2.1 Nội dung nghiên cứu
Ảnh hưởng nhiệt độ đến các pha phát dục và vòng đời của ong J. pupivorus.
Ảnh hưởng nhiệt độ đến khả năng đẻ trứng và tuổi thọ của ong 7: pupivorus.
2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
Thí nghiệm đánh giá mức nhiệt độ ảnh hưởng đến một số đặc điểm sinh học của T. pupivorus, thời gian thực hiện đề tài từ thang 05 năm 2022 đến tháng 10 năm 2022
tại phòng thí nghệm Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông học, Trường Đại học Nông
Lâm Thành phó Hồ Chí Minh.
2.3 Vật liệu, dụng cụ và thiết bị nghiên cứu
Ong 7. pupivorus được thu thập trên nhộng sâu đầu đen hại dừa tại Bến Tre, sau đó được nhân nuôi trên nhộng sâu đầu đen khoảng 3 — 4 thé hệ trước khi sử dụng cho
thí nghiệm.
Nhộng sâu sáp Galleria mellonella 3 ngày tuổi. Được nuôi theo công thức thức ăn nhân tao được trộn theo công thức của Bộ môn Bảo vệ Thực vật bao gồm 212 g hỗn hợp bột ngũ cốc (bắp, tam, khoai mi), phu pham ngũ cốc (cám gạo, cám mì), đạm động vật, đạm thực vật, khoáng hữu cơ, dẫn xuất của axit Formic, premix vi khoáng — vitamin, axit amin, chất phụ gia, khoáng đa lượng), 25 g cám bắp, 125 g mật ong, 13 g sáp ong,
125 g glycerin, ở điều kiện nhiệt độ 28°C + 2°C, độ ẩm 70% + 5%.
Vật liệu nuôi: hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 em x 4 em), lồng mica (dài x rộng x cao: 30 x 25 x 28 cm), que gỗ (dai x rộng: 15 cm x 2 cm), hộp 4 oz 100 ml (đường kính x chiều cao: 7 cm x 3 em), hộp nhựa 1000 ml (dài x cao:
17
17,5 cm x 7 cm), ống nghiệm nhựa có nắp 5 ml (dai 7,5 ml).
Dụng cụ quan sát mẫu: đĩa petri (đường kính x chiều cao: 8,5 cm x 1,5 cm), kính lap sôi nổi (Hãng: KTECK, Model: KTST — 978PRO, độ phóng đại: 17x — 110x, Dai
Loan).
Dụng cụ lấy chỉ tiêu: dao mỗ nhộng (dai x đường kính: 11,8 cm x 0,8 em), nhíp gắp nhộng (dài: 12 cm).
Tủ định ôn: 6 ngăn. Mỗi ngăn tủ định ôn được điều chỉnh ở các điều kiện nhiệt độ: 10°C, 15°C, 20°C, 25°C, 30°C và 35°C với điều kiện ánh sáng ngày dai 12L:12D và độ âm 70% + 5%.
Số ghi chép, bút, kéo cắt nhộng, giấy dán.
18
2.4 Phương pháp nghiên cứu
2.4.1 Nhân nuôi nguồn ong Trichospilus pupivorus
Nhân nguồn ong ký sinh tiềm năng 7: pupivorus thu được trên nhộng sâu đầu den hại dừa ngoài đồng ruộng (GPS: 10.167600N, 106.352738E) tại xã Tân Thành Bình, huyện Mỏ Cày Bắc, tỉnh Bến Tre. Sau đó được nhân nuôi trong phòng thí nghiệm trên nhộng sâu dau đen từ 3 — 4 thé hệ trước khi sử dung cho thí nghiệm. Nhân nuôi ong ký sinh trong phòng thí nghiệm ở nhiệt độ 28°C + 2°C, ẩm độ 70 + 5%, ánh sáng ngày dài 12L:12D. Ong ký sinh trưởng thành được nuôi trong hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 em x 4 cm), dé bông gòn, được cho ăn bang dung dich mật ong pha loãng (30%).
Sau đó cho nhộng của sâu đầu đen vào trong hộp đề ong ký sinh (trong 24 giờ). Nhộng bị ký sinh được chuyên sang hộp mica tròn (đường kính x chiều cao: 9,5 em x 4 em) dé ong ký sinh vũ hóa. Hằng ngày theo dõi, đến khi ong vũ hóa, tiếp tục lặp lại các bước trên dé nhân nuôi va thu lay nguồn ong F3 dé làm thí nghiệm.
