Thắ nghiệm 3: đánh giá khả năng ựối kháng của các chủng vi khuẩn có triển vọng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh thối củ gừng

Một phần của tài liệu TUYỂN CHỌN VI KHUẨN VÙNG rễ THUỘC CHI BACILLUS đối KHÁNG với VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM gây BỆNH THỐI củ GỪNG (Trang 37 - 55)

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - THẢO LUẬN

3.3 Thắ nghiệm 3: đánh giá khả năng ựối kháng của các chủng vi khuẩn có triển vọng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum gây bệnh thối củ gừng

Tất cả cú 15 chủng vi khuẩn ủối khỏng bao gồm: 10 chủng triển vọng ủược chọn lọc từ thớ nghiệm 2 và 5 chủng ủối khỏng tốt với R. solanacearum gõy bệnh hộo xanh trờn cà chua ủược chọn lọc từ cỏc nghiờn cứu trước ủú của Trần Vũ Phến và ctv (2008, 2009), ủược sử dụng trong thớ nghiệm thử ủối khỏng với 3 dũng vi khuẩn gây bệnh trên gừng là Rs CM4, Rs TT2 và Rs TT3.

Xột theo từng thời ủiểm và dựa trờn hiệu quả ủối khỏng với vi khuẩn gõy bệnh của từng chủng vi khuẩn ủối khỏng, ta thấy:

- Ở thời ủiểm 24 giờ sau khi thử ủối khỏng (bảng 3.4), khả năng ủối khỏng của cỏc nghiệm thức khỏc biệt ở mức ý nghĩa 1%. Trong ủú, 5 nghiệm thức PGPR 3, Tt 8.1 t, Tt 7.3 e, Tt 5.3 và Tt 7.7 et cho hiệu quả ủối khỏng cao và khụng khỏc biệt nhau. Mức ủộ phản ứng với tỏc ủộng ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn gõy bệnh cũng khỏc nhau và khỏc biệt ở mức ý nghĩa 1%. Chủng Rs TT3 bị tỏc ủộng ức chế của vi khuẩn ủối khỏng rừ hơn so với 2 chủng Rs CM4 và Rs TT2.

Bảng 3.4: Khả năng ức chế sự phát triển của 3 chủng vi khuẩn R. solanacearum của các chủng vi khuẩn ủối khỏng ở 24 giờ sau thớ nghiệm

Mặt khỏc, hiệu quả ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn cú khỏc nhau tựy theo từng chủng vi khuẩn gõy bệnh. Chủng vi khuẩn gõy bệnh Rs CM4 bị tỏc ủộng ủối

Vi khuẩn ủối kháng vùng rễ (B)

Bán kính vi khuẩn gây bệnh bị ức chế (mm)

Trung bình Vi khuẩn gây bệnh (A) (B)

Rs CM4 Rs TT2 Rs TT3

PGPR 1 0,0 c 1,4 cd 2,3 cd 1,2 F

Tt 5.10 et 2,7 a 1,6 cd 2,5 cd 2,3 BCD

PGPR 3 2,4 a 4,5 a 2,5 cd 3,1 A

Tt 8.1 t 2,5 a 2,3 bc 4,5 a 3,1 A

Tt 6.2 et 1,7 ab 3,9 a 0,8 e 2,1 CD

PGPR 6 1,8 ab 1,2 cd 0,8 e 1,3 EF

Tt 5.12 t 1,9 ab 0,5 de 4,1 ab 2,2 CD

Tt 7.4 et 2,3 a 1,0 d 2,1 d 1,8 DE

Tt 7.3 e 2,7 a 2,6 b 3,3 bc 2,9 A

Tt 5.5 1,0 b 1,4 cd 2,6 cd 1,7 DEF

Tt 5.9 et 2,6 a 1,5 cd 2,7 cd 2,3 BCD

Tt 5.3 2,8 a 1,2 cd 4,4 ab 2,8 AB

Tt 7.7 et 2,2 a 2,2 bc 3,3 bc 2,6 ABC

PGPR 14 0,0 c 0,0 e 0,2 e 0,0 G PGPR 17 1,1 b 0,6 de 2,7 cd 1,5 EF ðC 0,0 c 0,0 e 0,0 e 0,0 G

Trung bình (A) 1,7 B 1,6 B 2,4 A

CV (%) = 6,04

Ý nghĩa F tính: F VKGB-A = **; F VKðK-B = **; FA*B = **

Giá trị LSD 0,5% (A*B) = 1,12

Ghi chỳ: - Cỏc trung bỡnh trong cựng một cột ủược theo sau bởi một hay những chữ cỏi giống nhau thỡ khỏc biệt không có ý nghĩa thống kê trong phép thử Ducan.

