4.3 Ảnh hưởng của nitrite lên chỉ tiêu huyết học cá tra
4.3.1 Ảnh hưởng của nitrite lên số lượng hồng cầu
Hồng cầu là loại huyết cầu có số lượng nhiều nhất trong các tế bào máu.
Hồng cầu ở cá trưởng thành hầu hết hình bầu dục. Hồng cầu ở cá có nhân, hai mặt lồi ra. Do cú nhõn nờn hồng cầu của cỏ cú mức ủộ trao ủổi chất cao, tiờu hao lượng oxy lớn.
Số lượng hồng cầu trong mỏu cỏ thay ủổi rất lớn. Ở cỏ nước ngọt số lượng hồng cấu dao ủộng trong khoảng 1- 3,5 triệu tế bào/ mm3 (www.Agriviet.com).
Bảng 4.4: Số lượng hồng cầu (triệu tế bào/ mm3) của cá tra thí nghiệm Thời gian
thu mẩu
Nghiệm thức
Đối chứng 59,1mg/L (LC10)
66,4mg/L (LC25)
75,6mg/L (LC50)
1 giờ 6 giờ 24 giờ 48 giờ 72 giờ 96 giờ
2,77±0,40a
A
2,81±0,28a
A
2,72±0,23a
A
2,85±0,20a
A
2,71±0,20a
A
2,71±0,24a
A
2,50±0,55a
A
2,77±0,58a
A
2,85±0,20a
A
2,30±0,59b
A
2,54±0,28a
bA
2,37±0,49a
bA
2,35±0,47a
A
2,36±0,69a
A
2,34±0,24b
A
2,33±0,58b
A
2,33±0,52b
A
2,21±0,33b
A
2,29±0,23a
A
2,35±0,41a
A
2,32±0,45b
A
2,30±0,35b
A
2,29±0,22b
A
2,26±0,44b
A
Số liệu trỡnh bày là trung bỡnh ± ủộ lệch chuẩn
Các giá trị cùng hàng mang cùng chữ cái (a, b) thì khác biệt không có ý nghỉa thống kê (p>0,05)
Các giá trị cùng cột mang cùng chữ cái A thì khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p> 0,05).
Qua kết quả xử lý thống kê cho thấy số lượng hồng cầu giảm có ý nghĩa thống kờ (p < 0,05) so với ủối chứng sau khi cỏ tiếp xỳc với nitrite 24 giờ ở nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N. Nguyên nhân làm cho số lượng hồng cầu giảm là do khi tiếp xúc với môi trường có nitrite thì nitrite ủó oxy húa Fe2+ trong hemoglobin thành Fe3+, hemoglobin sẽ chuyễn thành methemoglobin mỏu từ màu ủỏ chuyển thành màu nõu. Đõy là nguyờn nhõn làm cho lượng hồng cầu trong mỏu giảm mạnh ở nghiệm thức cú nồng ủộ cao
(nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) so với nghiệm thức ủối chứng.
Riêng nghiệm thức 59,1 mg/L NO2 – N số lượng hồng cầu có giảm ở thời ủiểm 1 giờ, 6 giờ, 24 giờ so với nghiệm thức ủối chứng nhưng sự khỏc biệt này khụng cú ý nghĩa thống kờ (p > 0,05). Nguyờn nhõn cú thể là do thời gian ủầu (1 giờ, 6 giờ, 24 giờ) cỏ mới tiếp xỳc với thuốc, ủồng thời nồng ủộ nitrite trong mụi trường cũng thấp hơn so với nghiêm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) nên hàm lượng Hemoglobin bị chuyển hóa thành methemoglobin cò ít (khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p < 0,05) so với nghiệm thức ủối chứng) nhưng ở thời ủiểm sau (48 giờ, 72 giờ, 96 giờ) thỡ hàm lượng methemoglobin tăng (khỏc biệt cú ý nghĩa thống kờ so với ủối chứng (p<0,05).
