CO) M974) N97(3) N97(5)
7 N97(4 N3(1) ! 3 3
aes N97(2) (4) l3(4) N3(2) N3(3) N3(4) N3(5)
4056 bp
4oo
| 200
Hình 4. 12 Kết quả phan ứng PCR phát hiện SLCMV trên 2 giống HN97 và HN3;
M: ladder Ikb ; (+) đối chứng dương ; (--) doi chứng am;
Ký hiệu giống HN97: N97; giống HN3: N3;
Theo kết quả hình 4.12, tat ca 10 mẫu bao gồm 5 mẫu HN97 và 5 mẫu HN3 đều không xuất hiện band kích thước (1056 bp) so với đối chứng đương, tỉ lệ mẫu nhiễm bệnh là 0%, phù hợp với tình hình thực tế của 2 giống này là giỗng khỏe mạnh, đã được kiêm chứng và được Trung tâm Khuyến nông, Chi cục Trồng trọt và Bảo vệ thực vật tỉnh Tây Ninh phối hợp nhân giống trên địa bàn huyện Tân Châu.
4.2.4.2 Kết qua Multiplex PCR phát hiện 2 chủng virus ACMV và EACMV trên 2 giống kháng khảm HN97 và HN3
(—) M97(1) N97(3) N97(5)
N97(2) N97(4) N3(1) N3(2) N3(3) N3(4) N3(5)
M: ladder 100bp ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm Ký hiệu giống HN97: N97; giống HN3: N3;
27
Kết quả hình 4.13 phản ứng Multiplex PCR phát hiện EACMV và ACMV cho tỉ lệ mẫu nhiễm là 0%, trên tất cả 10 mẫu của 2 giống đều không xuất hiện band có cùng kích thước với đối chứng dương tương ứng với việc 2 giống này sạch bệnh. Không xuất hiện
các chủng virus gây khảm lá.
4.2.5 Kết quả PCR va Multiplex PCR phát hiện các chủng virus trên 2 giống kháng
kham HNS và HN1
Hình 4. 14 Kết qua phan ứng PCR phát hiện SLCMV trên 2 giống HNS và HN1 M: ladder Ikb ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm
Ký hiệu giống HN5: N5; giống HNI: NI;
Tương tự như 2 giống HN97 và HN3, kết quả hình 4.14 cho thấy 2 giéng HN5 và HNI đều sạch bệnh. Điện di sản phẩm PCR không phát hiện band có cùng kích thước với đối chứng dương. Tỉ lệ mẫu nhiễm bệnh là 0%.
4.2.5.1 Kết quả PCR phát hiện SLCMV trên 2 giống kháng khảm HN5 và HN1 M (+) (—) N5(1) N5(3) N5(5) N1(2) N1(4)
N5(2) N5(4) N1(1) N1(3) N1(5)
Hình 4. 15 Kết qua phan ứng Multiplex PCR phát hiện EACMV và ACMV trên 2 giống
HNS và HNI
M: ladder 100bp ; (+) đối chứng dương ; (--) đối chứng âm Ký hiệu giống HN5 : N5; giống HN] : NI;
28
Kết quả phản ứng Multiplex PCR phát hiện 2 chủng virus EACMV và ACMV ở2 giống kháng kham HNS và HNI cho tỉ lệ mẫu nhiễm bệnh là 0%. Hoàn toàn sạch bệnh.
Điện di sản pham PCR của tat cả 10 mẫu của 2 giống đều không thấy xuất hiện band có kích thước (368 bp) và (650 bp) so với đối chứng dương. Kết quả phù hợp với hiện trạng 2 giống khoai mì này là sạch bệnh và đang được nhân giống rộng khắp Tây Ninh.
29