2.1. Thời gian và địa điểm
Đề tài được thực hiện từ tháng 6 năm 2019 đến tháng 3 năm 2022 tai Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thuỷ sản Long An. Mẫu trên heo và các sản pham từ heo được xét nghiệm chân đoán ASF bằng phương pháp realtime PCR tại Chi cục Thú y vùng
VỊ.
2.2. Nội dung nghiên cứu
Nội dung 1: Khảo sát một số đặc điểm dịch tễ bệnh Dịch tả heo Châu Phi
trên địa bàn khảo sát năm 2019, 2020 và 2021.
Nội dung 2: Xác định sự hiện diện của virus ASF trên heo tại các cơ sở giết
Nội dung 3: Xác định sự hiện diện cua virus ASF trên sản phẩm từ heo tại các chợ thực phẩm tươi song, cơ sở sản xuất, chế bién thực phẩm.
2.3. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu 2.3.1. Vật liệu
Số liệu chi tiết các hộ có trại heo mac ASF và tiêu hủy xảy ra năm 2019, 2020, 2021 và danh sách tất cả các hộ chăn nuôi heo trong tỉnh Long An được khảo sát hồi cứu từ nguồn dit liệu khảo sát của Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thủy sản
Long An. Những hộ có heo bệnh đã được Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thủy sản
Long An lây mẫu máu heo bệnh, xét nghiệm bằng kỹ thuật realtime PCR tai Chi cục Thú y vùng VI và cho kết quả dương tính với ASFV.
Thực hiện theo hướng dẫn của Thông tư số 07/2016/TT-BNN&PTNT của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn, với ước lượng tỷ lệ heo có mang ASFV từ 10%, độ tin cậy 95%, sai số 5%, tổng số mẫu tính toán theo công thức là 29 mẫu,
thực hiện thu thập:
29
+ Mẫu thit/mau hạch (dưới hàm) thu thập từ các cơ sở giết m6: Thu mẫu từ heo giết mô tai 27 lò giết mồ heo tập trung của tinh Long An tại quý IV trong ba năm 2019, 2020, 2021. Tổng cộng 35 mau (mẫu gộp, 5 heo/mau, xấp xi số mẫu theo yêu cầu) được phân bố theo công suất lò giết mô theo mỗi năm.
+ Mẫu thịt/sản pham từ thịt thu thập từ chợ: Thu mẫu từ quay thịt ngẫu nhiên tại 30 chợ đầu mối và nhỏ lẻ tại tỉnh Long An. Do lay mau ngau nhién, chia déu cho 15 don vi cap huyén = 2 mau x 15 don vi cap huyén = 30 mẫu được thu thập ngau nhiên (mau gop, 3 quay thịt/mẫu/chợ) trong quý IV của ba năm 2019, 2020 va 2021.
+ Mau san phẩm từ thịt từ cơ sở chế biến: Tương tự theo căn cứ trên, tổng 30 mẫu (mau gộp, 3 sản pham/mau/co sở chế biến) được thu thập từ 30 cơ sở chế biến ngẫu nhiên trên địa bàn tỉnh Long An trong quý IV của ba năm 2019, 2020 và 2021.
Tổng cộng có 160 mẫu được thu thập mỗi năm trên địa bàn tỉnh Long An, số lượng từng loại mẫu được trình bày trong Bảng 2.1.
Bang 2.1. Bảng phân bồ số lượng mẫu khảo sát
Số mau thịt heo thu thập theo năm Loại mẫu
2019 2020 2021
Thịt heo tại lò mồ 35 34 35 Hạch tại lò mồ 35 34 35
Thịt heo tại chợ 30 30 30
Sản phẩm từ thịt heo tại chợ 30 30 30 Sản phẩm từ thit heo tai cơ sở 30 30 30 chế biến
Tong cộng 160 158 160
2.3.2. Phương pháp lay mẫu va bảo quản
Theo hướng dan Quy chuẩn quốc gia QCVN 01-83/2011/BNN&PTNT của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn và Thông tư số 14/2016/BYT của Bộ Y tế:
+ Mẫu hạch: Lay mẫu hạch dưới hàm từ heo giết mô (mau gộp). Mẫu được bảo quản trong túi zip hoặc ống falcon.
