3.1. Sự đa dạng về mặt hình thái học
3.1.1. Đánh giá các chỉ tiêu hình thái ký chủ
Một số loài Cordyceps có nhóm ky chủ đặc trưng. Do đó việc xác định và phân loại nhóm ký chủ góp phần định danh chính xác các mẫu Cordyceps thu thập.
Dựa trên tài liệu vệ Côn trùng học đại cương của Nguyễn Tuyết Tung (2006), 24 mẫu được được chia thành ba họ là họ ong, họ bọ xít năm cạnh mép và họ bọ xít
năm cạnh thuộc hai bộ cánh màng và bộ cánh nửa như mô tả qua bảng mô tả Bảng 3.1. và bảng Bảng 3.2.
Bang 3.1. Kết quả phân loại nhóm mẫu theo ký chủ; với scale bar:1 em
Bộ Bộ cánh màng Bộ cánh nửa
Họ Họ ong Họ bọ xít mép Họ bọ xít
: Phân nhiêu màu vàng Mình thon dài, có Đâu nhỏ hình tam giác, Đặc điêm : ,
hoặc pha trộn đen, mặt đơn, phiên mai Mảnh lưng ngực trước nhận diện ` , , 1" ,
râu dạng đâu gôi, rât nhỏ, thường có khá phát triên. Phiên
buồng giữa thứ nhất hình bầu dục, vớirâu mai hình lưỡi hoặc
của cánh trước bao gôm bôn đoạn. hình tam giác kéo dải thường rât dài. ra sát quá nữa chiêu
dai cơ thé.
Bảng 3.2. Phân loại mẫu thu thập theo ký chủ
Bộ Bộ cánh màng Bộ cánh nửa
Họ Họ ong Họ bọ xít mép Ho bọ xít năm cạnh BCp01, BCp02, BCn12, Ben22 BCn03, BCn05, BCp04, BCp07, BCn06, BCn08, BCp18 BCn09, BCn10, Ky hiéu BCn11, BCn14,
mau BCn15, BCn16,
BCn17, BCn19, BCn20, BCn21, BCn23, BCn24
3.1.2. Đánh giá các chỉ tiêu hình thái qua thé
Các mẫu Cordyceps tiếp tục được quan sát va mô tả các chỉ tiêu hình thái quả thé và kết quả đo đạc phan qua thé được thé hiện qua Hình 3.1 với các chỉ tiêu quan sát và kết quả đo đạc được thé hiện như trong Bảng 3.3; 3.4; 3.5.
Mã sô Mặt trước Mặt sau Mô tả phần quả thé
BCp01
Hình dạng phần đầu sinh sản: không
TỐ
Màu sắc phần đầu sinh sản: không rõ Cấu trúc quả thể: trơn có lông mịn, màu vàng sáng, dọc theo sợi quả thể có các nốt gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thé: cặp chân sé I
BCp02
Hình dạng phần đầu sinh sản: không
TỐ
Màu sắc phần đầu sinh sản: không rõ Cấu trúc quả thể: trơn có lông mịn, màu vàng sáng, doc theo sợi qua thê có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: bên hông giáp đầu
ngực
BCn03
Hình dang phan dau sinh sản: chùy Mau sac phan dau sinh san: nau do Cấu trúc quả thé: trơn, mau den sim, doc theo soi qua thé không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vi trí mọc quả thé: bên đốt bung số 3
từ trên xuông.
BCp04
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: vàng
nhạt
Cấu trúc quả thể: trơn có lông mịn, màu vàng sáng, dọc theo sợi quả thê có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thé: đốt cổ
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm g6 gé như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thé: Trên đỉnh đầu.
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thé: phần dưới giáp
dau ngực.
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: vàng
nhạt
Cấu trúc quả thể: trơn có lông mịn, màu vàng sang, dọc theo sợi quả thé có các điểm g6 gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: góc cánh
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gé như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: 1 ở đầu ngực, 1 ở
chóp đuôi.
