2.2.1. Kết quả nghiên cứu về thực vật
2.2.1.3. Đặc điểm bột dược liệu vỏ thân Vọng Cách
Soi và quan sát dưói kính hiển vi thấy:
Mảnh mạch (1)
Lông che chở đơn bào (2) Lông che chở đa bào (3) Tế bào cứng (4)
Bó sọi chứa tinh thể calci oxalat hình khối (5) Mảnh bần (6)
Hình 1. Ảnh cây và cành Vọng cách
Hình 2. Ảnh chụp bột vỏ thân Vọng Cách dưới kính hiển vi
K >
2.2.2. Kết quả nghiên cứu về mặt hoá học
2.2.2.I. Định tính các nhóm chất bằng phản ứng hoá học + Định tính alcaloid:
Cho khoảng 2 g dược liệu vào bình nón dung tích 50 ml, thêm 15 ml dd
H2SO4 IN. Đun đến sôi, để nguội. Lọc lấy dịch cho vào bình gạn dung tích 100 ml. Kiềm hoá dịch lọc bằng dd N H 3 6N (khoảng 8 ml) đến phản ứng kiềm (thử bằng giấy quỳ). Chiết tiếp bằng chloroform 3 lần, mỗi lần 5 ml. Gộp dịch chiết chloroform vào bình gạn, lắc vói dd H2SO4 IN hai lần, mỗi lần 5 ml. Lấy dịch chiết acid để làm các phản ứng:
- Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt thuốc thử Dragendorff, không thấy xuất hiện kết tủa da cam. (Phản ứng âm túứi).
- Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt thuốc thử Mayer, không thấy xuất hiện kết tủa ữắng. (Phản ứng âm tính).
- Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm nhỏ, thêm 2-3 giọt thuốc Bouchardat, không thấy xuất hiện kết tủa nâu đỏ. (Phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không có alcaloid.
+ Định tính Glycosid tìm:
Cho vào bình nón dung tích 50 ml khoảng 5 g bột dược liệu, thêm 25 ml nước. Ngâm trong 24 h, gạn lấy dịch chiết vào một cốc có mỏ. Thêm khoảng 30 ml ƠIÌ acetat 30%, khuấy đều, Lọc qua giấy lọc gấp nếp, thử dịch lọc với chì acetat, cho thêm 1 ml chì acetat nữa vào dịch chiết, khuấy và lọc lại. Tiếp tục thử đến khi không còn tủa với chì acetat. Cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn, lắc kỹ hai lần với chloroform, mỗi lần 5 ml. Gạn lấy dịch chloroform chia vào các ống nghiệm nhỏ khô và bốc hoi trên nồi cách thuỷ đến khô. Cắn còn lại được đem tiến hành các phản ứng:
- Phản ứng Liebermaim: Cho vào một ống nghiệm có chứa cắn 0,5 ml anhydrid acetic, lắc cho tan hết cắn. Để nghiêng ống nghiệm 45®. Thêm từ từ đồng lượng H2SO4 đặc (0,5 ml) theo thành ống nghiệm để dịch lọc chia thành
hai lớp. ở mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng không thấy xuất hiện vòng tím đỏ.
(Phản ứng âm tính).
- Phản ứng Legal: Cho vào một ống nghiệm có chứa cắn 0,5 ml cồn 90®, lắc đều cho cắn hoà tan hết, thêm 1 giọt Natri Nitroprussiat 1% và hai giọt dd NaOH 10%, không thấy xuất hiện màu hồng. (Phản ứng âm tính).
- Phản ứng Keller - Kiliani: ƠIO vào một ống nghiệm có chứa cắn 0,5ml cồn 90®, lắc đều cho cắn hoà tan hết, thêm vài giọt FeQj 5% trong acid acetic. Lắc đều để nghiêng ống nghiệm 45°. Thêm từ từ đồng lượng H2SO4 đặc (Iml) theo thành ống nghiệm để dịch lọc chia thành hai lớp. ở mặt tiếp xúc hai lớp chất lỏng không thấy xuất hiện vòng tím đỏ. ( Phản ứng âm túih).
