2.1 Thời gian va địa điểm nghiên cứu 2.1.1 Địa điểm nghiên cứu
Điều tra diễn biến bệnh ở Đồng Nai.
Các thí nghiệm liên quan đến đánh giá khả năng phòng trừ của các vật liệu nano đối với tác nhân gây bệnh đen xơ mít trong điều kiện phòng thí nghiệmđược thực hiện
tại phòng thí nghiệm Bệnh cây của bộ môn Bảo vệ Thực vật — khoa Nông học, trường
Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh.
Các thí nghiệm liên quan đến đánh giá khả năng phòng trừ của các vật liệu nano đối với tác nhân gây bệnh đen xơ mít trong điều kiện đồng ruộng được thực hiện tỉnh Đồng Nai
2.1.2 Thòi gian nghiên cứu
Đề tài được tiến hành từ tháng 2 năm 2022 đến tháng 11 năm 2022.
2.1.3 Tình hình khí tượng thủy văn
Qua hình 2.1 cho thấy nhiệt độ trung bình tại huyện Tân Phú, tỉnh Đồng Nai dao động từ 26°C đến 28°C điều kiện thuận lợi cho cây mít phát triển. Lượng mưa tại trạm
Tà Lai dao động từ 67 mm — 132 mm là điều kiện thuận lợi cho vi khuẩn phát triển.
Thích hợp dé thực hiện các thi nghiệm điều kiện đồng ruộng.
17
200 ơ r 30,0
180 +
160 + F 28/0 140 +
120 + + 28,0
100 - gas Lượng mưa TB 30 - 27,0 “Nhiệt độTB
60 -
40 - + 26,0
20 +
0 T T T T 25,0 Tháng5 Tháng6 Tháng7 Tháng8 Thang9
Hình 2.1 Biểu đồ nhiệt độ và lượng mưa trung bình ở trạm Tà Lài, huyện Tân Phú, tỉnh Đồng Nai. (Nguồn: Trung tâm khí tượng thủy văn Đồng Nai)
2.2 Nội dung nghiên cứu của đề tài
Nội dung 1: Điều tra diễn biến bệnh đen xơ trên Mít theo phương pháp của Lê
Trí Nhân, 2016.
Nội dung 2: Đánh giá khả năng phòng trừ của các loại vật liệu nano đối với tác nhân gây bệnh đen xơ mít trong điều kiện phòng thí nghiệm.
Nội dung 3: Đánh giá khả năng phòng trừ của một số loại vật liệu nano đối với tác nhân gây bệnh xơ đen mít ở điều kiện đồng ruộng.
2.3. Đối tượng và vật liệu
Đối tượng: vườn mít thái 4 - 5 tuôi.
Vật liệu: vi khuẩn gây bệnh đen xơ mít, Dụng cụ thí nghiệm trong phòng: đĩa petri, lam, nước cất, ông đong, đũa cấy, đèn cồn, cồn 70 °, môi trường King's B. Tất cả dụng cụ và môi trường đều được vô trùng.
Thiết bị thí nghiệm trong phòng: Tủ cấy khử trùng, tủ say khử tring (180°C), nồi hấp khử trùng bằng hơi nước nóng (121 °C), cân điện tử, lò viba.
Vật liệu nano được cung cấp bởi lab vật liệu Đại học Khoa học Tự nhiên.
18
2.4 Phương pháp thực hiện
Nội dung 1: Điều tra diễn biến bệnh đen xơ trên Mít (theo phương pháp của Lê
Trí Nhân 2016)
Phương pháp: Điều tra 1 vườn cố định, trong một vụ tại Đồng Nai, lựa chọn vườn mít trồng chuyên canh hoặc xen canh có ghi nhận từng bị bệnh đen xơ trước đó, có diện tích tối thiêu là 1.000 m°. Ghi nhận điều kiện thời tiếttrong suốt quá trình điều
tra tại địa phương.
Tại mỗi vườn điều tra cố định 120 trái ở giai đoạn vừa ra nụ, sau đó ở mỗi giai doanphat triển của mít cắt ngẫu nhiên 9 trái mít, sau đó cắt trái mít ra thành hai nửa theo chiều dọc và quan sát triệu chứng đen xơ mít. Điều tra định kỳ 10 ngày/lần, từ khi nhú mam hoa đến khi cham dứt quá trình đậu trái (tổng số lần điều tra là 10 lần/vụ ).
