3.1 Đánh giá sự đa dạng về đặc điểm hình thái các mẫu nắm Colletotrichum spp.
Tên chủng nam dùng trong thí nghiệm được kí hiệu như sau: hai chữ cái đầu tiên là kí hiệu nơi thu mẫu (tinh), day số gồm 2 kí tự tiếp theo là thứ tự mẫu thu được.
Vi dụ: chủng nắm LDO1, với:
LD: mẫu nắm thu được tại tỉnh Lâm Đồng 01: mau số 1 thu được.
Quan sát đặc điểm hình thái của 32 đĩa Colletotrichum spp. trên môi trường PDA 7 ngày sau cấy và dựa vào khóa phân loại Colletotrichum spp. của Sutton năm 1995,
các mau nam được chia thành 3 nhóm chính như sau:
Nhóm I gồm 17 mẫu nắm Colletotrichum scovillei: LD01, LD02, LD03, LD04,
LD05, LD06, LD07, LD08, LD09, LD10, LD11, LD12, LD13, TN01, TN02, BR02 và
BROS. Soi nắm mảnh, mau trang đến nâu nhạt, mọc sát mặt thạch, đơn bao, trong suốt và phân nhánh, có vách ngăn, trong mỗi tế bào của sợi nắm có nhiều hạt dầu. Tan nắm màu trắng đến trắng xám, mép tròn đều hoặc hơi tròn. Mặt trên đĩa nam có những cham nhỏ màu đen, kích thước không đồng đều, không có những đường tròn đồng tâm (hình 3.1 A).
Mặt dưới của đĩa nắm màu hồng cam hoặc hơi vàng, các chấm nhỏ màu đen và đậm dần gần tâm đĩa (hình 3.1 B). Bào tử đơn bào, không mau, tế bào có dang hình trụ, bên trong có giọt dau hình tròn không màu. Xuất hiện sau 3 NSC với mật độ thấp. Kích thước trung
bình 9,13 — 14,33 x 2,17 — 5 pm (hình 3.1 C). Giác bám có dạng hình trứng ngược, hình
chùy, hơi tròn hay hình dạng không xác định, có phân thùy, lúc đầu không màu chuyên dần sang nâu đến đen. Kích thước trung bình 7,33 — 13,33 x 2,77 — 5,33 um (hình 3.1 D).
4 7eo
{it sagas i ote
Hình 3.1 Đặc điểm hình thái của các mẫu nam nhóm I, (A) mặt trước đĩa nam
Colletotrichum scovillei mọc trên môi trường PDA 7 NSC,
(B) mặt sau dia nam Colletotrichum scovillei moc trên môi trường PDA 7 NSC,
(C) hình dạng bao tử, (D) hình dang giác bam.
Nhóm II gồm 11 mẫu nắm Colletotrichum scovillei bao gồm TN03, TN04, TN05, TN09, TN10, TN11, TN13, LD14, LD15, LD16 và LD17. Soi nắm mảnh, màu trang hơi xám nhạt, mọc bung đều. Tản nắm màu trắng xám đến xám đen, mép tròn đều. Mặt trên đĩa nam có những vòng tròn đồng tâm (hình 3.2 A). Mặt sau đĩa nắm màu xám den và đen, có những vòng tròn đồng tâm đều nhau, có những đốm đen nhỏ (hình 3.2 B). Bảo tử trong suốt dạng hình trụ, hai đầu tròn hoặc một đầu tròn một đầu hơi nhọn. Bảo tử xuất hiện 3 ngày sau cây với mật độ thấp. Kích thước trung bình 7,75 — 14,08 um x 3,42
— 6,75 um (hình 3.2 C). Giác bám có dạng hình trứng ngược, hình chùy, hơi tròn hay
hình dạng không xác định, có phân thùy, lúc đầu không màu chuyên dần sang nâu đến
đen. Kích thước trung bình 7,00 — 12,67 um x 4,08 — 7,75 um (hình 3.2 D).
ea :
Hình 3.2 Đặc điểm hình thái của các mẫu nấm nhóm IL, (A) mặt trước đĩa nắm
Colletotrichum scovillei mọc trên môi trường PDA 7 NSC,
(B) mặt sau dia nam Colletotrichum scovillei moc trên môi trường PDA 7 NSC,
(C) hình dang bao tử, (D) hình dang giác bam.
