4.1. Kết quả
4.1.1. Kết quả đánh giá chỉ tiêu hình thái lá tràm trà
Đánh giá các chỉ tiêu hình thái lá trên 30 mẫu tràm trà gồm: hình dạng lá, màu sắc lá non, màu sắc lá già, chiều dài lá, chiều rộng lá. Kết quả qua quan sát cho thấy các lá tram trà đều có kích thước nhỏ, lá có hình mũi mác, thon nhọn va lá mọc chi chit, xen kẽ trên suốt chiều đài nhánh. Lá non có màu xanh nhạt (xanh chuối), non mềm và lá già có màu xanh đậm, dai cứng. Chiều dài và chiều rộng lá được ghi nhận tại bang 4.1.
Bảng 4.1. Chỉ tiêu chiều dài và chiều rộng của 30 lá tràm trà Chiêu dài lá Chiều rộng lá
STT Nhận xét (cm) (mm)
i 15-235 05-15 Lá có chiêu đài trung bình, hơi bầu
2 1,3 —1,7 0,8 — 1,2 La nho thon hep 3 1,3 —1,8 0,8 — 1,2 La nho thon hep
4 13-3 1-13 Lá có chiều dai, rộng lớn nhất 5 1,5 —2,5 0,7-1 Lá có chiều dài trung bình, thon hẹp 6 15—2 0,8 —1 Lá có chiều dai trung bình, thon hẹp
7 2-25 L=12 La dai thon hep
8 9.23 i132 Lá dai, chiều rộng hoi bau
9 1,8 —2,2 1—1,2 Lá dai thon hẹp 10 1,2 —1,5 0,8 —1 La nho thon hep 11 1,3 —1,7 0,7-1 La nho thon hep
i2 15-2 ie Lá có chiều dai trung bình, hơi bầu
13 l3 — 1¿7 0/1 Lá nhỏ thon hẹp
14 12 0,8 —1 Lá có chiều dai trung bình, thon hẹp
15 1,3 —1,7 0,7 -1 La nho thon hep
16 1,5 -235 1-—1,2 Lá có chiều đài trung bình, thon vừa 17 14-2 L=15 Lá có chiều đải trung bình, thon vừa
18 1,2-2 0,8 —1 La nho thon hep 19 2 25 1,1-—1,2 La dài thon vừa 20 1-2,5 1-1,1 La dai thon hep 21 1,2—-2 0,7 -1 La nho thon hep
52 L_# 05-1 Lá có chiều dai, rộng nhỏ nhất 23 18-34 Ì~14 Lá dài, chiều rộng hơi bầu 24 17-25 1-13 Lá dai, chiều rộng hơi bầu
25 1,3 — 1,7 0,8 —1 La nho thon hep 26 2-2,5 1-1,2 La dai thon hep
27 13-33% 12-13 Lá có chiều đài trung bình, hoi bầu 28 12-25 0,7—1 Lá có chiều dai trung bình, thon hẹp
29 1,3—2 0,8 —1 La nhỏ thon hep 30 1,5 —2,7 1-—1,3 La dài thon vừa
19
Theo ghi nhận các chỉ tiêu chiều dai và chiều rộng lá của 30 mẫu tram trà ở bang 4.1, các mẫu tram trà có chiều dai từ 1 — 3 cm, và chiều rộng từ 0,5 — 1,5 mm. Các lá có kích thước nhỏ có chiều dài là 1 — 1,5 em, chiều rộng là 0,5 — 0,9 mm. Các lá có kích thước trung bình có chiều dài là 1,6 — 2 cm, chiều rộng là 1 — 1,2 mm. Các lá có kích thước lớn có chiều dài là 2 — 3 em, chiều rộng là 1,2 — 1,5 mm. Theo quan sát, mẫu số 4 (TT48) có lá cho kích thước lớn nhất và mẫu số 22 (TT100) có lá cho kích thước nhỏ nhất so với các mẫu còn lại như hình 3.1. Từ các số liệu ghi nhận về kích thước của 30 mẫu tram trà cho thấy sự chêch lệch không đáng kể giữa các mẫu nghiên cứu. Nếu chỉ dựa vào quan sát đặc điểm hình thái lá để phân biệt và nhận thấy sự khác biệt của các đặc điểm di truyền là rất khó. Thế nên, cần sử dụng phương pháp PCR với chỉ thị ISSR dé đánh giá rõ hơn về sự đa dang di truyền của 30 mẫu tram trà.