- ** khác biệt ở mức ý nghĩa 1%.

- Số liệu ủược chuyển sang căn (x+0,5) khi phõn tớch thống kờ.

3 và Tt 6.2 et cho hiệu quả ủối khỏng cao nhất; chủng Rs TT3 bị ức chế rừ bởi cỏc chủng Tt 8.1 t, Tt 5.12 t và Tt 5.3.

- Ở thời ủiểm 48 giờ SKTðK (bảng 3.5), khả năng ủối khỏng của cỏc nghiệm thức khỏc biệt ở mức ý nghĩa 1%. Trong ủú, cỏc chủng cú khả năng ủối khỏng mạnh và không khác biệt nhau là: PGPR 1, Tt 5.10 et, PGPR 3, Tt 8.1 t, Tt 5.12 t, Tt 7.3 e, Tt 5.3.

Tỏc ủộng ủối khỏng của từng chủng vi khuẩn ủối khỏng ủối với vi khuẩn gõy bệnh có khác nhau, tuy nhiên không còn rõ nữa.

Mức ủộ nhạy cảm ủối với vi khuẩn ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn gõy bệnh cũng cú sự thay ủổi và khỏc biệt ở mức ý nghĩa 5%. Chủng Rs CM4 tiếp tục ớt bị tỏc ủộng bởi vi khuẩn ủối khỏng hơn so với 2 chủng Rs TT2 và Rs TT3.

Ở thời ủiểm này, chủng PGPR 1 và Tt 5.10 et tăng mạnh khả năng ủối khỏng với cỏc chủng vi khuẩn gõy bệnh hơn so với thời ủiểm 24 giờ SKTðK.

Bảng 3.5: Khả năng ức chế sự phát triển của 3 chủng vi khuẩn R. solanacearum của các chủng vi khuẩn vùng rễ ở 48 giờ sau thí nghiệm

Vi khuẩn ủối kháng vùng rễ (B)

Bán kính vi khuẩn gây bệnh bị ức chế (mm)

Trung bình Vi khuẩn gây bệnh (A) (B)

Rs CM4 Rs TT2 Rs TT3

PGPR 1 5,3 ab 5,3 ab 2,5 ef 4,4 A-D Tt 5.10 et 5,5 a 5,3 ab 2,9 c-f 4,6 ABC PGPR 3 5,3 ab 4,9 ab 2,6 def 4,3 A-D Tt 8.1 t 5,6 a 6,4 a 4,8 a-d 5,6 A Tt 6.2 et 2,6 cd 4,2 ab 2,1 f 3,0 D PGPR 6 2,5 cd 4,0 ab 2,9 c-f 3,1 CD Tt 5.12 t 2,3 cd 4,5 ab 6,1 a 4,3 A-D Tt 7.4 et 3,1 a-d 3,3 b 2,6 def 3,0 D Tt 7.3 e 4,1 abc 4,3 ab 5,1 abc 4,5 ABC Tt 5.5 3,1 bcd 3,0 b 3,6 b-f 3,2 CD Tt 5.9 et 3,8 a-d 3,5 b 3,8 a-f 3,7 BCD Tt 5.3 4,4 abc 4,6 ab 6,2 a 5,1 AB Tt 7.7 et 2,5 cd 3,7 b 5,8 ab 4,0 BCD PGPR 14 0,0 e 1,2 c 0,2 g 0,5 E PGPR 17 1,7 d 3,2 b 4,7 a-e 3,2 CD ðC 0,0 e 0,0 c 0,0 g 0,0 E

Trung bình (A) 3,2 B 3,8 A 3,5 AB

CV (%) = 9,43

Ý nghĩa F tính: F VKGB-A = *; F VKðK-B = **; FA*B = * Giá trị LSD0,5%(A*B) = 2,16

Ghi chỳ: - Cỏc trung bỡnh trong cựng một cột ủược theo sau bởi một hay những chữ cỏi giống nhau thỡ khác biệt không có ý nghĩa thống kê trong phép thử Ducan.