Nhóm III gồm 3 mẫu nam Colletotrichum gloeosporioides gồm BR01, BR03 va BRO6. Soi nắm mảnh màu trắng xám đến đen, mọc bung cao va đều. Tản nắm màu trắng xám đến xám đen, mép tròn đều. Mặt trên đĩa nắm màu trắng, có những vòng tròn đồng tâm (hình 3.3 A). Mặt sau màu nâu đen đến đen, có những vòng tròn đồng tâm màu đen đều nhau (hình 3.3 B). Bào tử trong suốt, đơn bảo, hình trụ ngắn hai đầu hơi tròn hoặc
một đầu tròn và một đầu hơi nhọn. Xuất hiện sau 3 ngảy sau cây với mật độ thấp. Kích
thước trung bình 5,5 — 14,38 x 3,63 — 6,63 um (hình 3.3 C). Giác bám có dạng hình
trứng ngược, hình chuỳ hay hình dạng không xác định, màu nâu nhạt đến nâu thẫm, vách mỏng, bên trong có nhiều chất nhân màu vàng phân bố bắt định. Kích thước trung
bình 6,25 — 12,38 x 6 — 7,88 um (hình 3.3 D).
Hình 3.3 Đặc điểm hình thái của các mẫu nắm nhóm IIL, (A) mặt trước đĩa nắm
Colletotrichum gloeosporioides mọc trên môi trường PDA 7 NSC,
(B) mat sau dia nam Colletotrichum gloeosporioides mọc trên môi trường PDA 7
NSC, (C) hình dạng bào tử, (D) hình dạng giác bám.
Theo khoá phân loại của Sutton (1995) mô tả hình thái của loài nam Colletotrichum gloeosporioides có bao tử trụ thang, góc tù ở đỉnh hoặc hình trụ một đầu hẹp lại, một đầu cin, kích thước 9 — 24 x 3 — 4,5 ym; giác bám có dang hình chuỳ, hình trứng ngược có nếp nhăn, dạng xẻ thuy, kích thước trung bình 6 — 20 x 4 -12 m.Tương tự, De Silva va ctv năm 2017 cho rằng Colletotrichum scovillei là một trong những loài phổ biến gây bệnh than thư trên ớt. Colletotrichum scovillei có hình thái bào tử là hình trụ thang với kích thước bào tử trung bình là 12 + 3,5 pm x 4,5 + 1,5 và kích thước trung bình giác bám là 8 + 2,5 um x 4+ 1,5 um. Như vậy kết quả nghiên cứu về đặc điểm hình thái nắm Colletotrichum seovillei và Colletotrichum gloeosporioides trong nghiên cứu này là tương đối phù hợp.
Kết quả này cũng phù hợp với kết quả nghiên cứu của Nguyễn Thị Yến Nhi (2022) rang Colletotrichum scovillei có hình thái bào tử là hình trụ thang, hai đầu tròn
và giác bám có màu nâu đến nâu đen, có dạng hình elip, trứng ngược hoặc hình dạng không xác định. Theo Doan Thị Lan Anh va ctv (2019) cho rằng phức hợp loài C.
gloeosporioides có kích thước bao tử trung bình 9,24 — 21,25 um x 3,75 — 7,5 im và kích thước giác bam trung bình là 3,33 — 1,67 wm x 2,5 — 7,92 um.
3.2 Đánh giá khả năng gây bệnh của các dòng nắm Colletotrichum spp.
Sử dụng các mẫu phân lập tiến hành lây bệnh lên quả ớt chỉ thiên Hai mũi tên đỏ nhận thấy các mẫu sau lây bệnh có các triệu chứng điển hình của bệnh than thư trên cây ớt (Hình 3.4). Kết quả chủng bệnh cho thấy ở điều kiện chủng không gây vết thương, quả ớt có tỷ lệ nhiễm bệnh 50%. Trong điều kiện có gây vết thương, các mẫu nam Colletotrichum spp. đều gây bệnh nặng cho quả với vết chủng bị bệnh là 100%. Sau 6 ngày lây bệnh, ghi nhận sự xuất hiện triệu chứng bệnh thán thư ở các mẫu quả ớt có 2 dạng vết loét điển hình khác nhau, vết loét có màu đen và màu vàng nâu. Vết bệnh có hình dang bat định, màu nâu đậm đến màu đen. Vết bệnh lúc đầu là các đốm đen nhỏ, sau lan rộng thành các vết bệnh lớn, mô bệnh không có ranh giới rõ rệt với mô khỏe. Ở vùng gây vết thương biểu bì bắt đầu chuyên sang màu nâu đen. Trên vết bệnh màu nâu đen, thịt quả bi trũng hóp xuống, khô và nhăn lại (Hình 3.4A) xuất hiện những cham nhỏ li tỉ màu đen có kích thước không đều nhau xếp thành vòng tròn đồng tâm hoặc xếp lộn xôn. Vết bệnh ban đầu nhỏ, màu nâu nhạt, sau chuyền sang màu nâu đậm hoặc đen.
