+ Các chồi sau khi được tái sinh, không bị nhiễm nấm, vi khuẩn được lựa chọn đưa vào nuôi cấy.
+ Sử dụng dao cấy (lưỡi dao số 11 đã được khử trùng) nhẹ nhàng tách các chồi đã tái sinh ra khỏi đoạn thân, kích thước mỗi đoạn chồi có chiều dài từ 0,5-1cm, dùng pank cấy gắp đặt trên bề mặt môi trường nuôi cấy đã được chuẩn bị trước.
+ Mẫu được cấy với mật độ đồng đều, cấy xong đưa vào phòng nuôi cây. Sau đó tiến hành theo dõi số chồi và chất lượng chồi (quan sát bằng mắt thường).
Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của nồng độ BA đến hệ số nhân nhanh
của chồi Khoai mỡ (Dioscorea alata L.) (sau 30 ngày nuôi cấy).
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn. Với 5 công thức, mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại cấy 10 bình, mỗi bình cấy 1 mẫu. Thí nghiệm được bố trí như sau:
Công thức thí nghiệm Nồng độ BA (mg/l) 1 (Đ/C) MT nền + 0,0 2 MT nền + 0,1 3 MT nền + 0,5 4 MT nền + 1,0 5 MT nền + 2,0
Chỉ tiêu theo dõi sau 30 ngày: Hệ số nhân, chất lượng chồi.
Ghi chú: MT nền = Thành phần của môi trường MS (khoáng đa lượng + vi lượng + vitamin + Inositol 0,1g /l + đường 30g /l + agar 6g /l, pH = 5,6 – 5,8) + than hoạt tính 1g/l.
Nồng độ BA thích hợp cho nhân nhanh chồi Khoai mỡ xác định ở thí nghiệm 4 (ký hiệu A) được sử dụng cho thí nghiệm tiếp theo.
Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng BA kết hợp Kinetin đến hệ
số nhân nhanh chồi Khoai mỡ (Dioscorea alata L.) (sau 30 ngày nuôi cấy).
Bố trí thí nghiệm: Thí nghiệm bố trí theo kiểu ngẫu nhiên hoàn toàn. Với 5 công thức, mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại cấy 10 bình, mỗi bình cấy 1 mẫu. Môi trường nuôi cấy sử dụng MT nền bổ sung nồng độ BA (A) mg/l kết hợp với các nồng độ Kinetin. Thí nghiệm được bố trí như sau:
Công thức thí nghiệm Nồng độ Kinetin (mg/l)
1 MT nền + A + 0,0
2 MT nền + A + 0,1
3 MT nền + A + 0,3
4 MT nền + A + 0,5
Chỉ tiêu theo dõi sau 30 ngày: Hệ số nhân, chất lượng chồi.
Ghi chú: MT nền là thành phần của môi trường MS (khoáng đa lượng + vi lượng + vitamin + Inositol 0,1g /l + đường 30g /l + agar 6g /l, pH = 5,6 – 5,8) + than hoạt tính 1g/l.
3.5.5. Phương pháp nghiên cứu nội dung 5