- ** khác biệt ở mức ý nghĩa 1%, * khác biệt ở mức ý nghĩa 5%.

- Số liệu ủược chuyển sang căn (x+0,5) khi chạy thống kờ.

- Ở thời ủiểm 72 giờ sau khi thử ủối khỏng (bảng 3.6), 7 chủng vi khuẩn PGPR 1, Tt 5.10 et, PGPR 3, Tt 8.1 t, Tt 5.12 t, Tt 7.3 e, Tt 5.3 tiếp tục biểu hiện khả năng ủối khỏng mạnh và khụng khỏc biệt nhau về mặt thống kờ . Cỏc chủng này ủều cú khả năng ủối khỏng ở mức trung bỡnh (theo thang ủỏnh giỏ khả năng ủối kháng giữa vi khuẩn với vi khuẩn (Ahmed, N.A, Zahran, E.B. 2006)). (Hình 3.3).

Ở thời ủiểm này, biểu hiện hiệu quả ủối khỏng khụng cũn phụ thuộc vào chủng vi khuẩn gõy bệnh, nghĩa là hiệu quả ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng là như nhau ủối với vi khuẩn gõy bệnh.

Bảng 3.6: Khả năng ức chế sự phát triển của 3 chủng vi khuẩn R. solanacearum của các chủng vi khuẩn vùng rễ ở 72 giờ sau thí nghiệm

Vi khuẩn ủối kháng vùng rễ (B)

Bán kính vi khuẩn gây bệnh bị ức chế (mm)

Trung bình Vi khuẩn gây bệnh (A) (B)

Rs CM4 Rs TT2 Rs TT3

PGPR 1 5,6 ab 6,0 ab 2,8 b 4,8 ABC

Tt 5.10 et 5,6 ab 5,4 ab 3,6 ab 4,9 ABC

PGPR 3 5,7 ab 5,3 ab 2,8 b 4,6 ABC

Tt 8.1 t 6,1 a 7,1 a 5,5 ab 6,2 A

Tt 6.2 et 3,8 abc 4,5 ab 4,5 ab 4,3 BC

PGPR 6 4,8 ab 4,6 ab 3,5 ab 4,3 BC

Tt 5.12 t 3,5 abc 4,9 ab 6,4 a 4,9 ABC

Tt 7.4 et 3,9 abc 3,7 b 5,4 ab 4,3 BC

Tt 7.3 e 4,7 ab 4,8 ab 6,0 a 5,2 AB

Tt 5.5 4,6 abc 3,4 b 4,1 ab 4,0 BC

Tt 5.9 et 4,4 abc 4,2 ab 4,3 ab 4,3 BC

Tt 5.3 5,0 ab 4,9 ab 6,4 a 5,4 AB

Tt 7.7 et 2,7 bc 4,3 ab 6,2 a 4,4 BC

PGPR 14 0,0 d 1,3 c 0,3 c 0,5 D PGPR 17 1,9 cd 3,5 b 5,0 ab 3,5 C ðC 0,0 d 0,0 c 0,0 c 0,0 D

Trung bình (A) 3,9 A 4,2 A 4,2 A

CV (%) = 10,56

Ý nghĩa F tính: F VKGB-A = ns; F VKðK-B = **; FA*B = ns Giá trị LSD0,5%(A*B)= 2,53

Ghi chỳ: - Cỏc trung bỡnh trong cựng một cột ủược theo sau bởi một hay những chữ cỏi giống nhau thỡ khác biệt không có ý nghĩa thống kê trong phép thử Ducan.

- ** khác biệt ở mức ý nghĩa 1%, ns không khác biệt ý nghĩa.

