Chương 3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN
3.2.1. Trong môi trường lỏng
> Thời điểm xuất hiện bào tử:
Khi quan sát trên vi trường tại thời điểm 24h thấy có bào tử màu đỏ.
Trong khi đó trong môi trường lỏng không có ion mangan, sau 72h bào tử mới xuất hiệnắ Điều đó cho thấy ảnh hưởng tích cực của ion mangan tới sự hình thành bào tử, kích thích bào tử xuất hiện sớm hơnệ
> Thời điểm thu nhiều bào tử nhất: lượng sinh khối và bào tử tạo thành theo thời gian được thể hiện trong bảng 3.5
Bảng 3.5: Tương quan giữa lượng bào tử và sinh khối trong môi trường lỏng có ỉon mangan
^ ( N g a y ) ^ \
Lượng sinh khối (mg)
Lượng bào tử (mg)
% bào tử hình thành so với sinh khối
1 831,0 79,5 9,57
2 743,0 158,3 22,16
3 446,5 252,9 56,64
4 397,2 258,5 65,00
5 350,4 245,4 70,03
6 394,0 301,6 76,55
7 356,3 168,6 47,32
thời gian (ngày)
Hình 3.10: Biểu đồ thể hiện sự tương quan giữa lượng bào tử và sinh khối trong môi trường lỏng có ion mangan
Kết quả ở bảng 3.5 và hình 3.10 cho thấy, tại thời điểm 24h lượng sinh khối thu được lớn nhất (831,0 mg sinh khối ướt/50ml dịch lên men), sau đó lượng sinh khối giảm dàn. Như vậy, khi môi trường có ion mangan sẽ kích thích tế bào B. clausii sinh trưởng mạnh mẽ hơn, chỉ sau 24h lượng sinh khối đạt lớn nhất (831,0 mg), trong khi đó môi trường không có ion mangan lượng sinh khối đạt lớn nhất tại thời điểm 72h (655,2 mg)ắ
Lượng bào tử tăng dần theo thời gian nuôi cấy và đạt lớn nhất khi môi trường nuôi cấy bổ sung ion mangan là sau 6 ngày (301,6 mg) chiếm 76,55%
so với tổng lượng sinh khối. Lượng bào tử đạt lớn nhất trong môi trường lỏng không có ion mangan là sau 4 ngày, cũng chỉ đạt 51,35% so với tổng lượng sinh khối, trong khi đó môi trường có ion mangan lượng bào tử sau 4 ngày cũng đạt được 65% so với tổng sinh khối.
Như vậy, ion mangan được thêm vào môi trường nuôi cấy sẽ kích thích bào tử tạo ra sớm hom và nhiều hơn.
3ệ2.2. Trong môi trường đặc
> Thời điểm xuất hiện bào tử: sau 24h làm tiêu bản soi dưới kính hiển vi thấy bào tử màu đỏ xuất hiện nhiều.
Hình 3.11: Hình ảnh B. clausii trong môi trường đặc có ỉon mangan sau 24h
> Thời điểm thu bào tử B. clausii lớn nhất:
Lượng sinh khối và bào tử B. clausỉi thu được theo thời gian nuôi cấy được thể hiện trong bảng 3.6.
Bảng 3.6: Tương quan giữa lượng bào tử và sinh khối trong môi trường đặc có ion mangan
^ N g à y K
Lượng sinh khối (mg)
Lượng bào tử (mg)
% bào tử hình thành so YÓi sinh khối
1 367,9 218,7 59,45
2 307,4 201,9 65,68
3 364,3 286,0 78,51
4 361,8 357,8 98,89
Kết quả ở bảng 3.6 cho thấy, sau 24h lượng bào tử đạt trên 50% so với tổng lượng sinh khối. Tới 4 ngày (96h) lượng bào tử đạt trên 98% so với tổng lượng sinh khối. Lượng bào tử đạt được cũng cao hơn nhiều so với lượng bào tử tạo thành khi nuôi cấy trong môi trường lỏng có ion mangan và môi trường đặc không có ion manganệ
Hình 3Ế12: So sánh sự hình thành bào tử trong 2 môi trường đặc có và không có ỉon mangan
Môi trường không có mangan, sau 7 ngày mới đạt trên 80%, trong khi môi trường có ion mangan sau 4 ngày đạt trên 98%. Theo các nghiên cứu của Rossont R. A. và Nealson Kắ H. [19], tất cả các vi khuẩn đòi hỏi có ion mangan ở mức độ thấp cho sự tăng trưởng và trao đổi chất, trực khuẩn nói chung càn nhiều ion mangan hơn cho sự hình thành các bào tử kháng nhiệt so với khi phát triển tế bào sinh dưõngệ Các kết quả ở trên đã cho thấy, khi được bổ sung ion mangan vào môi trường nuôi cấy B. clausii sẽ tăng trưởng mạnh mẽ về số lượng đặc biệt ở 24h đàu, đồng thời cũng kích thích sự hình thành bào tử. Cơ chế hình thành bào tử được De Vrind J. p. M. [8] đưa ra là do khi đó Mn2+ sẽ bị oxy hóa thành MnƠ2 bám trên bề mặt bào tửệ Theo Mikio Amaha và cộng sự [5], với loài Bacillus coagulans khi nuôi cấy trong môi trường đặc có ion mangan sau 3 ngày sự hình thành bào tử gần như là hoàn toàn.
❖ Kểtluận:
lon mangan có tác động tích cực lên quá trình tạo bào tử của vi khuẩn, việc thêm ion mangan với nồng độ 10'5 M vào môi trường lỏng và đặc đều làm tăng lượng bào tử thu đượcệ Như vậy, điều kiện lựa chọn để thu bào tử là môi trường đặc có bổ sung ion mangan với nồng độ 10"5 M.