Nhận xét: Dược liệu không có Glycosid tim.
+ Định tính Saponin:
- Hiện tượng tạo bọt: Cho vào ống nghiệm to khoảng 0,5 g bột dược liệu, thêm 5 ml cồn 90°, đun sôi nhẹ, lọc nóng. Dịch lọc cho vào ống nghiệm to, thêm 10 ml nước. Lắc mạnh trong 5 phút theo chiều dọc ống nghiệm. Để yên quan sát thấy cột bọt bền vững sau 15 phút. ( Phản ứng dương tính)
- Hiện tượng phá huyết: Cho 5 g bột dược liệu vào lOml dd NaQ 0,9%, đun cách thuỷ trong 30 phút, lọc nóng lấy dịch lọc. Nhỏ một giọt máu bò 2%
đã loại fibrin lên lam kính, đậy lamen. Quan sát hồng cầu dưói kứứi hiển vi.
Nhỏ một giọt dịch lọc ở trên vào một cạnh lamen. Quan sát dưới kính hiển vi thấy hồng cầu bị phá vỡ khi dịch chiết thấm vào. ( Phản ứng dưcmg tính ).
- Phản ứng phân biệt hai loại Saponin: Cho vào ống nghiệm lớn 0,5 g bột dược liệu, thêm 5 ml cồn 90°. Đun cách thủy đến sôi, lọc nóng, lấy dịch lọc làm các thí nghiệm:
• Ống 1: Cho 5 ml dd NaOH 0,1N + 5 giọt dịch lọc ữên.
• Ống 2: Cho 5 ml dd HQ 0,1N + 5 giọt dịch lọc ttên.
Lắc đều hai ống nghiệm trong một phút. Để yên, thấy cột bọt ở ống 1 cao hơn ở ống 2.
Nhận xét: Dược liệu có Saponin sterolic.
+ Định tính Flavonoid:
Cân khoảng 5 g dược liệu cho vào bình nón dung tích 100 ml, thêm 50 ml cồn 90°. Đun cách thuỷ 10 phút, lọc nóng, dùng dịch lọc làm các phản ứng sau:
- Phản ứng vói Cyanidin: Cho Iml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm một ít bột Magie kim loại và 5 giọt HCl đặc, lắc đều thấy xuất hiện màu đỏ hồng.
( Phản ứng dương tứứi).
- Phản ứng vói NH3: Nhỏ 1 ml dịch chiết lên tờ giấy lọc, hơ khô rồi để lên miệng lọ NH3 đặc mở nút thấy màu vàng của vết chất đậm lên. ( Phản ứng dương tứứi).
- Phản ứng với NaOH: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt NaOH 10% thấy có kết tủa màu vàng và dịch vàng đậm lên. ( Phản ứng dương túứi).
- Phản ứng vói FeQj: Cho 1 ml dịch chiết vào ống nghiệm, thêm 3 giọt F e a35% thấy dịch chuyển từ vàng sang xanh đen. ( Phản ứng dương tính).
Nhận xét: Dược liệu có Flavonoid.
+ Định tính Coumarìn:
Lấy khoảng 3 g dược liệu cho vào bình nón 50 ml, thêm 20 ml cồn 90®, đun cách thuỷ 5 phút, lọc nóng qua giấy lọc. Dịch lọc thu được dùng làm các phản ứng:
- Phản ứng mở - đóng vòng lacton:
Cho vào 2 ống nghiệm mỗi ống 1 ml dịch chiết.
Ống 1: Thêm 0,5 ml dd NaOH 10%.
Đun cả hai ống đến sôi, để nguội và quan sát thấy:
Ống 1: Cố tủa đục trắng.
ống 2: Để nguyên.
Ống 2: Trong suốt.