Nếu xét trong cùng một cột ở các nghiệm thức có hàm lượng nitrite trong môi trường (nghiệm thức 59,1 mg/l NO2 – N, nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) ta thấy số lượng hồng cầu có chiều hướng tăng chậm ở thời ủiểm ủầu (1 giờ, 6 giờ, 24 giờ, 48 giờ) sau ủú lại gióm ở cỏc thời ủiểm 72 giờ, 96 giờ nhưng sự khỏc biệt này khụng cú ý nghĩa thống kờ (p >0,05).
Nguyên nhân xãy ra quá trình này là do khi cá tiếp xúc với môi trường có nồng ủộ nitrite thỡ hàm lượng hemoglobin trong hồng cầu bị giảm xuống do quỏ trỡnh chuyển húa của hemoglobin thành methemoglobin dưới sự tỏc ủộng của nitrite nờn cỏ phản ứng lại quỏ trỡnh này bằng cỏch huy ủộng lượng hồng cầu dự trữ trong kho chứa mỏu vào mỏu ủể ủảm bảo quỏ trỡnh trao ủổi khớ của cỏ.
Theo các nghiên cứu cho thấy lượng máu trong co thể cá 1 phần tuần hoàn trong tim và mao quản, phần cũn lại ủược dự trữ trong cỏc kho chứa mỏu. Lượng mỏu tuần hoàn chiếm khoảng 50% song tỉ lệ này luụn luụn thay ủổi tựy thuộc vào trạng thái sinh lý của cơ thể, lúc bình thường máu tích trữ tăng nhằm làm giảm bớt gỏnh nặng cho tim, khi vận ủộng thỡ mỏu tớch trữ ủi vào hệ thống tuần hoàn ủể ủảm bảo nhu cầu năng lượng cho cơ thể (www.Agriviet.com). Đú là nguyờn nhõn làm tănglượng hồng cầu trong mỏu nhưng sau ủú số lượng hồng cầu lại giảm là do nitrite trong mụi trường ủó chuyển hemoglobin thành methemoglobin nên cũng làm cho số lượng hồng cầu cũng giãm theo (sự giảm này làm ảnh hưởng ủến lượng oxy cung cấp cho co thể và khả năng cỏ chết ngạt trong mụi trường cú nitrite là rất cao). Bởi vì, hemoglobin la một trong những thành phàn cấu tạo nên
Hemoglobin là một protein phức tạp gồm 1 phân tử globin (96%) kết hợp với 4 phõn tử heme (4%).Globin cú bản chất là một protein nờn mang bản chất ủặc chưng cho từng loài. Hiện tượng này cũng tương tự như những nghiên cứu khác khi cho cỏ vào nuụi mụi trường cú hàm lượng oxy giảm ủột ngột thỡ số lượng hồng cầu của cá tăng lên mãnh liệt, nhưng nếu cá sống lâu dài trong môi trường thường xuyờn thiếu oxy thỡ số lượng hồng cầu lại giảm xuống, khi ủưa cỏ trở lại môi trường bình thường thì số lượng hồng cầu lại dần dần hồi phục (www.Agriviet.com).
Das el al (2004 b,c) trích dẫn từ Mai Diệu Quyên, thí nghiệm ảnh hưởng của nitrite trên hai loài cá cirrhinus mrigala và catla catla cho thấy số lượng hồng cầu giảm khi nồng ủộ nitrite càng tăng. ở cỏ cirrhinus mrigala hầu hết hồng cầu bị teo lại khi cỏ tiếp xỳc ở nồng ủộ 8 mg/l NO2 – N, 10,4 mg/l NO2 – N và tổng hồng cầu giảm sau 6 giờ tiếp xỳc với nitrite ở tất cả cỏc nồng ủộ cũn trờn cỏ catla catla sau khi tiếp xỳc với nitrite số lượng hồng cầu giảm ở thời ủiểm 6 giờ và tăng ở thời ủiểm 12 giờ, tiếp tục giảm tới 96 giờ. (giảm trong khoảng 21,2-31,8 % ở nồng ủộ 10,4 mg/l NO2 – N).