2.4.2 Nhân nuôi sau sap Galleria mellonella
Nguồn sâu sáp được cung cấp từ Bộ môn Bảo vệ Thực vật Trường Đại học Nông Lâm Thành phó Hồ Chí Minh. Nuôi sâu sáp trong phòng thí nghiệm ở điều kiện 28°C + 20C, độ 4m 70% + 5%, ánh sáng ngày dài 12L:12D. Bắt thành trùng của sâu sáp cho vào
19
lồng mica (dai x rộng x cao: 30 x 25 x 28 cm) thả vào những que gỗ được bó lại với nhau, ding vải đen che lồng lại dé thành trùng sâu sáp đẻ trứng. Sau 24 giờ lấy các que gỗ đã được đẻ trứng ra, cho vào hộp nhựa hình chữ nhật (dài x rộng x cao: 25 x 15 x 8,5 cm) có sẵn thức ăn cho sâu sáp.
Hang ngày bé sung thức ăn dé sâu sáp phát triển. Nuôi sâu sáp cho đến khi ấu trùng của sâu sáp đây sức (từ 35 — 40 ngày tuổi). Sau khi hóa nhộng 3 ngày thì tiến hành cắt bỏ lớp kén, phục vụ cho thí nghiệm.
2.4.3 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng các mức nhiệt độ đến đặc điểm sinh học của
ong Trichospilus pupivorus ký sinh trên nhộng sâu sáp
Phương pháp thí nghiệm
Cho 80 cặp ong 7: pupivorus | ngày tuổi tiếp xúc với 240 nhộng sâu sáp 3 ngày tuổi trong vòng 24 giờ. Sau 24 giờ tách nhộng ra khỏi ong ký sinh và chia nhộng đã được ký sinh vào 4 nghiệm thức. Mỗi nghiệm thức 60 nhộng sâu sáp đã bị ký sinh. Mỗi nhộng sâu sáp được bỏ trong một ống nghiệm nhựa có nắp 5 ml (dài 7,5 mm), nap được khoan 1 lỗ nhỏ dé thông thoáng. Thí nghiệm được bố tri theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên đơn yếu tố, với 4 nghiệm thức là 4 mức nhiệt độ (20°C, 25°C, 30°C, 35°C), lặp lại 3 lần.
20
Hang ngày, chọn ngẫu nhiên ở mỗi nghiệm thức 1 nhộng sâu sáp dé giải phâu và đo đếm, mô tả và thu thập các chỉ tiêu của ong ký sinh.
Chỉ tiêu theo dõi
Thời gian phát triển các pha phát dục (ngày).
Thời gian tiền đẻ trứng (ngày).
Vòng đời (ngày).
Ở mỗi mức nhiệt độ. Lay ngẫu nhiên 10 nhộng dé xác định tỷ lệ vũ hóa, tỷ lệ đực, cái.
Tỷ lệ vũ hóa (%) = (Số ong vũ hóa/Tổng số ong có trong nhộng) x 100.
Tỷ lệ đực (%) = (Số ong đực vũ héa/Téng số ong vũ hóa) x 100.
Tỷ lệ cái (%) = (Số ong cái vũ héa/Téng số ong vũ hóa) x 100.
Ở mỗi mức nhiệt độ lay ngẫu nhiên 30 thành trùng 7. pupivorus dé đo kích thước:
chiều dài thân (mm), chiều dài đốt chày chân sau (mm).
gian phát triển các pha và vòng đời 7' pupivorus
21
2.4.4 Thí nghiệm xác định ảnh hưởng các mức nhiệt độ đến khả năng đẻ trứng và tuổi thọ của ong Trichospilus pupivorus ký sinh trên nhộng sâu sáp
Phương pháp thực hiện
Ở mỗi mức nhiệt độ (20°C, 25°C, 30°C, 35°C) chọn ngẫu nhiên 1 cặp ong 7' pupivorus đã giao phối cho tiếp xúc với 3 nhộng sâu sáp 3 ngày tuổi trong 24 giờ. Sau 24 giờ thì thay thế nhộng. Tiến hành thí nghiệm đến khi ong chết. Thí nghiệm lặp lại 10 lần, tương ứng 10 cặp ong. Nhộng sâu sáp và ong 7. pupivorus được bé trí trong hộp 4 oz 100 ml (đường kính x chiều cao: 7 em x 3 cm) có nắp lưới thông thoáng.
Chỉ tiêu theo dõi
Số trứng nở trên/ngày (trứng/ngày).
Tổng số trứng nở được của thành trùng (trứng).
Thời gian đẻ trứng (ngày).
Thời gian sau đẻ trứng (ngày).
Tuổi thọ thành trùng đực (ngày).
Tuổi thọ thành trùng cái (ngày).
| pee Ss ee GDằ... 0i
Hình 2.5 Bồ trí thí nghiệm ảnh hưởng nhiệt độ đến khả năng đẻ trứng và tuổi thọ của 7: pupivorus
22
2.5 Xử lý số liệu
Số liệu được tổng hợp bằng phần mềm Microsoft Excel 2019 và được xử lý thống kê bang phần mềm SAS 9.1, phân hạng theo kiểu LSD ở mức ý nghĩa alpha 0,01.
Chương 3