CHƯƠNG II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Phương pháp nhân giống in vitro
Xác định vật liệu khởi đầu cho qua trình nhân nhanh in vitro giống sắn KM94: Cây in vitro có sẵn được bắt đầu đưa vào quy trình nhân. Sau khi cây con có đủ độ lớn nhất định thì phần chồi đỉnh và chồi nách được cắt chuyển qua môi trường ra rễ, phân chồi đỉnh được cắt từ đỉnh và thêm 2-3 mắt xuống
26
phía dưới gốc, chồi nách được cắt từng mắt một. Cả phần chồi đỉnh và chồi nách cùng được cấy chuyển vào môi trường 17N. Sau khi các cây từ chồi nách và chồi đỉnh phát sinh thành cây hoàn chỉnh (theo quan sát bằng mắt thường cây có đủ các bộ phận rễ thân lá) sẽ được chuyển ra ngoài vườn ươm.
Ở đây sẽ đánh giá sự tạo rễ và sự phát triển của cây. Sự tạo rễ sẽ được đánh giá bằng 2 chỉ tiêu là phần trăm cây ra rễ và số rễ tạo ra. Sự phát triển của cây sẽ được đánh giá bằng số mắt mới phát sinh.
- Xác định điều kiện chiếu sáng cho quá trình nhân nhanh in vitro giống sắn KM94: Kiểm tra sự phát sinh của cây trong điều kiện chiếu sáng khác nhau xem độ sinh trưởng khác nhau như thế nào. Thí nghiệm được tiến hành với một khu vực được chiếu sáng với độ sáng là 10000-11000 Lux và một khu vực có độ sáng là 2000-2200 Lux. Sau đó cây được cấy vào cùng điều kiện môi trường, sau 4 tuần sinh trưởng sẽ đếm số mắt trên 30 cây của mỗi điều kiện chiếu sáng khác nhau. Cách đếm số mắt được đếm ngược từ gốc lên tới đỉnh chồi. Thí nghiệm sẽ được tiếp tục với 30 cây con ở lần thí nghiệm trên để cắt cấy chuyển nhân cây tiếp theo để đánh giá khả năng bật trồi của cây in vitro trong điều kiện sáng khác nhau.
- So sánh hệ số nhân nhanh trong túi nilon và bình thủy tinh của giống KM94: Cây in vitro sẽ được nuôi cấy trong bình thủy tinh và túi nilon với cùng môi trường nuôi cấy để đánh giá sự sinh trưởng và phát triển. Sự sinh trưởng và phát triển sẽ dựa vào số mắt mới phát sinh.
2.2.2. Phương pháp đưa cây ra vườn ươm bằng khí canh
Thiết kế hệ thống khí canh để thích nghi cây non trước khi đưa cây ngoài ra đất Dựa vào sơ đồ nguyên lý của hệ thống khí canh để thiết kế hệ thống thích nghi cây:
27
Hình 2.1 Sơ đồ nguyên lý của hệ thống khí canh Thử với các nồng độ khoáng khác nhau
17N không có thành phần đường và M-inositol.
Dung dịch thủy canh.
Thời gian cây non ra rễ trong in vitro cho tỉ lệ sống cao nhất:
Năm tuần sau khi cắt chuyển vào môi trường ra rễ.
Sáu tuần sau khi cắt chuyển vào môi trường ra rễ.
Mỗi quá trình sẽ được làm với 50 cây cho một nồng độ khoáng thử nghiệm lặp lại 3 lần với đối cây đối chứng được ra trong bầu đất giữ ẩm kéo dài thời gian trong 1 tuần, sau đó mở dần dần để cây thích nghi với môi trường ngoài.
- Sự phát triển và tỉ lệ cây cây sống thích nghi được ngoài vườn ươm giữa cây ra rễ từ chồi đỉnh và cây ra rễ từ chồi nách. Tỉ lệ cây sống và thích nghi ngoài vườn ươm sẽ được theo dõi ghi lại 7 ngày, 14 ngày.
- Tỉ lệ cây sống của các quá trình trên để được tính theo công thức sau
28
x là số cây sống của từng thí nghiệm riêng biệt.
y là tổng số cây đưa vào từng lần làm thí nghiệm.
Ở đây cây non sẽ đưa ra vườn ươm theo hai cách một là: theo phương pháp ra đất, hai là thích nghi bằng khí canh trước khi trồng ra đất thời gian thích nghi ở khí canh là 7 ngày.
2.2.3. Phương pháp đánh giá chi phí cho việc nhân cây giống sắn
- Từ việc phương pháp nhân cây in vitro ở trên sẽ tính toán hệ số được hệ số nhân cây sau đó đưa vào tính toán chi tiết các chi phí cấu thành giá của một cây in vitro được sản xuất ra:
Với công thức tính tổng số cây nhân của quá trình như sau:
A =
A là tổng số cây nhân trong suốt quá trình.
n là số tháng nhân cây.
x là hệ số nhân cây hiện tại ở phòng tôi đang làm thí nghiệm.
Các chi phí để có thể tạo thành một cây nhân in vitro bao gồm:
+ Chi phí hóa chất: Một lít môi trường MS sẽ đổ được 14 bình tam giác, một bình tam giác sẽ cấy 6 mẫu cây.
+ Chi phí công lao động (ở đây tính với định mức công kĩ thuật viện 180.000 VND theo thông tư 55/2017/TT-BTC của bộ tài chính ban hành).
29
Công chuẩn bị dụng cụ: sẽ được tính bằng 1 ngày lao động chuẩn bị được số bình tam giác có sẵn môi trường để chuyển mẫu chuẩn bị chuyển mẫu cấy.
Công cấy chuyển mẫu: thời gian 1h lao động cấy được số mẫu mới.
Công rửa dọn dụng cụ: thời gian 1 ngày lao động rửa dọn dụng cụ thí nghiệm.
+ Chi phí cho điện sử dụng vận hành máy móc:
Chi phí điện cho đèn chiếu phòng nuôi cây: Với 4 bóng đèn 28W chiếu sáng được cho 65 bình mỗi bình cấy 6 mẫu được chiếu sáng 16h/ngày.
Chi phí chi điện cho nồi khử trùng: một lần khử trùng được 40 bình tam giác. Công suất 2kW thời gian khử trùng 1,5h.
Chi phí cho tiền điện điều hòa ở phòng nuôi cây: gồm 2 điều hòa công suất 5kW chạy liên tục 16 tiếng cùng thời gian đèn chiếu sáng để luôn giữ nhiệt độ ổn định. Phòng có 63 giàn đèn mỗi giàn có thể chứa được 65 bình, 1 bình 5- 6 cây.
- Sau đó cây in vitro sẽ được chuyển ra môi trường vườn ươm để tiếp tục tính toán giá thành cho đoạn thích nghi cây. Tiền đất vật tư hóa chất và công lao động sẽ được tính ra với số cây một lần nhân ra.
- Giá thành cây con được tính bằng tổng chi phí nhân in vitro cộng tổng chi phí thích nghi cây ngoài vườn ươm chia cho số cây con sống thích nghi ngoài vườn ươm.
30