Trên vết bệnh màu vàng nâu (Hình 3.4 B) thường thấy xuất hiện những khối bào tử màu vàng xin, khối bao tử nay âm ướt, xung quanh vết bệnh lõm xuống và thường có đường viền màu đen lan rộng và không đều nhau.
Theo Than và ctv (2008) các triệu chứng điển hình của quả là các vết bệnh thường có hình tròn hoặc hơi tròn lõm xuống xuất hiện những chấm nhỏ màu đen xếp thành những vòng tròn đồng tâm bên trong màu vàng cam hoặc nâu đen. Khi bệnh nặng, các vết bệnh liên kết với nhau. Khối bào tử cũng có thể xuất hiện rải rác hoặc thành vòng tròn đồng tâm trên vết bệnh. Như vậy kết quả từ thí nghiệm đánh giá khả năng gây bệnh của 32 dòng nam Collefotrichum spp. trên quả ớt chỉ thiên Hai mũi tên đỏ này tương đồng với kết quả trong nghiên cứu.
thiên Hai mũi tên đỏ (A): triệu chứng vết bệnh màu nâu đen, (B): triệu chứng vết bệnh màu vàng nâu
Kết quả từ Bang 3.1 cho thấy được cả 32 mẫu nắm Colletotrichum spp. đều gây bệnh trên quả ớt trong điều kiện phòng thí nghiệm ở nhiều mức độ khác nhau. Đối với chỉ tiêu về tỷ lệ bệnh ở các nghiệm thức dao động từ 0% đến 94,44%, trong đó nghiệm thức TN03 có tỷ lệ bệnh cao nhất là 99,44% không khác biệt rat có ý nghĩa thống kê so với LD17, TN13 và khác biệt rất có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại.
Sau khi lây nhiễm các mẫu nam Colletotrichum spp. ghi nhận triệu chứng của bệnh thán thư trên các quả ớt (Hình 3.4). Dựa vào những triệu chứng nhiễm bệnh và tỷ lệ bệnh, nhận thấy rằng chỉ số bệnh ở nghiệm thức TN03 cao nhất với 47,53% khác biệt rất có ý nghĩa thống kê so với các nghiệm thức còn lại. Bên cạnh đó, nghiệm thức TN09 tỷ lệ bệnh và chỉ số bệnh là thấp nhất so với các nghiệm thức còn lại với số liệu lần lượt
là 11,11% và 3,70%.
Bang 3.1 Tỷ lệ bệnh và chi số bệnh của nam Colletotrichum spp. trên quả ớt ở 6 NSC
Chỉ tiêu theo dõi
ĐẸP Tỷ lệ bệnh (%) Chỉ số bệnh (%)
TN03 94,44 a 47,53 a
LD07 77,78 b-e 33,33 b LD17 88,89 ab 29,01 be
TN13 83,33 abe 29,01 be
TN11 55,56 c-g 27,78 bed BR04 72,22 b-f 27,16 bed LD06 72,22 b-f 26,54 bed TN04 72,22 hf 26,54 bed
TNI0 77,78 b-e 23,46 b-e
LD09 61,11c-g 35,35 bt LD05 77,78 b-e 21,60 b-f
BR0I 72,22 b-f 21,60 b-f LD08§ 61,11c-g 20,99 b-f
LDI6 55,56 c-g 19,75 c-g LDI0 72,22 b-e 19,14 c-g
TN02 44,44 d-g 19,14 c-g TN05 33,33 fh 19,14 c-h LD0I1 55,56 c-g 18,52 c-h
BR03 77,78 b-e 17,90 c-h
TN01 55,56 c-g 17,28 c-h
LD11 44,44 d-g 17,28 d-h BR02 61,11 c-g 16,67 c-h LD04 38,89 e-h 16,67 c-h LD13 27,78 gh 15,43 d-i LD03 38,89 e-h 12,96 e-i BR06 27,78 gh 11,73 fei LD02 44,44 d-g 11,11 fi LD12 44,44 d-g 9,88 fi BROS 22,22 gh 9,88 ghi LD15 22,22 gh 8,64 hi LD14 22,22 gh 7,41 ij
TN09 11,11 hi 3,70 j
ĐC 0 i 0k F tinh 9,92 15,98 CV (%) 20,88 13,60
Trong cùng một cột, các giá trị có cùng kí tự theo sau thì sự khác biệt không có ý nghĩa thong kê. **: Khác biệt rat có ÿ nghĩa thông kê ở mức 0,01. Các giả trị cột tỉ lệ bệnh và chỉ số bệnh đã được biến doi dưới dạng Acrsin. Các giá trị trên bảng là gid trị trung bình góc.