BCn09
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thé không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: giữa cặp chan I
và 2.
BCn10
Hình dang phan dau sinh sản: chùy Mau sac phan dau sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gỗ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: trên giáp đầu
ngực.
BCnll
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây, phần giữa chia
đoạn và phân nhánh
Vị trí mọc quả thể: trên giáp đầu
ngực.
Hình dạng phần đầu sinh sản: không
TỐ
Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vi trí mọc quả thé: gốc cánh.
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây, xuất hiện nhiều quả thé.
Vị trí mọc quả thể: hai bên giáp ngực phía dưới, đốt bụng số 4.
BCnl4
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gé như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thé: trên giáp đầu
ngực
BCn15
Hình dạng phan đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vi tri mọc quả thé: | sợi trên giáp đầu
ngực, | sợi dưới giáp đâu ngực.
BCnl6
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gỗ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: 2 sợi dưới giáp đầu ngực, 1 sợi phía trên giáp đầu
ngực
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thé: trơn, mau den sim, doc theo sợi quả thé không có các điểm gỗ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: 1 sợi trên giáp đầu ngực, 1 sợi dưới giáp đầu ngực, 1 soi gan cặp chan 1.
BCp1§
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: vàng
nhạt
Cấu trúc quả thể: trơn có lông mm, màu vàng sáng, dọc theo sợi quả thể có các điểm g6 gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: góc cánh
BCn19
Hình dang phan dau sinh sản: chùy Mau sac phan dau sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gỗ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: hai bên giáp đầu
ngực.
BCn20
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm g6 gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: trên giáp đầu
ngực.
BCn21
Hình dạng phan đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thé không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: trên đầu vị trí giáp đầu ngực, trên đuôi, bụng, cặp chân sé
3.
BCn22
Hình dạng phần đầu sinh sản: không
Ke)
Mau sac phan đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gỗ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: dưới giáp đầu
ngực.
BCn23
Hình dạng phần đầu sinh sản: chùy Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ Cấu trúc quả thể: trơn, màu đen sậm, dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
Vị trí mọc quả thể: hai bên giáp đầu
ngực
Hình dạng phần đầu sinh sản: không
TỐ
Màu sắc phần đầu sinh sản: nâu đỏ BCn24 Cấu trúc quả thé: trơn, màu den sim,
dọc theo sợi quả thể không có các điểm gồ gề như vỏ cây.
VỊ trí mọc quả thê: gôc cánh
Hình 3.1. Tóm tắt các đặc điểm định tính quả thể;
với scale bar: Icm
Về cấu trúc sợi quả thé đối với nhóm mẫu Cordyceps ky sinh trên ký chủ thuộc họ Họ ong, quan sát được các sợi này có màu vàng nhạt, sợi quả thể trơn và được phủ một lớp lông mịn xếp chặt vào nhau; dọc theo thân sợi quả thể có những khoảng xuất hiện các nốt vây xù xì giống như lớp vỏ cây có màu nâu. Phần đầu sinh sản có dạng chùy khá mảnh. Về vị trí mọc của sợi quả thé thường xuất hiện xung quanh đốt ngực với các vị trí như gốc cánh, đốt cô, cặp chân ngực số 1.