Thêm vào cả hai ống nghiệm mỗi ống 2 ml nước cất, lắc đều thấy:
Óng 1: Tủa không tan.
Ống 2: Có một ít tủa đục. Thêm vào ống 1 vài giọt dd HQ đđ không thấy có hiện tượng gì xảy ra. ( Phản ứng âm tính).
- Phản ứng chuyển dạng đồng phân cis - trans: Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy thấm, nhỏ tiếp lên đó 1 giọt NaOH 10%. Để khô tự nhiên, che một nửa diện tích vết chất trên giấy thấm bằng một đồng xu rồi soi dưới đèn tử ngoại ở bước sóng X = 366 nm trong vài phút, thấy phát huỳnh quang xanh.
Sau đó bỏ đồng xu ra, tiếp tục quan sát dưới đèn tử ngoại thấy nửa vết không che cũng sáng như nửa vết bị che. ( Phản ứng âm tính).
Nhận xét: Dược liệu không có Coumaiin.
+ Định tính Anthranoid:
Phản ứng Bomtraeger: Lấy khoảng 3 g dược liệu cho vào bình nón 50 ml, thêm 30 ml H2SO4 IN, đun cách thuỷ trong 15 phút. Để nguội rồi lọc. Cho dịch lọc vào bình gạn, lắc với 5 ml chloroform, gạn lấy phần chloroform để tiến hành phản ứng:
Lấy 1 ml dịch chiết cho vào ống nghiệm, thêm 1 ml NH4OH 10%, lắc đều không thấy xuất hiện màu hồng. Tiếp tục cho từng giọt NaOH 10% vào, lắc nhẹ, không thấy lớp nước có màu hồng. ( Phản ứng âm túứi).
Nhận xét: Dược liệu không có Anthranoid.
+ Định tính Tanin:
Cho vào ống nghiệm 1 g dược liệu, thêm 5 ml nước cất, đun sôi trực tiếp trong 5 phút, lọc lấy dịch lọc để làm các phản ứng:
- Vói dd Fea35%: ƠIO 1 ml dịch lọc vào ống nghiệm, tìiêm 5 giọt dd FeQj 5%, lắc đều, ứiấy dịch chuyển từ vàng sang xanh đen. ( Phản ứng dương tính).
- Với dd Gelatin 5%: Cho 1 ml dịch lọc vào ống nghiệm, ứiêm 5 giọt dd gelatin 5%, lắc đều không tìiấy xuất hiện tủa bông trắng. ( Hiản ứng âm tứứi).
Nhận xét: Dược liệu không có Tanin.
+ Định tính acid hữu cơ: Cho 1 g dược liệu vào ống nghiệm, thêm 5 ml nước c ấ t, đun sôi trực tiếp trong 10 phút, để nguội rồi lọc. Thêm vào dịch lọc một ít tinh thể NajCOj, thấy có bọt khí bay lẽn. ( Phản ứng dương tính ).
Nhận xét: Dược liệu có Acid hữu cơ.• • •
+ Định tính acid amỉn: Cho 1 g dược liệu vào ống nghiệm, thêm 10 ml nước cất, đun sôi 5 phút. Lọc nóng. Lấy 2 ml dịch chiết cho vào một ống nghiệm khác, thêm 2 - 3 giọt TT. Ninhydrin 3%, đun cách thuỷ sôi 10 phút, không thấy xuất hiện màu tím. ( Phản ứng âm túứi).
Nhận xét: Dược liệu không có acid amin.
+ Định tính đường khửi Lấy khoảng 2 g dược liệu cho vào ống nghiệm to, thêm5 ml cồn 90°, đun cách thuỷ 5 phút, lọc lấy dịch. Cho 1 ml dịch lọc vào Ống nghiệm, ứiêm 3 giọt TT. Fehling A và 3 giọt TT. Fehling B. £Xin cách thuỷ
10 phút thấy có tủa đỏ gạch dưói đáy ống nghiệm. (Phản ứng dương tính), Nhận xét: Dược liệu có đường khử.