Chỉ tiêu điều tra:
Quan sat cuống, gai, màu, hình dạng, kích thước, đặc điểm trái mít nhằm phát hiện triệu chứng bắt đầu bệnh xơ đen.
Ghi nhận, chụp hình, mô tả đặc điểm hình thái, kích thước của vết bệnh trong
từng giai đoạn.
Tỷ lệ bệnh (%) = (Tổng số trái mít có hiện tượng đen xơ/Tổng số trái mít điều
tra) x 100
Nội dung 2: Đánh giá khả năng phòng trừ của các loại vật liệu nano đối với tác nhângây bệnh đen xơ mít trong điều kiện phòng thí nghiệm.
Mục đích: Tìm ra các vật liệu nano và nồng độ có hiệu lực phòng trừ tác nhân
gây bệnh đen xơ mít trong phòng thí nghiệm.
Phương pháp: Thực hiện bằng phương pháp khuếch tán đĩa thạch của Kirby — Bauer (Bauer và ctv, 1966) dựa trên khả năng đối kháng của hoạt chất với vi khuẩn.
Các Thí nghiệm đơn yếu tố được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên, mỗi thí nghiệm là 1 loại vật liệu nano, mỗi thí nghiệm gồm các nghiệm thức là các nồng độ khác nhau của vật liệu nano. Mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, mỗi lần 1 đĩa Petri, đối
chứng là nước.
19
Cách tiến hành: Nuôi cấy vi khuẩn trong 10 mL môi trường King's B long dé đạt nồng độ vi khuẩn 10° CFU/mL. Sau đó hút 10 wl dịch vi khuân Pantoea stewartii chứa 108 CFU/mL cho vào dia petri chứa môi trường King's B đã chuẩn bị, dùng que trai vi sinh dé trai đều vi khuẩn trên mặt đĩa. Sau đó gắn các đĩa giấy đường kình 6 mm vào dia Petri và nhỏ 6 pL thuốc với nồng độ đã pha sẵn lên trên đĩa giấy, ủ đĩa ở nhiệt độ phòng và quan sát sự hình thành vòng kháng khuẩn sau 24 — 4§giờ. Nguyên tắc đặt đĩa thuốc: mỗi dia Petri là 1 nồng độ của một thuốc được đặt 3 đĩa giấy (3 lần lặp lại của thuốc) và 1 đĩa ở giữa là đối chứng âm nước cất vô trùng (Hình 2.2).
~-
O Đĩa đói chứng (nước cat)
Hình 2.2 Phương pháp bố trí thí nghiệm trên đĩa petri
Đánh giá hoạt tính ức chế vi khuẩn của các loại thuốc trong điều kiện phòng thí nghiệm bằng đường kính vòng kháng khuẩn tính bằng công thức:
AD = DI - D2 (mm)
Trong đó:
DI: đường kính vòng kháng khuẩn (mm) D2: đường kính lỗ thạch (mm)
Tính kháng khuẩn được biéu hiện khi vòng kháng khuẩn rộng hơn 2 mm + Duong kính vòng kháng khuẩn <= 11 mm: tính kháng yếu
+ Đường kính vòng kháng khuẩn từ 12 đến 16 mm: tính kháng trung bình + Đường kính vòng kháng khuân >= 16 mm: tính kháng mạnh
20
Đánh giá hiệu lực của các vật liệu nano
Bảng 2.1 Quy ước kí hiệu các thuốc dạng vật liệu nano và nồng độ Vật liệu Nông độ
Cu2O/ Alginate (wữml)
AgNPS -Chitosan
4 7 14 28 - = : :
1000 500 250 125 625 31 16 8
(ppm)
AgCuSiO2 (ppm) 1000 500 250 125 625 31 l6 8 CuNPS (ppm) 1000 500 250 125 62,5 31 l6 8 AgNPS — CMC
1000 500 250 125 625 31 16 8
(ppm)
AgSiO2 (ppm) 1000 500 250 125 62,5 31 l6 8
CuSiO2 (ppm) 1000 500 250 125 62,5 31 16 8
Nội dung 3: Đánh giá kha năng phòng trừ của một số loại vật liệu nano đối với tác nhân gây bệnh đen xơ mít ngoài đồng ruộng.
Phương pháp thực hiện
Chon ra 2 loại vật liệu nano AgNPS - chitosan và AgNPS - CMC dé đánh giá khả năng phòng trừ của vật liệu nano với tác nhân gây bệnh xơ đen mít ngoài đồng ruộng.