Bảng 3.3. Kết quả do đạt các mẫu Cordyceps trên ký chủ họ Họ ong
Họ Họ ong (n=5)
Chỉ tiêu Trung bình + SD Tối thiểu Tối đa Số lượng đầu sinh sản (túi) 1,57 + 0,49 1,00 2,00 Chiều đài quả thé (cm) 8,54+2,15 6,60 11,60 Chiều dài đầu sinh sản (cm) 1,00 + 0,76 1,00 1,00
Chiều dai tổng (cm) 10,84 + 2,11 8,60 13,50 Chiều dài thân ký chủ (em) 2,30 + 0,58 1,70 3,20 Tổng trọng lượng (g) 0,43 + 0,32 0,11 0,90
Dựa trên kết quả đo đạt như Bang 3.3, đôi với nhóm ký sinh trên bộ cánh màng, họ ong cho thấy số lượng phan dau sinh sản và quả thé khá ít ở loài nay so với nhóm ky sinh trên họ họ bọ xít năm cạnh(từ 1 đến 2 qua thé và phan đầu sinh
sản). Chiều dài quả thé trung bình 8,54 em với sợi ngắn nhất là 6,60 cm và sợi dai nhất là 11,60 cm thấp nhất so với nhóm ký sinh trên họ bọ xít mép và họ bọ xít năm cạnh. Chiều dài trung bình ký chủ đạt 2,30 em và khoảng cách về chiều dài giữa mẫu thấp nhất là 1,70 cm va mẫu cao nhất là 3,20 cm cao hơn so với nhóm ky sinh trên họ bọ xít mépva gần tương đồng với nhóm ký sinh trên họ bọ xít năm cạnh.
Với nhóm Cordyceps ky sinh trên nhóm ký chủ thuộc họ bọ xít mép hầu như không ghi nhận thấy quả thể trên hai mẫu thu được, đầu sợi sinh sản rất mỏng khó phân biệt với phan thân sợi qua thé. Ở nhóm này chi thấy có 1 quả thể duy nhất trên cá một cá thé với vi tri mọc qua thé phía bên hong giáp đầu ngực hoặc ở phan miệng hút của ký chủ. quả thể có kích thước mỏng và có màu đen sậm giống như màu thân cây. Có sự dao động khá lơn trong chiều dài quả thê với sợi thấp nhất có chiều dai 9,10 cm và sợi dai nhất có kích thước 16,00 cm tương tự với các chỉ tiêu như chiều dài và trọng lượng của ký chủ có sự giao động lớn với mức thấp nhất 1,30 cm và cao nhất là 2,90 em cho chiều dai và mức thấp nhất 0,04 g và cao nhất là 0,55 g cho trọng lượng. Với kết quả trên cho thay sự dao động lớn tat cả các chỉ tiêu
đo đạc với nhóm thuộc họ họ bọ xít mép (Bảng 3.4).
Kết quả đo đạt các mẫu Cordyceps thuộc nhóm ký sinh trên họ bọ xít mép có mức chênh lệch khá lớn giữa các chỉ tiêu như: số lượng đầu sinh sản, chiều dài quả thể, chiều dài đầu sinh sản, chiều dài ký chủ và tổng trọng lượng.
Bang 3.4. Kết quả đo đạt các mau Cordyceps trên ký chủ họ bọ xít mép
Họ Họ bọ xít mép (n=2)
Chỉ tiêu Trung binh+SD Thâpnhất Cao nhất Số lượng dau sinh sản (túi) 1,00 + 0,00 1,00 1,00 Chiều đài quả thé(cm) 11,90 + 2,96 9,10 16,00 Chiều dài dau sinh san (cm) - - - Chiều dài tổng (cm) 13,80 + 2,91 10,40 17,50 Chiều dài thân ký chủ (em) 1,90 + 0,71 1,30 2,90 Tổng trọng lượng (g) 0,22 + 0,24 0,04 0,55
Bảng 3.5. Kết quả đo đạt các mẫu Cordyceps trên ký chủ họ bọ xit năm cạnh
Họ Họ bọ xit năm cạnh (n=17)
