CHƯƠNG 2: NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2. Nội dung nghiên cứu
2.2.3. Khảo sát hiệu quả thuỷ phân của enzyme Bromelain công nghiệp và
Vật liệu: Vỏ dứa, enzyme Bromelain công nghiệp và phụ phế phẩm cá Tra.
Phương pháp thực hiện: Thí nghiệm được bố trí kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên CRD với 2 nghiệm thức và lặp lại 3 lần.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.1. Bảng nghiệm thức khảo sát hiệu quả thuỷ phân của enzyme Bromelain công nghiệp và enzyme Bromelain vỏ dứa.
Nghiệm thức Enzyme
NT1 Enzyme Bromelain công nghiệp
NT2 Enzyme Bromelain vỏ dứa
Cách tiến hành: Dựa theo phương pháp của Phạm Đình Dũng và Trần Văn Lâm (2013). Nguyên liệu phụ phẩm cá Tra được xử lý sơ bộ để loại bỏ mỡ và các tạp chất, xay nhuyễn, cân vào bình tam giác 50g phụ phẩm cá Tra, cho thêm 75ml nước cất và bổ sung 0,7g enzyme Bromelain công nghiệp có hoạt tính 250 IU/g đối với NT1. Riêng đối với NT2 thì không bổ sung nước mà chỉ bổ sung 75ml dịch
enzyme thô. Tiến hành thuỷ phân ở điều kiện 500C và pH = 5,5 trong thời gian 150 phút. Đến thời gian cố định, kết thúc quá trình thuỷ phân, bất hoạt enzyme bằng cách đun cách thuỷ trong 15 phút, để nguội. Sau đó hút dịch lỏng để phân tích các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Hàm lượng N tổng số bằng phương pháp Kjeldhal (%).
- Hàm lượng N Formol bằng phương pháp Sorensen (%).
2.2.4. Khảo sát ảnh hưởng của thời gian đến quá trình thủy phân phụ phế phẩm cá Tra.
Vật liệu: Vỏ dứa và phụ phế phẩm cá Tra và hóa chất điều chỉnh pH (NaOH 0,1N, HCl 0,1N).
Phương pháp thực hiện: Thí nghiệm được bố trí kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên CRD với 4 nghiệm thức và lặp lại 3 lần.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.2. Bảng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng của thời gian đến quá trình thuỷ phân cá Tra.
Nghiệm thức Thời gian (phút)
NT1 90
NT2 120
NT3 150
NT4 180
Cách tiến hành: Nguyên liệu phụ phẩm cá Tra được xử lý sơ bộ để loại bỏ mỡ và các tạp chất, xay nhuyễn, cân vào bình tam giác 50g phụ phẩm cá Tra, cho thêm 75ml dịch enzyme thô. Tiến hành thuỷ phân ở điều kiện nhiệt độ 500C, pH = 5,5, trong thời gian lần lượt là 90, 120, 150, 180 phút (bố trí thí nghiệm như bảng 2.2).
Đến thời gian cố định, kết thúc quá trình thuỷ phân, bất hoạt enzyme bằng cách đun cách thuỷ trong 15 phút, để nguội. Sau đó hút dịch lỏng để phân tích các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Xác định N tổng bằng phương pháp Kjeldhal (%).
- Xác định N formol bằng phương pháp Sorensen (%).
2.2.5. Khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến quá trình thủy phân phụ phế phẩm cá Tra.
Vật liệu: Vỏ dứa, phụ phế phẩm cá Tra và hóa chất điều chỉnh pH (NaOH 0,1N, HCl 0,1N).
Phương pháp thực hiện: Thí nghiệm được bố trí kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên CRD với 5 nghiệm thức và lặp lại 3 lần.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.3. Bảng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng của nhiệt độ đến quá trình thuỷ phân phụ phế phẩm cá Tra.
Nghiệm thức Nội dung
NT1 400C
NT2 500C
NT3 600C
NT4 650C
Cách tiến hành: Nguyên liệu phụ phẩm cá Tra được xử lý sơ bộ để loại bỏ mỡ và các tạp chất, xay nhuyễn, cân vào bình tam giác 50g phụ phẩm cá Tra, cho thêm 75ml dịch enzyme thô. Tiến hành thuỷ phân ở điều kiện 40 , 50 , 60 , 65 , 70 (bố trí thí nghiệm như bảng 2.3) và pH = 5,5 trong thời gian 150 phút. Đến thời gian cố định, kết thúc quá trình thuỷ phân, bất hoạt enzyme bằng cách đun cách thuỷ trong 15 phút, để nguội. Sau đó hút dịch lỏng để phân tích các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Hàm lượng N tổng số bằng phương pháp Kjeldhal (%).
- Hàm lượng Formol bằng phương pháp Sorensen (%).
2.2.6. Khảo sát ảnh hưởng của pH thủy phân phụ phế phẩm cá Tra.
Vật liệu: Vỏ dứa, phụ phế phẩm cá Tra và hóa chất điều chỉnh pH (NaOH 0,1N, HCl 0,1N).
Phương pháp thực hiện: Thí nghiệm được bố trí kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên CRD với 4 nghiệm thức và lặp lại 3 lần.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.4. Bảng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng của pH đến quá trình thuỷ phân phụ phế phẩm cá Tra.