Theo Trần Cẩm Tú, (2010) nghiên cứu ảnh hưởng của clorine lên một số chỉ tiờu sinh lớ mỏu cỏ rụ phi số lượng hồng cầu ở cỏc nghiệm thức (ủối chứng, 0,03 ppm, 0,28ppm, 0,35 ppm) cú xu hướng giảm so với nghiệm thức ủối chứng nhưng khỏc biệt khụng cú ý nghĩa thống kờ (p > 0,05) riờng ở thời ủiểm 48 giờ của nghiệm thức 0,35 ppm khỏc biệt cú ý nghĩa so với nghiệm thức cỏ ủối chứng (p<0,05).
4 .3.2 Ảnh hưởng của nitrite lên số lượng bạch cầu
Bạch cầu là một loại tế bào có nhân, có kích thước lớn hơn hồng cầu. Bạch cầu ủược phõn biệt dựa vào kớch thước, hỡnh dạng, cấu trỳc của nhõn và hạt bắt màu thuốc nhuộm trong tế bào chất. Bạch cầu có hạt thường thấy nhất là bạch cầu ưa acid, còn bạch cầu ưa bazơ và trung tín hầu như không có. Bạch cầu ưa acid có khả năng làm mất ủộc tố của vi khuẩn và cỏc protein lạ, khả năng thực bào rất yếu.
Đối với bạch cầu không hạt thì monocyte có khả năng thực bào, còn các Lymphocyte là những tế bào có khả năng miễn dịch.
Bảng 4.5 Số lượng bạch cầu (103 tế bào/ mm3) của cá tra trong thí nghiệm Thời gian
thu mẩu
Nghiệm thức
Đối chứng 59,1mg/L (LC10)
66,4mg/L (LC25)
75,6mg/L (LC50)
1 giờ 6 giờ 24 giờ 48 giờ 72 giờ 96 giờ
56,6±6,54a
bA
50,9±8,64a
A
55,4±6,18a
A
49,4±6,57a
A
51,2±3,61a
A
54,2±8,60a
A
52,8±5,45a
A
65,9±5,54b
BC
61,6±8,27a
BC
67,9±8,58b
C
59,2±8,93b
AB
65,9±8,08b
BC
63,0±8,33b
A
58,3±8,44a
A
77,7±6,72b
BC
72,1±8,67b
B
114±6,60c
D
81,3±8,54c
C
76,5±7,24c
B
67,6±8,0bA 78,7±7,90b
BC
82,3±8,14c
BC
86,4±8,30d
C
109±8,96d
D
Số liệu trỡnh bày là trung bỡnh ± ủộ lệch chuẩn
Các giá trị cùng hàng mang cùng chữ cái (a, b, c, d) thì khác biệt không có ý nghỉa thống kê (p>0,05)
Các giá trị cùng cột mang cùng chữ cái (A, B, C, D) thì khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p> 0,05).
Qua bảng số liệu ta thấy số lượng bạch cầu thấp hơn số lượng hồng cầu hàng chục lần. Đồng thời số lượng bạch cầu ở cỏc nghiệm thức cú nồng ủộ nitrite trong môi trường (nghiệm thức 59,1 mg/l NO2 – N, nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) thỡ tăng nhẹ so với ủối chứng ( cú ý nghĩa thống kê (p< 0,05)).
Nếu xét trong cùng một cột (từ trên xuống ) ta thấy số lượng bạch cầu khụng cú sự thay ủổi lớn ở nghiệm thức ủối chứng qua cỏc thời ủiểm thu mẫu (1 giờ, 6 giờ, 24 giờ, 48 giờ, 72 giờ, 96 giờ), sự khác biệt này không có ý nghĩa thống kờ (p>0,05) nhưng ở cỏc nghiệm thức cú nồng ủộ nitrite trụng mụi trường (nghiệm thức 59,1 mg/l NO2 – N, nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) thỡ cú sự gia tăng số lượng bạch cầu qua cỏc thời ủiểm thu mẫu. Đặc biệt là ở thời ủiểm 72 giờ, 96 giờ thỡ số lượng bạch cầu tăng cao hơn ở thời ủiểm 1 giờ, 6 giờ sự khỏc biệt này cú ý nghĩa thống kờ (p < 0,05).
