LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU
1.5.11 Tình hình sản suất chế phẩm Metarhizium anisopliae
Năm 1878, Metschnhikov ủó phỏt hiện và phõn lập ủược nấm xanh Metarhizium anisopliae trờn sõu non bộ cỏnh cứng hại lỳa mỡ (Anisophiae austrinia). Tỏc giả ủó tỡm ra sõu mang bệnh nấm và nghiờn cứu ủể nhõn nuụi chỳng rồi thử lại bằng cỏch sử dụng bào tử nấm thuần khiết gây bệnh trên ấu trùng và dạng trưởng thành của sõu non bọ ủầu dài hại củ cải ủường (Bothinoders punctiventris), ụng nhận thấy cú
hiệu quả. Sau ủú, Metschnhikov vẫn miệt mài với những nghiờn cứu ứng dụng nấm trờn ủồng ruộng và xỏc ủịnh khả năng sử dụng nấm gõy bệnh trờn cụn trựng vào thực tiễn sản xuất. Cùng với học trò của mình là nhà côn trùng học Isac Craxinstic, ụng ủó tiến hành sản xuất bào tử nấm Metarhizium anisopliae dạng thuần khiết rồi trộn với chất bột nền và ủưa ra ủồng ruộng ủể diệt sõu non và trưởng thành bọ ủầu dài hại củ cải ủường (Bothinoders punctiventris), hiệu quả ủạt ủược 55 - 80% sau 10 - 15 ngày thử nghiệm (Phạm Thị Thuỳ, 2004).
Theo Bartlett M. C. và Jaronski S. T.(ủược trớch dẫn bởi Yasuhisa Kunimi, 2005), Krassilstchik là người ủầu tiờn dựng mụi trường nhõn tạo ủể sản xuất chế phẩm nấm ký sinh cụn trựng vào năm 1884. Brazil cũng ủó sản xuất chế phẩm nấm diệt cụn trựng bằng gạo hoặc cỏm lỳa mỡ ủựng trong bọc plastic thanh trựng (Aquino et al., 1975, 1977 ủược trớch dẫn bởi Bartlett và Jaronski).
Tại Cuba, những năm 1970 - 2002, viện cụng nghệ sinh học Lahabana ủó nghiờn cứu công nghệ sản xuất chế phẩm Metarhizium anisopliae trên môi trường tấm gạo với dung dịch cacbonat canxi 0,5%, bằng phương pháp luộc tấm gạo rồi sấy khô sau ủú nhõn giống thuần. Phương phỏp này ủó ủạt ủược kết quả bước ủầu trong việc sử dụng nấm trừ một số sâu hại cây trồng. Hiện nay nền công nghệ sinh học ở Cuba phỏt triển rất nhanh, phương phỏp nhõn giống nấm trờn tấm hoặc gạo ủó ủược phỏt triển quy mụ lớn. Phương phỏp này ủó ủược thử nghiệm ở viện Bảo Vệ Thực Vật năm 2002 song kết quả thu ủược khụng ổn ủịnh, mất nhiều thời gian, tốn cụng cho luộc và sấy tấm khi sản xuất trong túi nilon dễ bị tạp nhiễm, chất lượng thấp và khụng ổn ủịnh, vỡ sản xuất rất phức tạp, năng suất khụng cao 107 - 108 bào tử/gam.
So với lên men xốp của viện Bảo Vệ Thực Vật (1996) thì phương pháp của Cuba cho hiệu suất thấp hơn và thời gian nuụi cấy lõu hơn, giỏ thành ủắt hơn mặc dự cú cải tiến nhõn giống bằng mụi trường dịch thể sau ủú nuụi cấy nấm trong tỳi PP, nhưng ủiều quan trọng nhất vẫn phải ủảm bảo là phõn loại và xỏc ủịnh ủỳng chủng giống, nếu sai nấm sẽ không có hiệu quả (Phạm Thị Thùy, 2004).
Lotong và Suwanarit (1983) ủó mụ tả việc nuụi cấy nấm trong bọc poly propylene kớch thước 16 x 25 cm, chứa 10 gram cơm ủó ủược chủng nấm Aspergillus flavus hoặc A. oryzae ủược ủ ở 300C. Hiện tại cú 2 nhà mỏy ủịa phương của Thỏi Lan ủang sản xuất chế phẩm nấm Metarhizium trong bọc nilon có kích thước 40 x 60 cm (Bartlett Jaronski ủược trớch dẫn bởi Yasuhisa Kunimi, 2005).
Farooq A. Shah et al. (2008) ủó dựng bỏnh hạt neem tạo chế phẩm Metarhizium anisopliae ủể phũng trừ ấu trựng mọt ủầu dài (Black vine weevil) hại nho. Chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae cũng ủược tạo ra từ việc nuụi cấy trong mụi trường nước sữa (whey- based) (Adane Kassa et al., 2008).
Hiện nay, trờn thế giới ủó cú nhiều nước sản xuất ra nấm Metarhizium anisopliae cú khả năng thương mại hoá trên thị trường là:
- Bio-Pathđ ủược sử dụng phũng trừ mối tại Mỹ.
