1.5. Cơ sở vật chất trong khoa hóa sinh miễn dịch
2.4.2. Bảo dưỡng máy hàng tuần
• Đặt dung dịch rửa: NaOCl (tuần 1 và 3)
HCl (tuần 2 và 4)
• Vào vị trí W2 trong khay STAT và vị trí DILUTION
• Kích vào biểu tượng SYSTEM STATUS/ W2/ START- Máy tự rửa trong vòng 25 phút
• Sau đó chạy PHOTOCAL: vào SYSTEM/ STATUS/PHOTOCAL/START- Máy sẽ chạy trong vòng 20 phút.
• Kích vào CHECK START/ START → CUVETTE STATUS → SAVE.
3.Máy miễn dịch tự động
Hình 3. Máy miễn dịch tự động Architect plus i1000SR
Xét nghiệm miễn dịch là loại xét nghiệm có độ nhạy cao theo nguyên lý điện hóa miễn dịch.
3.1Nguyên lý:
Kỹ thuật điện hóa phát quang( ECL: Electrode Chemical Luminescence) sử dụng chất đánh dấu Ruthenium khời phát từ nguồn điện chứ không phải từ phản ứng hóa học, vì vậy có khả năng phát hiện chất có nồng độ thấp và cho kết quả rất nhanh, chỉ trong vòng 18 đến 20 phút. Các kháng thể( hoặc kháng nguyên) gắn với Biotin và chất đánh dấu Ruthenium cùng vi hạt phủ Streptavidin được ủ trong hỗn hợp phản ứng. Khi đặt 1 điện
thế lên điện cực vùng đo, phức hợp Ruthenium được kích hoạt và tín hiệu phát quang được hình thành. Tín hiệu được đo và kết quả xét nghiệm được xác định qua đường chuẩn thiết lập.
3.2 Nguyên tắc chung khi chạy máy Miễn dịch tự động Architect plus i1000SR 3.2.1 Đặt bệnh phẩm vào cửa lấy mẫu.
Từ màn hình Snapshot chọn Orders trên Menu bar, chọn Patient Order với các tham số sau:
Order type: chạy một mẫu riêng lẻ hoặc từng mẻ nhiều mẫu (single/batch) Sampling priority: chạy mẫu với chế độ thường hoặc cấp cứu (routine/stat) C: carrier chứa mẫu cần test, P: vị trí của mẫu trên Carrier
SID: mã bệnh phẩm (mã số trên barcode)
Sample manual dilution factor: hệ số pha loãng của mẫu (nếu mẫu có pha loãng trước khi test)
Chọn Sample detail để cung cấp thêm thông tin (họ tên bệnh nhân, tuổi, bác sỹ v.v) 3.2.2. Sau khi máy hiển thị kết quả, in kết quả:
Từ màn hình Snapshot chọn Results, chọn Results Review (hoặc stored results), chọn kết quả cần in, chọn Print, chọn mẫu in, chọn Done.
Chú ý:
- Đèn hiển thị ở cửa lấy mẫu hiển thị:
Màu xanh: sẵn sàng đưa mẫu vào.
Màu vàng: cánh tay robot đã đưa mẫu lên vị trí hút mẫu Màu vàng (nhấp nháy): đã thực hiện xong, bỏ mẫu ra ngoài.
- Khi mất điện quá 4 tiếng cần cất hóa chất vào tủ lạnh.
4 .Máy phân tích nước tiểu tự động.
Máy xét nghiệm nước tiểu hoạt động dựa trên nguyên lý quang học.
Hệ thống quang của máy xét nghiệm nước tiểu bao gồm 6 diode phát quang và 1 diode cảm quang. Có 3 cặp diode phát quang, 1 cặp ở bước sóng 537 nm – màu xanh lá cây, một cặp ở màu vàng bước sóng 610 nm, và một cặp màu đỏ ở bước sóng 660 nm. Mỗi diode của các cặp được đặt đối diện với nhau. Những diode phát quang chiếu sáng 1 diện tích để đọc ( được gọi là diện tích đọc) cố định. Diện tích đó được đặt ở vị trí đặc biệt để phản chiếu ánh sáng vào diode cảm quang. Giá đựng mẫu chuyển diện tích đọc của que thuốc thử vào khoảng đọc để thiết bị đọc. Các đèn phát quang tự động bật lên hoặc tắt đi cho mỗi chu kì đọc của que thử, và các đèn được điều chỉnh bằng điện tử đề duy trì ánh sáng ổn định cho mỗi chu kì đọc. Ánh sáng được phản chiếu từ diện tích đọc của que thuốc thử, được thu nhận bới diode cảm quang và ánh sáng được chuyển thành những xung điện tử.