+ Mẫu thịt: lấy 150 gram/mau don + Mẫu hạch: lay 5 - 10 gram/mẫu don
+ Sản phẩm từ heo (nem, lap xưởng, cha,...): 1 cây/mẫu đơn
30
Tất cả các mẫu đều được bảo quản ở nhiệt độ từ 2 - 8°C và vận chuyền ngay về phòng thí nghiệm Chi cục Thú y vùng VI dé tiến hành phân tích. Lưu mẫu ở nhiệt độ -20°C đến 09C.
2.3.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.3.1. Nội dung 1: Khảo sát một số đặc điểm dịch tễ bệnh Dịch tả heo Châu
Phi trên địa bàn khảo sát năm 2019, 2020 và 2021
Hồi cứu thông tin từ các hồ sơ lưu trữ tại Chi cục Chăn nuôi, Thú y và Thuỷ sản tỉnh Long An dé thu thập dữ liệu số heo mắc bệnh, tiêu hủy do bệnh Dịch tả heo Châu Phi theo địa bàn trong năm 2019, 2020 và 2021 qua câu hỏi điều tra. Tổng hợp phân tích theo quy mô trang trại, loại heo mắc bệnh, tiêu hủy do bệnh Dịch tả
heo Châu Phi được quy mô trang trại và các nhóm heo: heo con, heo thịt, heo nái,
và heo đực giống.
Theo Nghị định số 13/2020/NĐ-CP ngày 21/1/2020, quy mô chăn nuôi gia súc, gia cầm quy định:
Chăn nuôi trang trại quy mô nông hộ: Dưới 10 đơn vị vật nuôi
Chăn nuôi trang trại quy mô nhỏ: Từ 10 đến dưới 30 đơn vị vật nuôi Chăn nuôi trang trại quy mô vừa: Từ 30 đến dưới 300 đơn vị vật nuôi
Chan nuôi trang trại quy mô lớn: Từ 300 đơn vi vật nuôi trở lên
Do đặc điểm chăn nuôi của tỉnh, quy mô chăn nuôi tập trung chủ yếu ở phân khúc nhỏ lẻ, các trang trại có quy mô lớn ít, nên nghiên cứu này thống kê gộp số
lượng gộp trang trại quy mô vừa và lớn.
Ghi nhận dịch té bệnh Dich tả heo Châu Phi trên bản đồ GIS về: Xây dựng các lớp bản đồ cơ bản (ranh giới huyện trong tỉnh; ranh giới các xã trong
huyện).
+ Xây dựng các lớp dit liệu liên quan đến dịch tễ của ASF.
+ Dùng máy định vị dé xác định tọa độ của các hộ có heo mắc bệnh ASF, lò
mồ, cơ sở chế biến và chợ tươi sống: tổ hợp các lớp bản đồ phân bố hộ có heo mắc
bệnh ASF với lò mồ, cơ sở chế biến và chợ tươi sống có mẫu dương tính ASFV.
31
+ Truy van dir liệu về không gian cũng như về thuộc tính trên từng lớp bản đồ. Hiển thị lên bản đồ sự phân bố hộ có heo mắc bệnh ASF, lò mồ, cơ sở chế biến và chợ tươi sống có mẫu dương tính ASFV theo khu vực. Từ đó, định hướng vùng nguy cơ cao đối với bệnh ASF.
2.3.3.2. Nội dung 2: Xác định sự hiện diện của virus ASF trên heo tại các cơ sở
giết mỗ
Tổng số 27 cơ sở giết mồ được khảo sát và 35 mẫu gộp mỗi loại (mẫu thịt và mẫu hạch) được thu thập (Bảng 2.3).