Chỉ tiêu Trung bình+SD Thấp nhất Cao nhất Số lượng đầu sinh sản (túi) 2,95 + 1,59 1,00 6,00 Chiều dai quả thé(cm) 12,82 + 3,63 6,00 19,50 Chiéu dai dau sinh san (cm) 1,44 + 0,87 0,50 2,80 Chiều dai tổng (cm) 15,77 + 3,70 9,30 22,50 Chiều dai thân ký chủ (cm) 2,95 + 0,45 1,50 3,50 Tổng trọng lượng (g) 1,21 + 0,60 0,05 2,15
Có tất cả 17 mau Cordyceps ký sinh trên họ bọ xit năm cạnh (Bang 3.5) chiếm ưu thế trên nhóm mẫu thu được. Số quả thể ghi nhân được với các mẫu này đao động từ 10 đến 6 nhánh. Phần đầu sinh sản có dạng chùy nhìn có vẻ ướt bề mặt go ghé. Phan qua thể có màu cam đỏ. Phan quả thé có mau đen sậm như vỏ thân cây. Giữa phần quả thé và phan qua thé có thé phân biệt rõ rang; giữa phần quả thé và phan dau sinh sản có phần chuyền tiếp; hình dạng giống phần quả thé nhưng màu cam đỏ giống như phan dau sinh sản (Hình 3.2C). có sự tương đồng về kích thước ký chủ, quả thé và đầu sinh sản của các mẫu Cordyceps với ký chủ họ họ bọ xít năm
cạnh so với mô ta của Sung và ctv (2007). O. nutans với ký chủ dao động trong kích
thước 2 cm - 3 cm chiều dài, quả thể màu nâu đen hoặc đen sậm; với chiều dài phần dau sinh sản trong khoảng 0,6 cm - 1,7 em có màu đỏ cam.
Đề đánh giá rõ hơn, 5 mẫu đại diện với nhóm mẫu Cordyceps ký sinh trên bộ cánh nửa được quan sát dưới kính hién vi với 3 độ phóng dai 20X, 40X và 100X dé quan sát hình dạng túi bảo tử, sợi bào tử, và bảo tử. Kết quả được mô tả như Hình 3.2; cho thấy túi bào tử có đạng chai (Perithecia) đính đối xứng xung quanh phần lỗi có chứa chất đệm, trong túi bào tử có chứa dầy đặc các sợi bao tử (Ascus), đầu sợi bao tử có một bóng trong suốt hình tròn có phần lõm vào giữa như nút áo, trong sợi bào tử là tập hợp các bào tử hình trụ (Ascopore) được xếp thành các chuỗi từ 3- 5 chuỗi ghép lại với nhau. Kết quả này tương đồng như mô tả Cordyceps ký sinh trên
họ Pentomidae của Yosio Kobayasi (1982) và mô tả của Janet Jennifer Luangsa-ard và ctv (2008). Ngoài ra O. nutans có nhóm ký chủ thuộc họ bọ xít mép, họ bọ xit
năm cạnh hai đốt bàn và họ bọ xít năm cạnh (Friedrich và ctv, 2018; Phạm Thị Hà Nguyên, 2021). Bước đầu xác định 19 mẫu Cordyceps ký sinh trên hai họ họ bọ xit năm cạnh và họ bọ xít mép trong kết quả này là có xu hướng giống với O. nutans.
Đối với 5 mẫu Cordyceps ký sinh trên bộ cánh màng, khi quan sát lát cắt doc dưới kính hién vi như Hình 3.3D và Hình 3.3F các túi bào tử dạng chai với miệng nhỏ tương tự O. nutans tuy nhiên kích thước dai hơn và sự phân bố thưa và lỏng lẽo hơn giữa lớp chất đệm hơn nhóm O. mutans. Phần đầu sợi bào tử có hình nhọn hon như trong Hình 3.3F so với phan đầu hình tròn như nhóm O. nutans. Các bào tử hình trụ cũng xếp thành dạng chuỗi với phần đầu chuỗi hình tròn trong suốt tương
tự O. nutans (Hình 3.3F). Dựa trên mô tả của Kobayasi (1982), Nam va ctv (2006)
bước đầu xác định 5 mẫu Cordyceps này có xu hướng giống với loài O.
sphecocephala.
mẫu mẫu được xử lý và thê hiện vị trí mẫu như trong bang đồ (Hình 3.4).