3.3 Đánh giá sự đa dạng về đặc điểm di truyền của các chủng nam Colletotrichum spp. gây bệnh than thư hại 6t bằng chỉ thị phân tử ISSR.
Mặc dù có thể đánh giá sự đa dạng các mẫu nắm Colletotrichum spp. dựa trên các đặc điểm hình thái như bào tử, giác bám một cách đơn giản và nhanh chóng, song việc tiền hành đánh giá phân tích đa dang di truyền bằng chỉ thi phân tử ISSR như một phương tiện độc lập và làm cơ sở để đánh giá đa dạng di truyền một cách cụ thê và chính xác hơn.
Khảo sát nhiệt độ bắt cặp của 8 primer ở các khoảng nhiệt độ từ 50 °C — 54 °C trong Bảng 2.3 nhận thay sản pham phô diện điện di của 8 primer (AF80820, AF80821, AF80822, AF80823, AF80825, UBC808, UBC810 và UBC834) cho kết quả băng đa hình sáng, rõ và 6n định. Tiến hanh thực hiện đánh giá sự đa dang di truyền của 32 chủng nắm Colletotrichum spp. được khảo sat bằng kỹ thuật ISSR với 8 primer nay.
Bảng 3.2 Nhiệt độ bắt cặp của 8 primer ISSR được sử dụng
Primer Nhiệt độ bắt cặp (°C)
AF80820 50 AF80821 52,5 AF80822 50
AF80823 50
AF80825 54
UBC808 52,5
UBC810 50 UBC834 51,5
3.3.1 Sản phẩm PCR với primer ISSR
Tổng số sản phẩm khuếch đại của 8 primer là 134 băng DNA, đạt trung bình 16,8 băng/primer, kích thước băng từ 100 — 3000 bp. Số băng đa hình là 120 băng, tỉ lệ băng đa hình là 89,9%. Primer cho nhiều băng nhất là primer AF80820 (18 băng) và số băng đa hình đạt được là 15 băng đạt tỉ lệ 83,3%. Primer khuếch đại số băng thấp nhất là
AF80821 (15 băng) và có tỉ lệ băng đa hình là 100% với 15 băng. Primer AF80823 cho
khuếch đại 17 băng nhưng chỉ có 12 băng đa hình, là primer có tỉ lệ băng đa hình thấp nhất 70,6%. Trong 8 primer ISSR có đến 3 primer có tỉ lệ băng đa hình là 100% là
primer AF80821, UBC808 và UBC834. Qua hình 3 thấy rằng kỹ thuật ISSR đã cho ra các sản phẩm khá tốt, số lượng băng nhiều, đồng thời các băng xuất hiện khá rõ nét, tỷ
lệ băng đa hình cao.
Bảng 3.3 Số băng khuếch đại của 8 primer ISSR
Sốbăng Tilệbăng Kích thước
Primer Tổng số băng đa hình đa hình (%) băng (bp) AF80820 18 15 83,3 100 - 2000
AF80821 15 15 100 150 - 2500 AF80822 17 15 88,4 100 - 2100 AF80823 17 12 70,6 100 — 2500
AF80825 17 14 82,4 100 — 2500
UBC808 16 16 100 150 —3000 UBC810 17 16 94,1 200 — 3000 UBC834 17 17 100 150 — 2500
Tổng số 134 120 :
Trung bình 16,8 15 89,9
Primer AF80820: Theo hình 3.5, sản phẩm khuếch đại tổng cộng có 18 băng. Kích thước các băng dao động từ 100 — 2000 bp. Qua quan sát có 15 băng đa hình, chiếm tỷ lệ 83,3%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 100 bp xuất hiện ở hầu hết các mẫu nắm và ghi nhận không hiện diện ở các mẫu nắm BRO1, BR02, BR03, BR04, BR05 và BR06.