+ Định tính Polysaccharid: Cho 2 g bột dược liệu vào một cốc có mỏ, thêm 10 ml nước cất, đun sôi cách thuỷ 5 phút, lọc nóng. Cho vào 2 ống nghiệm:
• Ống 1: 4 ml dịch chiết + 5 giọt TT. Lugol.
• Ống 2: 4 ml nước cất + 5 giọt TT. Lugol.
Quan sát thấy ống 1 có màu đỏ đậm hơn ống 2.
Nhận xét: Dược liệu có Polysaccharid.
+ Định tính chất béo: Cho 5 g dược liệu vào bình nón có nút mài dung tích 50 ml, đổ ngập ether dầu hoả, ngâm qua đêm, lọc. Nhỏ một giọt dịch chiết lên giấy lọc, hơ nóng cho bay hết dung môi, không thấy để lại vết mờ trên giấy lọc. ( Phản ứng âm túih ).
Nhận xét: Dược liệu không có chất béo.
+ Định tính Caroten: Cho vào ống nghiệm 2 ml dịch chiết dầu hoả trên, bốc hơi đến cắn. Thêm 2 giọt H2SO4 đặc vào cắn, không thấy dịch lọc chuyển màu xanh. ( Phản ứng âm túứi).
Nhận xét: Dược liệu không có Carolen.
+ Định tính Sterol: Cho vào ống nghiệm 1 ml dịch chiết dầu hoả trên, Bốc hoi trến nồi cách thuỷ đến cắn, Thêm vào ống nghiệm 1 ml anhydrid acetic, lắc kỹ cho tan hết cắn. Để ống nghiệm nghiêng 45°, Thêm từ từ 1 ml H2SO4 đặc theo thành ống nghiệm, thấy mặt phân cách giữa hai lớp chất lỏng có màu xanh. ( Phản ứng dương túứi).
Nhận xét: Dược liệu có Steroid.
Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong vỏ thân cây Vọng Cách được tóm tắt ở bảng 2.1.
Bảng 2.1. Kết quả định tính các nhóm chất hữu cơ trong vỏ thân Vọng cách.
ST T N h óm ch ất P hản ứng định tính K ết quả K ết luận 1 Alcaloid Phản ứng vói TT. Mayer.
Phản ứng vód TT. Dragendorff.
Phản ứng vói rr. Bouchardat.
-
Không có
2 Glycosid tim Phản ứng Liebemiann.
Phản ứng Legal.
Phản ứng Keller - Kiliani.
-
Không có
3 Saponin Quan sát hiện tượng tạo bọt.
Quan sát hiện tượng phá huyết.
Phản ứng phân biệt hai loại Saponin.
++
++
+
Có
4 Flavonoid Phản ứng cyanidũi.
Phản ứng vói NaOH.
Phản ứng vói NH3. Phản ứng vói PeQs 5%.
+++
+++
+++
+++
Có
5 Coumarin Phản ứng mở-đóng vòng lacton.
Phản ứng chuyển dạng đồng phân cis- trans.
-
Không có
6 Anthranoid Phản ứng Bomtraeger. - Không có
7 Tamil Phản ứng vói PcQị 5%.
Phản ứng với Gelatin 5%.
+++ Không có
8 Acid hữu cơ Phản ứng vối NaiCOs. + Có
9 Acid amin Phản ứng vói TT. Ninhydrin 3%. - Không có
10 Đường khử Phản ứng vối 'IT. FehlingA và rr.
PehlingB.
++ Có
11 Polysaccharid Phản ứng vói TT. Lugol. ++ Có
12 Chất béo Tạo vết mờ trên giấy. - Không có
13 Caroten Phản ứng với H2SO4 đặc. - Không có
14 Sterol Phản ứng Liebermaim ++ Có
Ghi chú: (-): Phản ứng âm tính. (++): Phản ứag dưcmg tính rõ.