4.1.2. Kết quả ly trích DNA tổng số từ lá tràm trà
Kết quả điện di DNA tổng số của 30 mẫu lá tràm trà sau khi ly trích được trình bày
ở hình sau.
12 13 14 15
Hình 4.1. Kết quả điện di DNA tổng số của 30 mẫu tram trà. Kỹ hiệu từ 1 — 30 dai điện cho 30 mẫu tràm trà biểu thị ở bảng
Qua kết quả điện di cho thấy DNA tổng số của các mẫu tram trà đều cho băng sáng rõ, biểu hiện DNA được ly trích đạt hiệu quả tốt và không có hiện tượng DNA bị đứt,
20
gãy. Mặt khác, ở một số giếng nhận thấy có xuất hiện vệt sáng kéo đài do có thể còn lẫn hóa chất trong quá trình ly trích. Tuy nhiên, điều quan tâm hàng đầu của kỹ thuật ly trích
DNA là thu nhận các phân tử ở trạng thái nguyên ven, không bị đứt gãy. Do đó, DNA
thu được vẫn đảm bảo đủ điều kiện dé phản ứng PCR xảy ra. Nhưng mức độ sáng của các mẫu là khác nhau nên sẽ có sự khác nhau về nồng độ DNA của các mẫu. Sau đó, tiến hành pha loãng các mẫu 10 lần dé thực hiện phản ứng PCR — ISSR.
4.1.3. Kết quả phản ứng PCR -— ISSR
4.1.3.1. Khảo sát nhiệt độ của các primer sử dung cho phản ứng ISSR —- PCR
Khảo sát nhiệt độ tối ưu của 20 primer ở 6 nhiệt độ từ 50°C - 55°C trong bảng 3.2 với một mẫu ngẫu nhiên trong 30 mẫu tràm trà thì nhận thấy có 10 primer ở bảng 4.2 cho kết quả đa hình cao và băng sáng, rõ. Các primer còn lại cho sản phẩm mờ, xuất hiện ít băng hoặc không xuất hiện băng nên không đủ điều kiện được chọn.
3000 bp
1000 bp
21
Sau khi khảo sát nhiệt độ phù hợp và chọn lọc các primer có đa hình cao nhất sẽ thu được 10 primer ISSR với nhiệt độ bắt cặp tối ưu dùng cho nghiên cứu như sau.
Bảng 4.2. Nhiệt độ tối ưu của 10 primer được chọn
STT Tên primer Trình tự 5’ - 3’ Nhiệt độ bắt cặp tôi ưu
1 UBC810 (GA)sT 54°C
2 UBC825 (AG)sT 54°C
3 UBC840 (GA)sCTT S38 4 UBC841 (GA)sCTC 519E1 5 UBC843 (GA)sTC 52°C
6 UBC844 (GA)sCC 50°C
7 UBC845 (CT)sRG sro 8 UBC848 (CA)sAGG 515 9 UBC854 (TC)sAGG 53°C 10 UBC855 (AC)sCTT 54°C R=(A, G; Y= (G 1).
4.1.3.2. Sản phẩm PCR với chỉ thị ISSR
Tiến hành phản ứng PCR — ISSR với 10 primer đã chọn và 30 mẫu tram trà. Kết quả thu được, tổng cộng có 98 băng được tạo ra, trong đó có 84 băng đa hình chiếm tỉ lệ 85,7% va 14 băng đồng hình chiếm tỉ lệ 14,3%. Sản phẩm khuếch đại có kích thước từ 450 — 4000 bp được miêu tả chi tiết ở bảng sau.
Bảng 4.3. Tổng hợp số băng của 10 primer được khảo sát
T§b con Tổng sô Sốbăng Tilệbăngđahình Kích thước băng
băng đa hình (%) (bp) UBC855 15 15 100 500 — 2500 UBC854 12 11 91,7 450 — 3000