Thí nghiệm theo kiểu khối đầy đủ ngẫu nhiên (RCBD) mỗi nghiệm thức 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại là 1 cây mit.
Nghiệm thức của thí nghiệm là các vật liệu nano, bao gồm:
NT 1: Đối chứng không phun thuốc
NT 2: Phun AgNPS — Chitosan nồng độ 1 ml/1L nước NT 3: Phun AgNPS — Chitosan nồng độ 2 ml/1L nước NT 4: Phun AgNPs-CMC nồng độ 1 ml/1L nước
NT 5: Phun AgNPs-CMC nồng độ 2 ml/1L nước
21
Thời điêm sử dụng vật liệu nano: Dự kiên phun xỊt toàn cây trước ra hoa, giai đoạn có cựa gà, trước va sau hình thành trái, và 1 lân vào giai đoạn nuôi trai.
Cách phun: phun ướt đêu trên bê mặt thân, cành và trái mít.
So đồ bố trí thí nghiệm
Lần lặp lại I Lần lặp lại II Lần lặp lại II
NTI (ĐCI) NT2 NI4
NT2 NT5 NT5
NT3 NT4 NT3
NT5 NT3 NTI (BC1)
NT4 NTI1 (DC1) NT2
>
Chiéu bién thién
Trước khi phun thuốc cần phải kiểm trang thí nghiệm: các cây mit thí nghiệm
này có bón phân và cách chăm sóc như nhau.
Quy mô thí nghiệm:
Số ô thí nghiệm: 15 ô.
Số cây trên 6 thí nghiệm: 1 cây.
Số trái theo dõi trên cây: 2 trái.
Các chỉ tiêu và phương pháp theo dõi: (Theo Lê Trí Nhân, 2016)
Ở giai đoạn 90 ngày sau đậu trái, tiến hành thu toàn bộ trái mít ở các nghiệm thức (khoảng 2 trái/cây) dé theo dõi.
Chỉ tiêu theo dõi: Tỷ lệ và mức độ hiện diện vết đen trên xơ và múi được đánh
giá như sau:
* Đối với xơ: Lay 100 xơ, ở 10 điểm khác nhau của trái, mỗi điểm lấy 10 xơ tính được tỷ lệ đen xơ. Trên số xơ bị nhiễm đen tiếp tục phân cấp như sau:
oP Cap 1: <10% diện tích, các vết den nhỏ, nhạt màu, phân bồ rải rác.
+ Cấp 2: 10 - 40% diện tích, các vết đen bat dầu sam màu, to và liên kết với nhau
22
thành từng mảng nhỏ.
+ Cấp 3: 40 - 70% diện tích, các vết sậm màu, to và liên kết với nhau thành từng
mảng to.
+ Cấp 4: 70 - 100% diện tích, các vết sậm màu, to và liên kết với nhau thành từng
mảng to, xơ dính chặt vào.
Chỉ số bị nhiễm (%) =((4x C4 + 3x C3 +2 x C2 +C13⁄4N) x 100 Trongđó CI,C2, C3, C4: cấp 1 - 4
N là tông số mẫu điều tra
* Đối với múi: Lấy 100 múi, ở 10 điểm khác nhau của trái, mỗi điểm lấy 10 múi tính được tỷ lệ đen xơ. Trên số múi bị nhiễm đen tiếp tục phân cấp như sau:
+ Cấp 1: <10% điện tích múi + Cấp 2: 10 - 40% diện tích múi + Cấp 3: 40 - 70% diện tích múi + Cấp 4: 70 - 100% diện tích múi
Chỉ số bị nhiễm (%) = ((4 x C4 + 3 x C3 + 2 x C2 +C1)/4N) x 100 Trongđó CI, C2, C3, C4: cấp 1 - 4
N la tong số mẫu điều tra
*Hiệu lực thuốc được tính theo công thức Abbott dựa trên chỉ số bệnh
E(%)=(1 - (Ta/Ca)) x 100 b Trong đó
E : Hiệu lực của thuốc.
Ca : Chỉ số bệnh ở công thức đối chứng tai thời điểm điều tra sau xử lý thuốc.
Ta : Chỉ số bệnh ở công thức xử lý tại thời điểm điều tra sau xử lý thuốc.
2.5 Phuong pháp xử lý số liệu
Các thông tin, số liệu thu thập được phân tích và tính toán bằng Excel 2010 và SAS 9.1.
23
3.1
Chương 3