- BioGreenđ ủược khuyến cỏo phũng trừ bọ hung ủầu ủỏ, Adoryphorus couloni ở Úc.
- Metaquino dùng phòng trừ muỗi sốt rét Lubilose, châu chấu, Schistocerra gregaria (Kunimi, 2005; Kunimi, 2007).
Tại Việt Nam
Kết quả nghiờn cứu của Phạm Thị Thựy và ctv. (1992) ủó xỏc ủịnh ủược mụi trường nhân giống cấp 1 chính là môi trường Sabouraud bổ sung thêm khoáng chất. Năm 2003 - 2004, Phạm Thị Thuỳ và ctv. ủó nghiờn cứu mụi trường sản xuất nấm Metarhizium anisopliae cú thành phần 50% cỏm gạo, 20% bột ngụ, 20% bột ủậu, 10% trấu với tỷ lệ nước môi trường sản xuất là 50%, cấy chủng nấm Metarhizium anisopliae ủược phõn lập trờn bọ hại dừa Phỳ Quốc, chất lượng chế phẩm cao ủạt 3 x 1010 bào tử/gam. ðến nay viện Bảo Vệ Thực Vật vẫn ủang tiến hành sản xuất và trợ giỳp cho Viện lỳa ễ Mụn tại ðồng bằng sụng Cửu Long thực hiện từ ủầu năm 2000 (Phạm Thị Thuỳ, 2004).
Trịnh Thị Xuõn (2006) cũng ủó sản xuất chế phẩm nấm Metarhizium anisopliae với các nguyên liệu như 50% trấu + 10% - 20% cám + 15% - 20% bắp + 15% - 20%
ủậu nành + 0% - 1% Pepton hoặc dựng tấm hoặc gạo lức với cỏc tỉ lệ nước khỏc nhau từ 65% - 80%.
Trần Văn Hai, Trịnh Thị Xuõn và ctv. (2009) ủưa ra quy trỡnh sản xuất nấm xanh tại nụng hộ như sau: Ngõm gạo với nước trong 1 giờ, cho gạo ủó ngõm vào bọc nylon kích thước 20 x 30 cm (0,5 kg/bọc). Hấp thanh trùng bằng nồi nhôm tự chế trong khoảng 1 giờ ủến 1 giờ 30 phỳt. Sau ủú lấy ra ủể nguội, cấy nấm nguồn Metarhizium anisopliae vào từng bọc, 1/6 ủĩa petri (ủường kớnh 9,5 cm) cú chứa nấm nguồn. ðem ủ chế phẩm trong ủiều kiện nhiệt ủộ từ 28 - 300C, lắc bọc chế phẩm 1 lần/ngày. Chế phẩm cú thể sử dụng ủược sau 10 - 14 ngày nuụi cấy (Bựi Xuân Hùng, 2009).
Nguyễn Thị Lộc và ctv. (2009) cũng ủưa ra quy trỡnh sản xuất nhanh Ometar (nấm xanh) ở nụng hộ ủể phũng trừ sõu hại cho cõy trồng và rầy nõu hại lỳa như sau: Cho tấm gạo vào bịch nylon chịu nhiệt với trọng lượng mỗi tỳi 300g. Sau ủú cho vào mỗi bịch nylon 150 – 180 ml nước sạch tựy theo ủộ dẻo của tấm. Dựng ủoạn ống nước bằng nhựa ủó cắt ngắn 2,5 cm tạo miệng bịch nylon giống hỡnh cổ chai ủể cú thể cấy nấm vào. Sử dụng bụng khụng thấm ủể làm nỳt bụng. Lấy giấy bịt kớn ủầu nỳt bụng lại. Cỏc bịch mụi trường thụ ủó làm ủược lắc ủều và sau ủú cho vào nồi
hấp tiệt trựng ở nhiệt ủộ 1000C (nước sụi) trong thời gian 2 giờ. Mụi trường thứ cấp sau khi hấp tiệt trựng ủược ủưa ra phũng sạch ủể nguội rồi thỏo lớp giấy bịt ủầu nỳt bông và bóp cho môi trường tơi ra trước khi cho vào tủ cấy. Tháo nút bông của bịch môi trường thô ra và lấy không khí sạch trong tủ cấy vào bịch càng nhiều càng tốt ủể ủảm bảo ủủ lượng khụng khớ cho nấm hụ hấp (vỡ nấm hụ hấp rất mạnh). Sau khi ủó lấy ủủ lượng khụng khớ vào bịch thỡ cho một lượng bào tử nấm xanh thớch hợp vào bịch mụi trường thụ (một ống giống cấy ủược khoảng 8 - 15 bịch mụi trường thụ), xếp cỏc bịch nấm ủó cấy hoàn tất lờn kệ cao và ủể nơi khụ rỏo thoỏng mỏt cho nấm phỏt triển. Sau ủú cứ 3 ngày thỡ tiến hành ủảo nấm một lần cho tới khi cú thể sử dụng ủược (khoảng 15 ngày).