Nghiệm thức pH
NT1 5
NT2 5,5
NT3 6
NT4 6,5
Cách tiến hành: Nguyên liệu phụ phẩm cá Tra được xử lý sơ bộ để loại bỏ mỡ và các tạp chất, xay nhuyễn, cân vào bình tam giác 50g phụ phẩm cá Tra, cho thêm 75ml dịch enzyme thô. Xác định pH ban đầu và điều chỉnh pH bằng hóa chất HCl 0,1N và NaOH 0,1N để được pH lần lượt là 5, 5,5, 6, và 6,5 (bố trí thí nghiệm như bảng 2.4). Tiến hành thuỷ phân ở điều kiện 500C trong thời gian 150 phút. Đến thời gian cố định, kết thúc quá trình thuỷ phân, bất hoạt enzyme bằng cách đun cách thuỷ trong 15 phút, để nguội. Sau đó hút dịch lỏng để phân tích các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Xác định N tổng bằng phương pháp Kjeldhal (%).
- Xác định N formol bằng phương pháp Sorensen (%).
2.2.7. Ổn định dịch thủy phân bằng sorbic acid.
Vật liệu: Vỏ dứa, phụ phế phẩm cá Tra, hóa chất điều chỉnh pH (NaOH 0,1N, HCl 0,1N) và sorbic acid.
Mục tiêu: Hạn chế sự hao hụt của đạm của dịch thủy phân trong quá trình bảo quản.
Phương pháp tiến hành: Thí nghiệm được bố trí kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên CRD với 7 nghiệm thức và lặp lại 3 lần.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.5. Bảng nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng của sorbic acid trong việc ổn định dung dịch thuỷ phân.
Nghiệm thức Chất chống nấm (%)
NT1( đối chứng) Trước ổn định
NT2 0
NT3 0,25
NT4 0,5
NT5 0,75
NT6 1
NT7 1,5
Cách tiến hành: Dung dịch sau thủy phân hoàn toàn được phối trộn với chất chống nấm (sorbic acid) có tỉ lệ lần lượt như bảng 2.5. Sau 1 tháng tiến hành kiểm tra các chỉ tiêu.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Xác định N tổng bằng phương pháp Kjeldhal (%).
- Xác định N formol bằng phương pháp Sorensen (%).
SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU
Phụ phẩm cá Tra
Định lượng N tổng số, protein tổng số.
Vỏ dứa
Xác định hoạt tính enzyme.
Xác định thời gian, nhiệt độ, pH thủy phân tối ưu.
Dịch thủy phân
Chế phẩm
Chất bảo quản
2.2.8. Khảo nghiệm chế phẩm phân bón lá cho cây cải xanh trồng ngoài đồng.
Phương pháp nghiên cứu: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD), gồm 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, diện tích mỗi ô là 5m2.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.6. Bảng nghiệm thức khảo nghiệm phân bón lá cho cây cải xanh ngoài đồng.
Nghiệm thức Loại phân
NT1 Phun nước lã
NT2 Dịch thủy phân 5%
NT3 Dịch thuỷ phân 10%
NT4 Chế phẩm 5%
NT5 Chế phẩm 10%
NT6 Chế phẩm phân bón đang sử dụng trên thị trường sử dụng theo liều khuyến cáo.
Các tiến hành: Tiến hành trồng cải xanh trong các luống đất. Thời gian phun 2 lần phun (sáng và chiều) ở các thời điểm 7, 14, và 21 ngày sau khi trồng.
Lượng phân sử dụng 0,1 lít trong một lần phun trên 1m2 cải.
Chỉ tiêu theo dõi:
- Chiều cao cây (cm).
- Số lá (lá/cây).
- Trọng lượng trung bình cây (g/cây).
- Năng suất (kg/m2).
2.2.9. Khảo nghiệm chế phẩm phân bón lá cho cây đậu bắp trồng ngoài đồng.
Phương pháp nghiên cứu: Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD), gồm 6 nghiệm thức, mỗi nghiệm thức lặp lại 3 lần, diện tích mỗi ô là 3m2.
Các nghiệm thức:
Bảng 2.7. Bảng nghiệm thức khảo nghiệm phân bón lá cho đậu bắp ngoài đồng.
Nghiệm thức Loại phân
NT1 Phun nước lã
NT2 Dịch thủy phân 5%
NT3 Dịch thuỷ phân 10%
NT4 Chế phẩm 5%
NT5 Chế phẩm 10%
NT6 Chế phẩm phân bón đang sử dụng trên thị trường sử dụng theo liều khuyến cáo.
Các tiến hành: Tiến hành trồng cải xanh trong các luống đất. Thời gian phun 2 lần phun (sáng và chiều) ở các thời điểm 10, 20, 30, 38, 50 và 65 ngày sau khi trồng. Lượng phân sử dụng 0,1 lít trong một lần phun trên 1m2 đậu bắp
Chỉ tiêu theo dõi
- Ngày ra hoa đầu tiên (ngày).
- Ngày thu hoạch đầu tiên (ngày).
- Chiều cao cây (cm).
- Số lượng quả trung bình (quả/cây).
- Trọng lượng trung bình quả (g/quả).
- Năng suất (kg/m2).
2.2.10. Xử lý số liệu
Số liệu thu nhập được xử lý thống kê bằng phần mềm SAS 9.1.