Tương tự, băng đa hình ở kích thước 800 bp hiện diện ở hầu hết các mẫu nắm và cũng ghi nhận không hiện diện ở 8 mẫu nắm bao gồm LD01, LD02, LD03, LD04, LD05, LD06, TN11 và TN13. Băng đồng hình xuất hiện 400 bp, 500 bp và 700 bp. Đây là primer có số băng khuếch đại nhiều nhất trong 8 primer ISSR được sử dụng trong thí nghiệm.
8 9 10 11 M
2% 27 28 2 30 31 32 M
Hình 3.5 Sản pham PCR được khuếch dai dựa vào kỹ thuật ISSR primer AF80820 M: marker 1kb; 0: Đối chứng; 1: BRO1; 2: BR02; 3: BRO3; 4: BR04; 5: BR05; 6: BR06; 7:
LD0I; 8: LD02; 9: LD03; 10: LD04; 11: LD05; 12: LD06; 13: LD07; 14: LD08; 15: LD09;
16: LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21: LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24:
TNO1; 25: TN02; 26: TN03; 27: TN04; 28: TN05; 29: TN09; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13.
Hình 3.6 San pham PCR được khuếch đại dựa vào kỹ thuật ISSR với primer AF80821. M: marker Ikb: 0: Đối chứng; 1: BRO1; 2: BR02; 3: BR03; 4: BR04; 5: BROS; 6: BR06;
7: LDOI; 8: LD02; 9: LDO3; 10: LD04; 11: LD05; 12: LD06; 13: LD07; 14: LDO8; 15: LDO9; 16:
LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21: LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24: TNO1; 25:
TNO2; 26: TN03; 27: TN04; 28: TN05; 29: TN09; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13
Primer AF80821: Theo hình 3.6, sản phẩm khuếch đại tổng cộng có 15 băng.
Kích thước các băng dao động từ 150 — 2500 bp. Qua quan sát có 15 băng đa hình,
chiếm tỷ lệ 100%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 150 bp chỉ xuất hiện ở các mẫu nam LD12, LD13, LD14, LD15, LD16 va LD17. Tương tự, băng đa hình ở kích thước 800 bp chỉ xuất hiện ở 3 mẫu nắm BR02, BR03 và LDO3 và ghi nhận không hiện diện ở tat cả các mẫu còn lại. Đây là primer có số lượng băng khuếch dai ít nhất trong 8
primer ISSR được sử dụng trong thí nghiệm.
3000 bp
1000 bp 600 bp
200 bp
Primer AF80822: Theo hình 3.7, san pham khuếch dai tổng cộng có 17 băng.
Kích thước các băng dao động từ 100 — 2100 bp. Qua quan sát có 15 băng đa hình,
chiếm ty lệ 88,2%. Trong đó, ở các mau nam BR01, BR03 và BR06 cho số lượng băng đa hình ít và không sáng rõ. Băng ở kích thước 100 bp chỉ xuất hiện ở duy nhất 1 mẫu nam LD17, và ghi nhận không hiện diện ở tat cả các mẫu còn lại. Ở mẫu nắm BRO3 và TNOI, các băng khuếch đại không sáng rõ so với các mẫu nam khác. Băng đồng hình
cho kích thước ở 350 bp và 600 bp.
3000 bp
1000 bp 600 bp
200 bp
Hinh 3.8 San pham PCR được khuếch đại dựa vào kỹ thuật ISSR với primer AFS0823.M: marker 1kb; 0: Đối chứng: 1: BRO1; 2: BR02; 3: BR03; 4: BR04; 5:
BROS; 6: BR06; 7: LDO1; 8: LD02; 9: LD03; 10: LD04; 11: LDO5; 12: LD06; 13:
LD07; 14: LD08; 15: LDO9; 16: LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21:
LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24: TN01; 25: TN02; 26: TN03; 27: TN04; 28: TN05; 29:
TN09; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13.
Primer AF80823: Theo hình 3.8, sản phẩm khuếch dai tổng cộng có 17 băng.
Kích thước các băng dao động từ 100 — 2500 bp. Qua quan sát có 12 băng đa hình,
chiếm tỷ lệ 70,6%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 100 bp chỉ xuất hiện ở các mẫu BR06, TNO1 và ghi nhận không hiện diện ở 30 mẫu còn lại. Tương tu, băng đa hình ở kích thước 150 bp xuất hiện 13 mẫu bao gồm BRO1, BR03, BR05, LD06, LD07, LD08, LD09, LD10, TN01, TN03, TN05, TN09 và TN10 và ghi nhận không hiện diện ở tat cả các mẫu còn lại. Ở mẫu nắm TN02, các băng khuếch đại không sáng rõ so với các mẫu nắm khác. Băng đồng hình cho kích thước ở 250 bp, 300 bp, 400 bp, 500 bp và 600bp.