(+): Phản ứng dưoíig tính. (+++): Phản ứng dương tính rất rõ.
Kết luận: Trong vỏ thân Vọng Cách có: Aavonoid, saponin, acid hữu cơ, đường khử, polysaccharid, sterol.
2.2.2.2. Chiết xuất các chất trong vỏ thân Vọng Cách
Chiết xuất các chất trong vỏ thân Vọng Cách được thực hiện theo sơ đồ ở hình 3.
Hình 3. Sơ đồ chiết xuất các chất trong vỏ thân Vọng Cách
2.2.2.3. Định tính flavonoid trong các phân đoạn chiết xuất
Lấy khoảng 20 mg mỗi loại cắn A, B, c, D cho vào các ống nghiệmtương ứng A, B, c, D. Hoà tan cắn bằng 5 ml cồn, thêmvào mỗi ống một ít bột Magiê kim loại rồi nhỏ vào 4 -5 giọt HQ đặc. Đun cách thuỷ vài phút, quan sát sự chuyển màu trong mỗi ống:
Ống A: Không chuyển màu.
Ống B: Màu hồng.
Ống C: Màu đỏ đậm.
Ống D: Màu đỏ.
Kết quả định tính flavonoid trong các phân đoạn được trình bày trong bảng 2 .2
Bảng 2.2. Kết quả định tính Flavonoid trong các phân đoạn.
STT Phân đoạn chiết. Phản ứng Kết quả Kết luận
1 A
Cyanidin
- Không có
2 B + Có
3 c +++ Có
4 D + Có
Nhận xét: Trong phân đoạn chiết bằng ethylacetat cho kết quả dương tính rõ nhất vói phản ứng cyanidin, chứng tỏ hàm lượng flavonoid trong phân đoạn này là lớn nhất. Do đó chúng tôi tập trung vào nghiên cứu flavonoid trong phân đoạn chiết ethylacetat.
2.2.2.4. Định tính Flavonoid trong dược liệu bằng sắc ký lớp mỏng
- Chuẩn bị dịch chấm sắc ký: Lấy khoảng 20 g dược liệu chiết bằng Methanol trong Soxhlet. Cất thu hồi dung môi, cô cách thuỷ tới cạn. Thêm 40
ml nước cất nóng và đun cách thuỷ 30 phút. Lọc lấy dịch chiết nước cho vào
bình gạn, lần lượt lắc vói n-hexan, chloroform, sau đó lắc vói ethylacetat nhiều lần. Gộp dịch chiết ethylacetat lại, cô tói khô. Hoà tan cắn trong Methanol để chấm sắc ký.
- Chuẩn bị bản mỏng: Bản mỏng Silicagel GF254(Merck) tráng sẵn được hoạt hoá ở 110°c trong 1 giờ. Để nguội và bảo quản trong bình hút ẩm.
- Hệ dung môi khai triển:
Hệ I: Chloroform - Ethylacetat [ 15 : 1]
Hệ ũ: Benzen - Aceton [ 9 :1 ] Hệ IU: Toluen - Aceton [ 19 : 1]
_ _ _ _ _ _
Hệ IV: Toluen - Ethylacetat [ 5 :6 :2]
Hệ V: Toluen - Ethylacetat - Acid formic - Nước [ 5 : 6 : 1,5 :1]
Hệ VI: Chloroform - Ethylacetat - Acid formic [ 5 :5 :1 ]
Hệ VH: Chloroform - Ethylacetat - Acid formic - Nước [ 5 : 6 : 1,5 : 1]
Hệ v n i: Ethylacetat - n- Butanol - Acid acetic - Nước [ 5 : 3 : 1: 1]
Hệ IX: Ethylacetat - Acid formic - Nước [ 2 : 1 : 2 ]
Hệ X:Toluen - Ethylacetat - Acid formic - Nước [ 6 : 5 : 1,5 : 1]
- Tiến hành: Bình sắc ký được bão hoà dung môi. Châíĩi dịch chiết MeOHỞ trên lên bản mỏng đã hoạt hoá. Sấy nhẹ cho khô. Triển khai sắc ký vói các hệ dung môi theo chiều từ dưói lên.