0 1 2 3 4 5 6 7

36 giờ 48 giờ 72 giờ

Thi gian quan sát (gi)

Trung bình bán kính vô khun (mm)

PGPR 1 Tt 5.10 et PGPR 3 Tt 8.1 t Tt 5.12 t Tt 7.3 e Tt 5.3

- Ở cả 3 thời ủiểm khảo sỏt, chủng PGPR 14 ủều biểu hiện khả năng ủối khỏng với 3 chủng vi khuẩn gõy bệnh ở mức ủộ rất yếu và hầu như khụng cú ý nghĩa. Chủng PGPR 14 là chủng vi khuẩn ủối khỏng tốt với vi khuẩn R.

solanacearum gây bệnh héo xanh trên cà chua (Trần Vũ Phến và ctv, 2008, 2009).

ðiều này cho thấy, cỏc chủng vi khuẩn R. solanacearum ủược phõn lập trờn gừng cú ủặc ủiểm khỏc so với R. solanacearum trờn cà chua. Chớnh vỡ vậy, khả năng ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng sẽ khỏc nhau trờn cỏc cõy ký chủ khỏc nhau và ngay cả trên cùng nguồn cây ký chủ là gừng. Kết quả này có thể là do các chủng vi khuẩn vựng rễ cú cơ chế ủối khỏng khỏc nhau (Podile và Kishore, 2006).

Hỡnh 3.3b: Diễn biến hiệu qủa ủối khỏng của 7 chủng triển vọng theo thời gian khảo sỏt Hỡnh 3.3a Khả năng ủối khỏng với vi khuẩn R. solanacearum của một số chủng vi khuẩn triển vọng

Tt 5.10 et

Tt 8.1 t

Tt 7.3 e

Tt 5.3

- Kết quả hỡnh 3.3b cho thấy: cả 7 chủng vi khuẩn vựng rễ ủều gia tăng khả năng ủối khỏng theo thời gian quan sỏt. Trong ủú, chủng Tt 8.1 t biểu hiện khả năng ủối khỏng mạnh hơn và bền theo thời gian; chủng PGPR 1 tăng nhanh khả năng ủối khỏng từ thời ủiểm 36 giờ ủến 48 giờ. Cỏc chủng cũn lại cú tăng khả năng ủối khỏng theo thời gian nhưng ở mức khụng ủỏng kể.

3.4 Thớ nghiệm 4: Khảo sỏt cơ chế ủối khỏng của một số chủng vi khuẩn cú triển vọng theo khả năng tiết siderophores

Thớ nghiệm với 14 chủng vi khuẩn ủối khỏng ủược chọn ra từ thớ nghiệm 3 là: PGPR 1, Tt 5.10 et, PGPR 3, Tt 8.1 t, Tt 6.2 et, PGPR 6, Tt 5.12 t, Tt 7.4 et, Tt 7.3 e, Tt 5.5, Tt 5.9 et, Tt 5.3, Tt 7.7 et, PGPR 17.

Theo Pérez-Miranda et al., 2007 thì môi trường overlaid O-CAS cơ bản có màu xanh, khi ủổ tràn mụi trường này lờn ủĩa mụi trường King’B cú nuụi vi khuẩn ủối khỏng 48 giờ, sau tối ủa 15 phỳt, nếu vi khuẩn cú khả năng tiết siderophores, màu xanh sẽ bị ủổi thành màu ủỏ tớa (siderophores dạng catechol) (Arnow, 1937) hoặc từ xanh sang cam (siderophores dạng hydroxamate) (Neilands, 1981) hoặc từ xanh sang vàng (siderophores dạng carboxylates) (Shenker et al., 1992).

Kết quả thớ nghiệm ủược trỡnh bày ở bảng 3.7 cho thấy, cú 9 chủng cú khả năng tiết siderophores làm thay ủổi màu sắc của overlaid O-CAS tại vị trớ cú vi khuẩn thử nghiệm với các dạng màu khác nhau.

Trong ủú cú 3 chủng là Tt 5.10 et, Tt 5.3, Tt 7.3 e tiết siderophores dạng catechol (Hình 3.4a), các chủng PGPR 1, PGPR 3, Tt 5.9 et, PGPR 6, Tt 5.12 t, PGPR 17 tiết siderophores dạng hydroxamate (Hình 3.4b). Các chủng còn lại tạo quầng trong suốt xung quanh khuẩn lạc và chưa xỏc ủịnh rừ cỏc chủng này cú tiết siderophores hay khụng, cần xỏc ủịnh lại bằng cỏc phương phỏp khỏc (Hỡnh 3.4c).