Những xung điện tử được xử lý bằng hệ thống vi mạch và được chuyển thành kết quả hiển thị trên màng hình.
Máy xét nghiệm nước tiểu dùng để làm các thử nghiệm nhanh với nước tiểu, dùng thanh nhúng vào nước tiểu rồi cho vào máy, sau đó máy sẽ hiển thị kết quả nước tiểu với 10 thông số cơ bản.
Tuy nhiên, cảm quang của mắt người khác với của hệ thống máy móc nên có thể không có sự thống nhất tuyệt đối giữa kết quả quan sát được với kết quả được tính toán trên máy.
Độ nhạy/ Giới hạn nhận biết
Kết quả Vùng kiểm tra
Âm tính
(-) Vết
()
Dương tính
+ ++ +++ ++++
Hồng cầu Số hồng cầu/
ul 0 10 50 250
Bilirubin mg/dl 0 0.5 1 3
Urobilinogen mg/dl 0.1 Bình thường
1 4 8 12
Ketone mg/dl 0 5 10 50 100
Protein mg/dl 0 10 30 100 300 1000
Nitrite mg/dl 0 Dương tính 0.5
Glucose mg/dl 0 100 250 500 1000 2000
pH Giá trị pH 5.0 6.0 6.5 7.0 7.5 8.0 9.0
Tỉ trọng Giá trị tỉ trọng
1.000 1.005 1.010 1.015 1.020 1.025
Bạch cầu Số bạch cầu/
ul
0 25 75 500
10 thông số nước tiểu: (Thành phần hoạt tính, nguyên lý hóa học của quy trình, những giá trị trông đợi và hạn chế của phép kiểm tra)
- Tỷ trọng nước tiểu:
• 1 que thử chứa: 18 ug bromothymol xanh
• Kiểm tra này phản ánh nồng độ ion trong nước tiểu và có liên quan đến phương pháp đo khúc xạ. Sự xuất hiện các ion, proton được giải phóng bởi một hợp chất làm thay đổi màu của chất chỉ thị bromothymol xanh từ xanh lơ sang xanh lá cây đến vàng cam.
• Kiểm tra này cho phép xác định tỉ trọng nước tiểu từ 1.000 đến 1.030.
• Tính chất hóa học của thanh SD color có thể làm cho kết quả tỉ trọng hơi khác biệt so với các phương pháp đo tỉ trọng khác khi hàm lượng các thành phần trong nước tiểu tăng. Nước tiểu có tính kiềm mạnh có thể làm giảm kết quả đọc so với phương pháp
khác. Protein có hàm lượng cao trong nước tiểu (500mg%) có thể làm kết quả đọc tỉ trọng tăng lên.
- pH nước tiểu:
• 1 que thử chứa: 1,3 ug đỏ methyl, 9ug bromothymol xanh
• Kiểm tra này dựa trên chất chỉ thị có dải màu bao phủ toàn bộ dải pH của nước tiểu.
Màu của chỉ thị thay đổi từ da cam sang xanh lá cây, xanh ngọc.
• Cả nước tiểu bình thường và bệnh lý đều có dải pH từ 5 đến 9. pH nước tiểu là một chỉ số quan trong về chuyển hóa, chức năng thận, dạ dày-ruột, hô hấp.
- Các bạch cầu:
• 1 que thử chứa: 9ug dẫn xuất của phenylpyrrole, 7ug muối diazonium.
• Bạch cầu hạt chứa esterase xúc tác cho phản ứng thủy phân liên kết este của dẫn xuất pyrrole amino acid để giải phóng 3-hydroxy-5-phenyl pyrrole. Pyrrole này sau đó tiếp tục phản ứng với muối diazonium tạo sản phẩm có màu đỏ tía.
• Bình thường không có bạch cầu trong nước tiểu. Kết quả vết hoặc dương tính đều có ý nghĩa lâm sàng.
• Nếu mẫu nước tiểu có màu (do có bilirubin hoặc nitrofurantoin), phản ứng màu có thể tăng lên do tác động cộng gộp. Glucose nồng độ ≥ 2g%, protein nồng độ ≥ 500mg% có thể gây âm tính giả. Bilirubin nồng độ ≥ 1 mg% gây phản ứng màu không điển hình.
- Nitrit:
• 1 que thử chứa: 56 ug axit p-arsanilic, 10 ug 1,2,3,4-tetrahydrobenzoquinolin-3-ol
• Kiểm tra này dựa trên phản ứng diazo hóa của nitrite với một amin thơm tạo muối diazo. Màu của sản phẩm diazo tạo nên sự thay đổi màu từ trắng đến hồng.