Sau khi triển khai lấy bản mỏng ra khỏi bình sắc ký, sấy nhẹ cho bay hết dung môi. Hiện màu bằng hơi amoniac đặc. Sau đó quan sát dưói ánh sáng thường và ánh sáng tử ngoại ở bước sáng 254 nm và 366 nm.
Sau nhiều lần triển khai cho thấy hệ VI tách tốt nhất. Hình ảnh sắc ký sau khi hiện màu bằng amoniac được trình bày ở hình 4.
Kết quả SKLM chạy vói hệ dung môi VI sau khi hiện màu bằng amoniac và soi dưói đèn tử ngoại được trình bày ở bảng 2.3.
Thứ tự vết
RfX 100 Màu chưa phun thuốc
thử Màu phun
NH3/UV
Độ đậm của vết
As thường uv
1 9 Vàng nâu Nâu nhạt Vàng nâu +
2 27 Vàng nâu Nâu nhạt Vàng nâu +
3 46 Vàng nhạt Vàng nâu Vàng nâu +++
4 56 Vàng chanh Vàng nâu Nâu +++
5 71 Nâu nhạt Nâu nhạt Nâu ++
6 77 Vàng nhạt Nâu Nâu đậm +++
Nhận xét: Từ kết quả định túứi cắn c bằng SKLM ta thấy trong cắn c
có 6 vết chất, ữong đó có 3 vết chất đậm hơn.
2.2.2.S. Xác định độ ẩm của dược liệu.
Lấy khoảng 2g bột dược liệu để xác định độ ẩm. Bật máy đo độ ẩm Sartorius, điều chỉnh nhiệt độ 105 °c. Đổ dược liệu lên đĩa cân và trải đều, đậy nắp cân và đợi máy tự động hiện kết quả lên màn hình, sau 5 phút đọc kết quả.
Độ ẩm của dược liệu là 9,46%.• • • 7
22.2.6. Kết quả định lượng các phân đoạn chiết xuất
Cân chửứi xác khoảng 20 g bột dược liệu đã xác định độ ẩm, cho vào túi làm bằng giấy lọc, đặt vào bình Soxhlet. Chiết bằng cồn 80° đến khi dịch chiết trong suốt. Cất thu hồi dung môi và cô đến cắn. Hoà tan cắn trong nước nóng 3 lần, mỗi lần khoảng 20 ml và đun cách thuỷ 20 phút, lọc nóng lấy dịch lọc và cho vào bình gạn. Lắc vói n-hexan đến khi lớp n-hexan hết màu, gộp dịch chiết n-hexan, bốc hoi hết dung môi thu được cắn A. Tiếp tục lắc dịch chiết nước với Chloroform đến khi lớp Chloroform hết màu và cho phản ứng Cyanidin âm tính, gộp dịch chiết Chloroform, bốc hoi hết dung môi thu được
cắn B. Sau đó lắc dịch chiết nước với ethylacetat nhiều lần đến khi dịch chiết ethylacetat không còn dương tính với phản ứng Cyanidin, gộp dịch chiết Ethylacetat, bốc hoi hết dung môi thu được cắn c. Dịch chiết nước còn lại lắc vói n-butanol, gộp dịch chiết n-butanol, bốc hoi hết dung môi thu được cắn D.