Trong số 9 chủng có khả năng tiết siderophores thì chủng Tt 5.3 có khả năng tiết siderophores mạnh nhất (4,8 mm), các chủng còn lại khả năng tiết siderophores không khác biệt nhau.

Bảng 3.7 Khả năng tiết siderophores của một số chủng vi khuẩn

Chủng vi khuẩn Màu sắc thay ủổi

Trắc nghiệm Arnow (Arnow, 1937)

Trắc nghiệm FeCl3 (Neilands, 1981)

Bán kính (mm)

PGPR 1 Cam + 1,0 b

Tt 5.10 et ðỏ tía + 1,4 b

PGPR 3 Cam + 1,0 b

Tt 5.3 ðỏ tía + 4,8 a

Tt 5.9 et Cam + 1,2 b

PGPR 6 Cam + 1,0 b

Tt 5.12 t Cam + 1,5 b

PGPR 17 Cam + 1,1 b

Tt 7.3 e ðỏ tía + 2,1 b

Tt 8.1 t Trong suốt

Chưa rõ, cần khảo sát thêm Tt 7.7 et Trong suốt

Tt 7.4 et Trong suốt Tt 6.2 et Trong suốt

TT 5.5 Trong suốt

CV(%)=10,72 Ý nghĩa F tính *

Ghi chỳ: - Cỏc trung bỡnh trong cựng một cột ủược theo sau bởi một hay những chữ cỏi giống nhau thỡ khác biệt không có ý nghĩa thống kê trong phép thử Ducan.

- *: khác biệt ý nghĩa 5%.

- Số liệu ủược chuyển sang căn (x +0,5) khi phõn tớch thống kờ.

- + : có tiết siderophores.

Hỡnh 3.4a: Màu ủỏ tớa của chủng Tt 7.3 e sau khi thử khả năng tiết siderophores

Hình 3.4b: Màu cam của chủng Tt 5.12 t sau khi thử khả năng tiết siderophores

3.5 ðặc ủiểm một số chủng vi khuẩn vựng rễ triển vọng

Bảng 3.8 ðặc ủiểm khuẩn lạc của một số chủng vi khuẩn ủối khỏng triển vọng

- Theo Biền Văn Minh và ctv. (2006) thỡ một số vi khuẩn ở cuối giai ủoạn sinh trưởng, khi chất dinh dưỡng ở mụi trường cạn kiệt và chất qua trao ủổi ủộc hại quỏ nhiều, hoặc do cú sự thay ủổi ủột ngột cỏc ủiều kiện sinh trưởng cú khả năng hỡnh thành bào tử ở bờn trong tế bào, ủược gọi là nội bào tử (endospores). Những vi khuẩn có khả năng hình thành nội bào tử gồm nhiều loài thuộc các giống Bacillus, Clostridium, Desulfotomaculum, Sporosarcina, Sporolactobacillus, Thermoactinomyce.

- ða số cỏc chủng vi khuẩn vựng rễ cú khả năng ủối khỏng tốt với vi khuẩn R.

Chủng

vi khuẩn Màu Hỡnh dạng ðặc ủiểm rìa

Mặt trên

khuẩn lạc ðộ bóng Nhăn Tt 8.1 t Trắng

sáng Tròn Răng cưa Nhô cao Không Nhiều

Tt 5.3 Trắng

ủục Trũn Nhụ, Ít

thùy Bằng phẳng Không

Nhiều Tt 5.10 et Trắng

ủục Trũn Nhụ, Ít

thùy Tâm lõm Không Ít

Tt 7.3 e Trắng

ủục Bất dạng Ít thựy, hơi

nhô Nhô cao Không Nhiều

Tt 5.12 t Trắng

ủục Hơi trũn Nhụ Tõm lừm Khụng Ít

Hình 3.4c: Quầng trong suốt của chủng Tt 7.4 et sau khi thử khả năng tiết siderophores

- Sau 96 giờ nuôi cấy chủng Tt 8.1 t có khả năng sinh nội bào tử nhiều nhất với tỷ lệ nội bào tử/tổng số tế bào là 61,90%, tiếp theo là chủng Tt 5.3 (20,59%), Tt 7.3 e (11,90%) và cuối cùng là Tt 5.10 et (7,01%). Kết quả phù hợp với thí nghiệm ủỏnh giỏ khả năng tạo nội bào tử của cỏc chủng vi khuẩn trong cỏc loại mụi trường khỏc nhau của Trần Văn Nhó (2009). Ở thời ủiểm 24 giờ, cỏc chủng vi khuẩn ủều tạo nội bào tử nhưng với số lượng khụng ủỏng kể và tăng nhiều ở thời ủiểm 96 giờ.