Nguyên nhân làm cho số lượng bạch cầu tăng là do khi nitrite trong môi trường xâm nhập vào cơ thể cá thì hemoglobin chuyển hóa thành methemglobin cơ thể phản ứng lại với sự biến ủổi bất lợi này bằng cỏch tăng cường sản sinh ra bạch cầu ủể giải ủộc cho mỏu. Nhưng nitrite là một chất oxy húa mạnh nờn ủó Fe2+
trong hồng cầu thành Fe3+ làm cho máu chuyển sang màu nâu (bệnh máu nâu) nên chỉ dưới tác dụng của bạch cầu thì khó có thể chuyển Fe3+ thàng Fe2+ (tái tạo lại chức năng của hồng cầu). Do ủú khi cỏ tiếp xỳc với mồi trường cú nitrite càng lâu thì hàm lượng methemoglobin trong máu càng tăng nên số lượng bạch cầu cũng tăng theo.
Đó cũng chính là lý do làm cho số lượng bạch cầu ở nghiệm thức có nồng ủộ nitrite cao trong mụi trường (nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) tăng cao hơn so với nghiệm thức cú nồng ủộ nitrite trong mụi trường thấp (nghiệm thức 59,1 mg/l NO2 – N) khác biệt có ý nghĩa thống kê (p < 0,05).
Bờn cạnh ủú màu sắc cỏ thớ nghiệm trong mụi trường cú nitrite cũng cú sự khỏc biệt so với ủối chứng, ủặc biệt là ở những nghiệm thức cú nồng ủộ nitrite cao (nghiệm thức 66,4 mg/l NO2 – N và nghiệm thức 75,6 mg/l NO2 – N) thì da cỏ cú màu sậm hơn so với nghiệm thức ủối chứng. Nguyờn nhõn là khi cơ thể cỏ bị nhiễm ủộc của nitrite thỡ hệ thần kinh trung ương sẽ tỏc ủộng ủến da giỳp phõn tán các tế bào sắc tố (tế bào melanin) làm cho da trở nên sậm màu hơn.
Das et al, (2004b, trích dẫn từ Mai Diệu Quyên, 2010) thí nghiệm trên cá Crihinus mrigala cho thấy số lượng hồng cầu giãm trong khi số lượng bạch cầu tăng lờn ở nồng ủộ 1- 2 ppm NO2 – N ủến 48 giờ nhưng sau ủú gióm ủến 96 giờ.
Ở nồng ủộ nitrite cao hơn 4- 10,4 ppm NO2 – N thỡ số lượng bạch cầu gióm sau 6 giờ tiếp xúc và tăng lúc 12 giờ nhưng không có ý nghĩa thống kê. Trên cá catla catla số lượng bạch cầu cũng giãm ở 6 giờ và tăng lại ở 12 giờ.
Theo Trần Cẩm Tú, (2010) nghiên cứu ảnh hưởng của clorine lên một số chỉ tiờu sinh lớ mỏu cỏ rụ phi số lượng bạch cầu ở cỏc nghiệm thức ủều tăng hơn so với nghiệm thức ủối chứng. Ở thời ủiểm 1 giờ ủến 6 giờ số lượng bạch cầu khỏc biệt cú ý nghĩa thống kờ ở cỏc nghiệm thức so với nghiệm thức ủối chứng. Thời ủiểm 24, 48,72, 96 giờ nghiệm thức cú xử lớ chlorine càng cao thỡ số lượng bạch càu càng nhiều và khỏc biệt cú ý nghĩa thống kờ so với nghiệm thức ủối chứng (p<0,05).