Quy trình phát hiện virus gây bệnh Dịch tả heo Châu Phi bằng kỹ thuật
Realtime PCR của Chi cục Thú y vùng VỊ thực hiện theo Quy trình V615-31. Quy
trình chiếc tách DNA V615-66 được thực hiện theo hướng dẫn đi kèm của bộ kit
InviMag Virus RNA Kit KFFlex96 (Platinum® Quantitative PCR SuperMix-UDG
Cat. No: 11730-017 Invitrogen®) bao gồm: 5,5 pl nước không có RNA va DNA;
12,5 ul 2X dung dich SuperMix; 0,5 pil mỗi xuôi ASFV; 0,5 pl mỗi ngược ASFV; 1 ul đoạn dò ASFV; 5 pl mẫu chiếc tach (DNA). Tổng thé tích cho 1 phản ứng là 25
ul.
Bang 2.2. Trinh tự cặp môi va đoạn đò phát hiện ASFV
Tên Trình tự 5’-3’
Môi xuôi 5’-CTGCTCATGGTATCAATCTTATCGA-3’
Môi ngược 5’-GATACCACAAGATCRGCCGT-3’
Doan do (probe) 5”-FAM-CCACGGGAGGAATACCAACCCAGTG-BHOI-3'
Chu kì luân nhiệt cho phan ứng Realtime PCR là 1 chu kỳ 50°C/2 phút;
95°C/2 phút; 45 chu kỳ: 95°C/15 giây, 60°C/45 giây.
Phản ứng được công nhận khi mẫu đối chứng dương (đã được chuẩn độ trước) có giá trị Ct tương đương giá trị Ct đã biết (+2 Ct), mẫu đối chứng âm không có Ct. Với kết quả được giải thích như sau: Mẫu dương tính khi giá trị Ct< 40; Mẫu âm tính khi không có giá trị Ct; và Mẫu nghỉ ngờ khi giá trị 40 < Ct < 45.
32
Chỉ tiêu khảo sát: Mẫu thịt heo và hạch dương hoặc âm tính với virus gây
bệnh Dịch tả heo Châu Phi.
Bảng 2.3. Bồ trí thu mẫu tại lò mồ khảo sát theo từng năm
Số mẫu thịt heo và hạch thu thập theo năm Huyện/TP Số lò mồ
2019 2020 2021 Tân An 2 3 3 3
Kiến Tường | 1 | 1 Bến Lức 3 7 6 7
Thủ Thừa 5 2 2 2
Cần Giuộc Z 2 2 2 Can Đước 1 | 1 1
Chau Thanh 2 2 2 5 Tân Trụ 2 3 3 3 Duc Hoa 4 6 6 6 Duc Hué 2 5 2 2 Thạnh Hóa | 1 | 1 Tan Thanh 1 1 1 1 Mộc Hóa 0 0 0 0
Vĩnh Hưng 1 1 il 1
Tân Hưng 3 3 3 3
Tong cộng 27 35 34 35
Céng suat giét mé <=100 con/ngay: 1 mau
Công suất giết mộ >100 và <=500 con/ngay: 2 mau Công suat giêt mô >500 con/ngay: 3 mâu
2.3.3.3. Nội dung 3: Xác định sự hiện diện của virus ASF trên sản phẩm từ heo tại các chợ thực phẩm tươi sống, cơ sở sản xuất/chế biến thực phẩm
Tổng số 60 chợ buôn bán thực phẩm tươi sống và cơ sở sản xuất/chế biến được khảo sát trên 15 địa bàn cấp huyện/thành pho cua tinh Long An về sự hiện diện của virus ASF trên thịt heo và san phẩm động vật được trình bày như trong
Bảng 2.4.
Bảng 2.4. Thu mẫu thịt heo tại chợ khảo sát theo từng năm
Số mẫu thịt heo thu thập theo năm Huyện/TP Số chợ