- Các chủng vi khuẩn có khả năng tạo nội bào tử nhiều trong môi trường nghèo dinh dưỡng và khả năng tồn tại tốt hơn. Khả năng tạo nội bào tử của các chủng vi khuẩn tạo ủiều kiện bước ủầu cho cỏc thớ nghiệm tiếp theo nhằm nghiờn cứu tạo thành chế phẩm sinh học từ cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng cú triển vọng.

Bảng 3.9 ðặc ủiểm Gram và nội bào tử của cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng triển vọng

Chủng

vi khuẩn Gram Số nội bào tử

(NBT)

Tổng số tế bào (TB)

Tỷ lệ NBT/ Tổng số TB (%)

Tt 8.1 t + 13 21 61,90

Tt 5.3 + 7 34 20,59

Tt 5.10 et + 4 57 7,01

Tt 7.3 e + 5 42 11,90

Tt 5.12 t + - - -

Ghi chú: +: Vi khuẩn gram dương - : Chưa khảo sát

Số nội bào tử và tổng số tế bào ủược lấy trung bỡnh số liệu 3 trường bất kỳ khi ủếm trờn lame ở vật kớnh 100 X ở thời ủiểm 96 giờ nuụi cấy.

Nội bào tử màu xanh

Tế bào sinh dưỡng màu hồng

Hình 3.5 Nội bào tử và tế bào sinh dưỡng của chủng TT 8.1 t

- Tất cả cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng triển vọng ủều cú ủặc ủiểm khuẩn lạc nhăn, gram dương và có khả năng tạo nội bào tử sau 24 giờ nuôi cấy. ðiều này có thể kết luận cỏc chủng vi khuẩn vựng rễ trờn ủều thuộc chi Bacillus và với kớch thước nội bào tử ≤ 1 àm thỡ cỏc chủng Bacillus này thuộc nhúm 2 và ủều khụng phải là B. anthracis (Pritze. D, 2002) (Bảng 3.10).

Bảng 3.10 Kớch thước nội bào tử và tế bào sinh dưỡng của cỏc chủng vi khuẩn ủối khỏng triển vọng

Chủng vi khuẩn

Nội bào tử Tế bào sinh dưỡng

ðường kính (àm)

Chiều dài (àm)

ðường kính (àm)

Chiều dài (àm)

Tt 8.1 t 0,7 1, 3 0,7 1,5

Tt 5.3 0,8 1,2 0,8 2

Tt 5.10 et 0,7 1,1 0,7 1,8

Tt 7.3 e 1 1,3 1 2

Tt 5.12 t 0,6 1 0,6 1,5

Ghi chỳ: Nội bào tử và tế bào sinh dưỡng của vi khuẩn ủược quan sỏt ở vật kớnh 100X

KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 1. Kết luận

- Trong cỏc chủng vi khuẩn gõy bệnh phõn lập ủược, chủng R. solanacearum Rs CM4 cú mức ủộ gõy bệnh thối củ gừng nặng nhất và cao hơn 2 chủng Rs TT2 và Rs TT3.

- Thớ nghiệm ủỏnh giỏ khả năng ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn vựng rễ với ba chủng vi khuẩn R. solanacearum gây bệnh thối củ gừng cho kết quả 7 chủng có khả năng ủối khỏng tốt là PGPR 1, PGPR 3, Tt 8.1 t, Tt 5.3, Tt 7.3 e, Tt 5.10 et và Tt 5.12 t. Trong ủú, chủng TT 8.1 t là chủng biểu hiện khả năng ủối sớm và mạnh với cả 3 chủng vi khuẩn gây bệnh. Trừ 2 chủng PGPR 1 và PGPR 3, 5 chủng vi khuẩn ủối khỏng cũn lại ủều là vi khuẩn thuộc chi Bacillus.