Sấy cắn c ở 70° đến khối lượng không đổi. Cân cắn và tính hàm lượng theo công thức sau:
_ wx 10000 M x(lO O -a)
Trong đó:
X: Hàm lượng cắn thu được trong mỗi phân đoạn m: Khối lượng cắn (g)
M: Khối lượng dược liệu dùng để chiết xuất (g) a: Độ ẩm của dược liệu (%)
Bảng 2.4. Kết quả xác định hàm lượng cắn A liiiiililllllil Khối lượng
dược liệu (g) Độ ẩm (%) Khối lượng cắn A (g)
Hàm lượng cắnA (% )
1 19,5398 9,46 0,0145 0,082
2 20,0417 9,46 0,0186 0 ,1 0 2
3 20,1704 9,46 0,0159 0,087
4 20,2964 9,46 0,0185 0,101
5 19,9997 9,46 0,0167 0,092
TB 0,093± 0,009
STÌ’ Khổì lượng
ậup; liệu (g) Độ ẩm( %) Khốiỉượiìg cắnBCg)
Hàm lượng cán B (%)
1 19,5398 9,46 0,0275 0,155
2 20,0417 9,46 0,0209 0,115
3 20,1704 9,46 0,0295 0,161
4 20,2964 9,46 0,0246 0,134
5 19,9997 9,46 0,0271 0,150
TB 0,143± 0,019
Bảng 2.6. Kết quả xác định hàm lượng cắn c
:■ ' - l Ị l l i Khcs lượng
dược liệu (g) Độ ẩm (%) Khối lượng cắn c (g)
Hàm lượng cắnC(%)
1 19,5398 9,46 0,0934 0,528
2 20,0417 9,46 0,0769 0,424
3 20,1704 9,46 0,0713 0,390
4 20,2964 9,46 0,0815 0,445
5 19,9997 9,46 0,0840 0,463
TB 0,450± 0,051
S'1'1 Khối lượng
dược liệu (g) Độ ẩm (%) Khối lượng cắn D (g)
Hàm lượng cắn D (%)
1 19,5398 9,46 1,1078 6,265
2 20,0417 9,46 1,3093 7,215
3 20,1704 9,46 1,3772 7,536
4 20,2964 9,46 1 ,2 1 1 0 6,611
5 19,9997 9,46 1,1057 6,091
TB 6,744±0,617
Nhận xét: Qua các bảng 2.4, 2.5, 2.6 và 2.7 cho thấy cắn thu được ở phân đoạn chiết bằng n-butanol có hàm lượng cao nhất ( 6,744% ), sau đó là cắn ở phân đoạn chiết bằng ethylacetat ( 0,450% ) và ở phân đoạn chiết bằng chloroform là 0,143%, thấp nhất là phân đoạn chiết bằng n-hecxan (0,093% ).
2.2.2.7. Phân lập các chất trong cắn c
- Chuẩn bị cột: Cột có đường kính 1,8 cm, chiều dài 40 cm, được rửa sạch, sấy khô, sau đó ữáng cột bằng MeOH tuyệt đối. Lót dưói đáy cột một ít bông.
- ơiuẩn bị cột Silicagel theo phương pháp nhồi cột ướt:
+ Lấy khoảng 25 g Silicagel cỡ hạt 0,020 - 0,063 (Merck).
+ Hoạt hoá ở nhiệt độ 105°c - 1 10°c, trong 1 giờ.
+ Cho Qiloroform vào silicagel đã hoạt hoá, ưong quá trình đổ dung môi, dùng đũa thuỷ tinh ngoáy liên tục để bọt khí ra hết.
+ Rót từ từ silicagel vào cột, vừa rót vừa gõ nhẹ, mở khoá cột cho dung môi đến sát lớp silicagel. Để ổn định cột ít nhất 2 - 3 tiếng.
- Tiến hành:
+ Lấy khoảng 1 g cắn c, hoà tan trong một lương tối thiểu MeOH.
Thêm khoảng 2 g silicagel, khuấy đều. Bốc hơi cho bay hết dung môi, sấy khô thành dạng bột mịn, Sau đó cho từ từ vào cột, vừa cho vừa gõ nhẹ để phần