Primer AF80825: Theo hình 3.9, sản phẩm khuếch đại tổng cộng có 17 băng.
Kích thước các băng dao động từ 100 — 2500 bp. Qua quan sát có 14 băng đa hình,
chiếm tỷ lệ 82,4%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 100 bp chỉ xuất hiện ở các mẫu
BR02, BR03, LD07, LD08, LD09, LD11 và LD13 và ghi nhận không hiện diện ở các
mẫu còn lại. Băng đồng hình cho kích thước ở 500 bp, 700 bp và 1000 bp.
Hình 3.9 Sản phẩm PCR được khuếch đại dua vào kỹ thuật ISSR với primer AF80825. M: marker Ikb; 0: Đối chứng: 1: BRO1; 2: BR02; 3: BR03: 4: BR04; 5:
BR05; 6: BR06; 7: LDO1; 8: LD02; 9: LD03; 10: LD04; 11: LD05; 12: LD06; 13:
LD07; 14: LD08; 15: LD09; 16: LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21:
LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24: TN01; 25: TN02; 26: TN03; 27: TN04; 28: TN05; 29:
TNO9; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13.
1 11 12 13 14 15 16
31
Hình 3.10 Sản phẩm PCR được khuếch đại dựa vào kỹ thuật ISSR với primer
UBCS08.M: marker 1kb; 0: Đối chứng: 1: BRO1; 2: BR02; 3: BR03; 4: BR04; 5:
BROS; 6: BR06; 7: LDO1; 8: LD02; 9: LD03; 10: LD04; 11: LDO5; 12: LD06; 13:
LD07; 14: LD08; 15: LD09; 16: LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21:
LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24: TN01; 25: TN02; 26: TN03; 27: TN04; 28: TN05; 29:
TNO9; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13.
Primer UBC808: Theo hình 3.10, sản phẩm khuếch đại tông cộng có 16 băng.
Kích thước các băng dao động từ 150 — 3000 bp va không xuất hiện băng đồng hình.
Băng đa hình là 16 chiếm tỷ lệ 100%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 150 bp chỉ có ở 7 mẫu nắm là BR01, BR02, BR03, BR04, LD11, LD14 và TN09 và băng đa hình ở kích thước 3000 bp chỉ xuất hiện ở 4 mẫu nam bao gồm LD12, LD13, LD14, LDI5 và ghi nhận không hiện diện ở tat cả các mẫu nam Colletotrichum spp. còn lại.
Primer UBC§10: Theo hình 3.11, sản phẩm khuếch đại tổng cộng có 17 băng.
Kích thước các băng dao động từ 200 — 3000 bp và không xuất hiện băng đồng hình.
Băng đa hình là 16 chiếm tỷ lệ 94,1%. Trong đó, băng đa hình ở kích thước 200 bp chỉ xuất hiện ở 3 mẫu BR02, BR03 và LD06. Tương tự, băng đa hình ở kích thước 1000 bp xuất hiện ở hầu hết các mẫu nắm và ghi nhận không hiện diện ở 5 mau bao gồm BRO1, BR04, BROS, LD17 va TN10. Ở mẫu nam BR05 chỉ khuếch dai 4 băng. Băng đồng hình
có kích thước 600 bp.
3000 bp.
1000 bp 600 bp
200 bp
3000 bp
1000 bp 600 bp
200 bp
Hình 3.11 Sản phẩm PCR được khuếch đại dựa vào kỹ thuật ISSR với primer UBCS10.M: marker lkb; 0: Đối chứng: 1: BRO1; 2: BR02; 3: BR03; 4: BR04; 5:
BR05; 6: BR06; 7: LDO1; 8: LD02; 9: LD03; 10: LD04; 11: LD05; 12: LD06; 13:
LD07; 14: LD08; 15: LD09: 16: LD10; 17: LD11; 18: LD12; 19: LD13; 20: LD14; 21:
LD15; 22: LD16; 23: LD17; 24: TNOI; 25: TN02; 26: TN03; 27: TN04; 28: TNOS5; 29:
TNO9; 30: TN10; 31: TN11; 32: TN13.