PHẦN 3. ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.2. Chuẩn bị thí nghiệm
a. Chuẩn bị dụng cụ, thiết bị và môi trường Thiết bị chính
• Tủ cấy vô trùng • Tủ sấy
• Nồi hấp tiệt trùng • Cân điện tử
• Nồi cách thuỷ • Máy lắc (vortex)
• Tủ cấy nuôi ủ vi sinh 500C Dụng cụ
• Đĩa peptri • Pipetman
• Ống nghiệm • Bình tam giác
• Các loại que cấy, que trang
• Đèn cồn, bông thấm nước, bông không thấm nước
• Cồn (Việt nam)
• Các ống nghiệm có chứa 9ml nước muối sinh lý.
Môi trường
• Môi trường Chromocult 26,5(g/l) (Merck)
Cách pha 300ml môi trường Chromocult 26,5(g/l): Cân chính xác 7,95 (g) môi trường vào bình tam giác 500ml. Thêm 300ml nước cất, dùng đũa thủy tinh khuấy đều cho tan hết môi trường. Nút nút bông, đun MT đến khi sủi đều ( MT phải trong suốt). Ủ trong bể ổn nhiệt từ 45 – 50 0C.
b. Chuẩn bị dịch vi khuẩn
Nguồn vi khuẩn là các chủng ATCC tiêu chuẩn quốc tế được cung cấp từ hãng Microbiologics (Mỹ), được nhân giống trong các môi trường đặc hiệu của hãng MERCK theo hướng dẫn của nhà cung cấp.
• Chủng E.coli ATTC 25922
• Chủng Coliform ATTC 35029
Chuẩn bị dịch vi khuẩn E. coli mật độ 105 CFU/ml và Coliform mật độ
106 CFU/ml.
* Kĩ thuật:
• Dùng pipetman và đầu típ vô trùng, thao tác vô trùng chuyển 0,1 ml dịch cấy chứa vi sinh vật lên bề mặt môi trường trong đĩa peptri.
• Nhúng đầu que trang thuỷ tinh vào cồn 700C, hơ qua ngọn lửa để khử trùng. Để đầu que trang nguội trong không gian vô trùng của ngọn lửa.
• Mở đĩa peptri, đặt nhẹ nhàng que trang lên bề mặt thạch của đĩa peptri.
• Dùng đầu que trang xoay, trải đều dịch giống lên bề mặt thạch. Trong khi trải, thực hiện xoay đĩa một vài lần, mỗi lần khoảng 1/2 chu vi đĩa tạo điều kiện cho que trang trải dịch giống đều khắp bề mặt môi trường.
• Rút que trang khỏi đĩa, đậy đĩa, gói và ủ trong tủ ấm ở nhiệt độ 370C trong 24h. Sau đó lấy ra đọc kết quả.
c. Chuẩn bị dung dịch khử trùng
• Dung dịch hoạt hóa điện hóa (Anolit)
Dung dịch Anolit được điều chế theo sơ đồ thiết bị sử dụng buồng điện hóa MB11 (Nga) có màng ngăn bằng sứ xốp. Dung dịch muối NaCl được pha từ muối NaCl với nước RO. Sơ đồ tổng thể của hệ thí nghiệm điều chế dung dịch siêu ô xy hóa dùng 8 modul MB-11 được trình bày trên Hình 3.1
Hình 3.1. Sơ đồ hệ thí nghiệm điều chế dung dịch siêu ô xy hóa dùng 8 modul MB-11
Chế độ vận hành hệ điều chế Anolit được nêu trên bảng dưới đây:
Bảng 3.1 Chế độ vận hành hệ điều chế Anolit
Lưu lượng Anolit (L/h) 30
Lưu lượng Catolit(L/h) 2.5
Điện áp DC (V) 10
Dòng DC (A) 20
Anolit mới sinh ra được kiểm tra các thông số pH, ORP, nồng độ Clo hoạt tính. Pha loãng dung dịch Anolit sao cho thu được dung dịch có các thông số như sau: pH = 6,5;
Thế ô xy hóa khử (ORP)= 800 mV;
Nồng độ chất oxy hóa (tính theo clo hoạt tính) là: khoảng 500 ppm Pha loãng nồng độ Anolit từ 250ppm xuống nồng độ cần thiết 0,5ppm
• Dung dịch nước Javen
Javen hay nước Javen được viết là "Eau de Javel", là một dung dịch Natri hypoclorit yếu hay là hỗn hợp khi sục Cl₂ dư vào dung dịch NaOH.
Cl₂ + 2NaOH → NaCl + NaClO + H₂O
Nước Javen có tính tẩy màu vì nó có chứa NaClO. Tương tự như HClO, NaClO có tính oxi hóa rất mạnh nên phá vỡ các sắc tố màu sắc của các chất.
Đầu tiên, nó được sử dụng để tẩy vải Cotton. Javen là một hợp chất sử dụng rộng rãi trong việc làm sạch nước mặt, tẩy rửa, khử mùi và diệt khuẩn nước.
Chuẩn bị dung dịch nước Javen có nồng độ clo hoạt tính 0,5ppm.
d. Chuẩn bị dung dịch Amoni (NH4+ nồng độ 10, 30, 100, 200, 300 ppm) Cách pha dung dịch NH4+ 100ppm: Cân chính xác 367mg (NH4)2SO4 vào cốc mỏ, hòa tan với nước cất sau đó chuyển vào bình định mức 1000ml. Định mức đến vạch.
Từ dung dịch NH4+ nồng độ 100 ppm, pha loãng với nước cất để thu được các dung dịch có nồng độ là: 10, 30, 100, 200, 300 ppm