- Thớ nghiệm cũng chứng minh ủược rằng, ủối với cỏc chủng vi khuẩn gõy bệnh R. solanacearum trên các loại cây ký chủ khác nhau và ngay cả trên cùng một loại cõy ký chủ thỡ khả năng ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn vựng rễ cũng khỏc nhau.

- 9/14 chủng vi khuẩn cú hiệu quả ủối khỏng cú cơ chế ủối khỏng liờn quan ủến khả năng tiết siderophores. Trong ủú cú 3 chủng là Tt 5.10 et, Tt 5.3, Tt 7.3 e tiết siderophores dạng catechol, các chủng PGPR 1, PGPR 3, Tt 5.9 et, PGPR 6, Tt 5.12 t, PGPR 17 tiết siderophores dạng hydroxamate. Chủng Tt 5.3 có khả năng tiết siderophores mạnh nhất sau 15 phút thí nghiệm.

2. ðề nghị

- Tiếp tục khảo sỏt về hiệu quả ủối khỏng của cỏc chủng cú ủối khỏng trong phũng thớ nghiệm ở ủiều kiện nhà lưới.

- Tỡm hiểu thờm về cơ chế ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn cú triển vọng, khảo sát rõ hơn về khả năng tạo quầng trong suốt xung quanh khuẩn lạc của một số chủng vi khuẩn ở thí nghiệm 4.

- Tỡm hiểu hiệu quả ủối khỏng của cỏc chủng vi khuẩn khi nuụi ở những ủiều kiện mụi trường khỏc nhau thụng qua việc ủỏnh giỏ khả năng tạo nội bào tử.

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Antoun, H. and D. Prévost, 2005. Ecology of plant growth promoting rhizobacteria, in: PGPR: Biocontrol and Biofertilization, Siddiqui Z., (ed), Springer, the Netherlands, pp. 1-38.

Arnow, L.E., 1937. Colorimetric determination of the components of 3,4- dihidroxyphemylalanine-tyrosine mixtures. J. Biol. Chem. 118, 531–537.

Biền Văn Minh, Phạm Văn Ty, Kiều Hữu Ảnh, Phạm Hồng Sơn, Phạm Ngọc Lan, Nguyễn Thị Thu Thúy. 2006. Bài giảng Vi Sinh Vật học. Nhà xuất bản ðại Học Huế.

Burton G.R.W., P.G. Engelkirk. 2003. Microbiology for the Health Sciences. 7th Edition. Lippincott Williams & Wilkins.

Cattenlan, A.J., P.G. Hartel, and J.J. Fuhrmann, 1999. Screening for plant growth- promoting rhizobacteria to promote early soybean growth. Soil Sci. Soc. Am. J.

63: 1670-1680.

Cavaglieri, L. R, L. Andres, M. Ibanez, and M.G Etchevery, 2004. Rhizobacteria and their potential to control Fusarium verticillioides: effect of maize bacterisation and inoculum density. Antonie van Leeuwenhoek 87: 179-187.

Chen, W.Y., and Echandi, E. 1984. Effect of avirulent bacteriocin-producing strains of Pseudomonas solanacearum on the control of bacterial wilt. Plant Pathol., 33, 245–253.

ðỗ Tấn Dũng. 2004. Bệnh héo rũ cây trồng cạn và biện pháp phòng chống. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội.

ðường Hồng Dật. 1997. Sổ tay bệnh hại cây trồng tập 2. Nhà xuất bản Nông Nghiệp.

Frankenberger Jr, W.T and M. Arshad, 1991. Microbial production of plant growth regulating substances in soil. In C. Keel, B. Koller, and G. Defago (Eds). Plant Growth-Promoting Rhizobacteria, Progress and Prospects. The Second International Workshop on PGPR. Interlaken, Switzerland, 14: P.162-171 Frey, P., Prior, P., Trigalet-Demery, D., and Trigalet, A. 1993. Hrp-mutants of

Pseudomonas solanacearum for biological control of tomato bacterial wilt. In:

Hartman, G.L., and Hayward, A.C. (eds.) Bacterial Wilt. Proceedings of an international symposium, Kaohsiung, Taiwan, ROC, Oct. 29–30, 1992, ACIAR Proceedings 45, 257–260, ACIAR, Canberra.