V - ——“xg Chú —NG
@ “Ky chủ bộcánh màng
@ Ký chủ bộ cánh nửa
= &
°° ằ °
(_ è k
j Se e [ 'vT 4 >
#ỉ A se
— ®
T.722) lDT.7 2,
te
4
j Xã Đa Nhim TL723]
{ 4
&:Xã,Lát }
4 [m.7za]
ì TL 723)
/ 01.722]
ấế eS
Po
2 =
Hình 3.4. Bang đồ mô tả vi tri phân bố các mau Cordyceps; theo ký chủ tai vườn quốc gia Bidoup Núi Bà, Tỉnh Lâm Đông, Việt Nam.
Dựa trên bảng đồ phân bố cho thấy mẫu được thu thập trải rộng xung quanh khu vực thuộc vườn quốc gia Bidoup Núi Bà và không có sự tách biệt rõ ràng về khu vực phân bố của hai nhóm Cordyceps ky sinh trên ky chủ thuộc bộ cánh màng và bộ cánh nửa trong đó nhóm ký sinh trên bộ cánh nửa chiếm ưu thế.
Bảng 3.6. Kết quả thủy văn tại thời điểm thu mẫu theo mẫu phân bố
Bộ cánh màng (n=5) cánh nửa (n=19)
Trung bình + SD Thấp nhất Caonhất Trungbinh+SD Thấp nhất Cao nhất
Chỉ tiêu
1.471.777 +
Độ Cao (m) 120949 1.54632 1480.223 +12083 1.170,15 1.621,47 131,34
Nhiệt độ không khí
CC) 22,64 + 1,15 20,50 23,60 22,04 + 1,41 20,00 24,30
Nhiệt độ dat °C) 18,27 + 0,17 18,00 18,50 18,23 +0,25 18,00 18,80 Độ am (%) 89,60 + 4,08 82,00 94,00 89,05 + 5,79 79,00 96,00
Dựa trên dữ liệu thu thập (Bang 3.5) cho chúng ta thay các mau Cordyceps phan bé trai rộng trên độ cao từ 1.170,15 m đến 1.621,17 m so với mặt nước biển và không có sự khác biệt đáng ké về độ cao trung bình trong khu vực phân bố của 19 mẫu Cordyceps với ký chủ bộ Hymenotoptera so với 5 mau Cordyceps với ky chủ bộ cánh nửa với độ cao khu vực phân bố so với mực nước biển trung bình lần lượt là 1.471,77 m và 1.480,23 m. Dựa trên mức chênh lệch giữa độ cao thấp nhất và độ cao cao nhất, cho ta thấy 19 mẫu Cordyceps ky sinh trên bộ cánh nửa có khu vực phân bố rộng hơn (thấp nhất 1.170,15 m va cao nhất 1.621,47 m so với mực nước biển) so với 5 mẫu ký sinh trên bộ cánh màng (thấp nhất 1.209,49 m và cao nhất 1.546,32 m so với mực nước biển). Xét về các yêu tố nhiệt độ không khí và nhiệt độ đất gần như không có sự khác biệt giữa hai nhóm mẫu Cordyceps. Về yếu tô độ âm trung bình tại khu vực thu 19 mẫu Cordyceps ký sinh trên bộ cánh nửa có xu hướng trải rộng hơn với mức chênh lệch giữa độ âm thấp nhất và độ âm cao nhất 17,00%
trong khi 5 mẫu Cordyceps ký sinh trên bộ cánh mang mức chênh lệch giữa âm độ thấp nhất và cao nhất chỉ có 12,00 % và độ dao động về 4m độ trung bình cũng phản ánh ở các mẫu Cordyceps ky sinh trên bộ cánh nửa có mức độ biến thiên cao