Fritze D. (2002), "Bacillus Identification –Traditional Approaches", in Berkeley R., Heyndrickx M., Logan N., De Vos P. (eds.), Applications and Systematics of

Hayward, A.C. (2000) Ralstonia solanacearum. In: Lederberg, J. (ed.) Encyclopedia of MicrobiologySan Diego, Academic Press, 4, 32–42.

Husen, E, 2003. Screening of soil bacteria for plant growth promotion activites in vitro Indonesian Journal of Agricultural Science 4(1): 27-31.

Kloepper, J. W., C.M. Ryu, and S.Zhang, 2006. Bacterial Endophytes as Elicitors of Induced Sytemic Resistance. In: Schulz B., C. Boyle, T. N. Sieber (Eds). Soil Biology, Vol. 9, Microbial Root Endophytes. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. Pp:33-52.

Lê Lương Tề và Vũ Triệu Mân. 1999. Bệnh vi khuẩn hại cây trồng. Nhà Xuất Bản Giáo Dục.

Mai Văn Quyền, Lê Thị Việt Nhi, Ngô Quang Vinh, Nguyễn Thị Hòa, Nguyễn Tuấn Kiệt. 2007. Cây rau gia vị. Nhà xuất bản Nông Nghiệp thành phố Hồ Chí Minh.

Neilands, J.B., 1981. Microbial iron compounds. Annu. Rev. Biochem. 50, 715-731.

Neilands, J.B., 1995. Siderophores: structure and fuction of microbial iron transport compounds. J. Biol. Chem. 270, 26723-26726.

Nelson, L. M. 2004. Plant growth promoting rhizobacteria (PGPR): Prospects for new inoculants. Online.Crop Management doi:10.1094/CM-2004-0301-05-RV.

Nguyễn Mạnh Chinh và Nguyễn ðăng Nghĩa, 2007. Trồng-chăm sóc và phòng trừ sâu bệnh Rau gia vị. Nhà xuất bản thành phố Hồ Chí Minh.

Nguyễn Thị Nghiêm. 2006. Tài liệu tập huấn khuyến nông tài liệu lưu hành nội bộ.

Bộ môn Bảo vệ Thực vật, Khoa Nông Nghiệp và Sinh học ứng dụng, Trường ðại học Cần Thơ.

Nguyễn Thị Thu Hằng. 2008. Chọn lọc các chủng vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng (PGPR) cú khả năng ủối khỏng nấm Fusarium oxysporium gõy bệnh héo rũ cà chua. Luận văn tốt nghiệp kỹ sư Nông học. Trường ðại học Cần Thơ.

Nguyễn Trọng Cần. 2007. Chọn lọc các dòng vi khuẩn vùng rễ kích thích tăng trưởng (PGPR) có khả năng ứng dụng trong phòng trừ sinh học chống bệnh héo xanh Ralstonia solanacearum và kích thích tăng trưởng trên cây cà chua.

Luận văn tốt nghiệp ủại học ngành Trồng trọt, trường ðại học Cần Thơ.

Nguyễn Văn Viên Và ðỗ Tấn Dũng. 2003. Bệnh hại cà chua do nấm, vi khuẩn và biện pháp phòng chống. Nhà xuất bản Nông Nghiệp Hà Nội.

OEPP. 2004. Ralstonia solanacearum. Diagnostic protocols for regulated pests1 .Protocoles de diagnostic pour les organismes réglementés. Bulletin OEPP/EPPO Bulletin 34, 173 –178

Okon, Y. and Y. Kapulnik, 1986. Development and fuction of Azospirillum- inoculated Roots. Plant and Soil 90: 3-16.

Một phần của tài liệu TUYỂN CHỌN VI KHUẨN VÙNG rễ THUỘC CHI BACILLUS đối KHÁNG với VI KHUẨN RALSTONIA SOLANACEARUM gây BỆNH THỐI củ GỪNG (Trang 37 - 55)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(55 trang)