• Bình thường không có nitrite trong nước tiểu. PHản ứng phát hiện sự có mặt của nitrite, do vậy không trực tiếp chỉ ra sự có mặt của vi khuẩn sinh nitrite trong nước tiểu. Thông thường vi khuẩn gây viêm nhiễm thận, niệu quản, bàng quang. Màu phớt hồng hoặc hồng nhạt không nên khẳng định là kết quả dương tính.
• Axit ascorbic nồng độ ≥ 25 mg% có thể gây âm tính giả.
- Protein:
• 1 que thử chứa: 2 ug Tetrabromophenol xanh.
• Kiểm tra này dựa trên sự thay đổi màu của chất chỉ thị với protein. Màu thay đổi từ vàng cam là kết quả âm tính đến xanh lá cây là kết quả dương tính.
• Bình thường trong nước tiểu có một lượng nhỏ protein. Vì vậy, có một lượng lớn protein trong nước tiểu chứng tỏ có tổn thương ở thận hoặc đường tiết niệu. Chỉ cần kết quả protein niệu vết cũng cần tiến hành những kiểm tra xa hơn.
• Nước tiểu có tính kiềm mạnh có thể gây dương tính giả. Chlorohexidine nồng độ 0,25% (v/v) có thể gây dương tính giả.
- Glucose:
• 1 que thử chứa: Glucose oxydase 1.1 unit, Peroxydase 0.13 unit, Potassium Iodide 0.3 mg.
• Kiểm tra này dựa trên phản ứng đặc hiệu glucose-oxydase / Peroxydase Glucose + O2 Axit glucuronic + H2O2
H2O2 + chromogen oxidized chromogen + H2O
• Bình thường không có glucose trong nước tiểu mặc dù thận bài tiết một lượng nhỏ.
• Những chất tẩy rửa có tính oxy hóa như hypochlorite có thể gây kết quả dương tính giả.
Axit ascorbic nồng độ ≥ 50 mg% có thể gây âm tính giả. Các thể ketone làm giảm độ nhạy của phản ứng. Khả năng phản ứng của glucose tăng khi tỉ trọng nước tiểu tăng.
- Các thể cetonic:
• 1 que thử chứa: 0.19 mg Sodium nitroprusside.
• Kiểm tra này dựa trên sự tăng màu từ nâu nhạt đối với kết quả âm tính đến đỏ tía khi axit acetoacetic phản ứng với nitroprusside.
• Với que thử này, nước tiểu bình thường không có các thể ketone. Phản ứng này kiểm tra axit acetoacetic hoặc aceton trong nước tiểu, không cho biết sự có mặt của axit -hydroxybutyric.
• Kết quả dương tính giả có thể xảy ra khi mẫu nước tiểu có chất màu đậm. Axit 2- mercaptoethane sulfonic nồng độ 10 mg%, Captopril nồng độ 50 mg%, axit phenylpyruvic nồng độ 100mg% và phenylsufophtalein nồng độ 0.05 mg% có thể gây phản ứng dương tính giả.
- Urobilinogen:
• 1 que thử chứa: 26 ug 4-Diethylaminobenzaldehyde.
• Kiểm tra này dựa trên phản ứng Ehrlich cải biến, trong đó 4- Diethylaminobenzaldehyde kết hợp với urobilinogen trong môi trường axit mạnh tạo sản phẩm có màu hồng. Màu phản ứng thay đổi từ nâu nhạt đến hồng
• Bình thường urobilinogen trong khoảng từ 0.1 đến 1.0 đơn vị Ehrlich/dl. Nếu kết quả nồng độ vượt quá 2.0 mg/dl, người bệnh và mẫu nước tiểu nên được nghiên cứu xa hơn.
• Formandehyde nồng độ 1% (v/v) có thể gây kết quả âm tính giả. Khi có axit p- aminosalicylic nồng độ 1000 mg%, màu của phản ứng có thể không điển hình. Axit p- aminobenzoic nồng độ 100 mg% có thể gây phản ứng dương tính giả.
- Bilirubin:
• 1 que thử chứa: 13 ug Sodium nitrite, muối aniline diazonium vừa đủ.
• Kiểm tra này dựa trên phản ứng diazo giữa bilirubin với muối diazo trong môi trường axit tạo thành một azodyl. Sản phẩm có màu từ trắng đến hồng đậm.
• Bình thường không phát hiện được bilirubin trong nước tiểu, thậm chí bằng các phương pháp nhạy nhất. Kết quả bilirubin chỉ cần vết cũng đòi hỏi phải kiểm tra thêm.
• Axit ascobic nồng độ ≥ 25mg%, nitrite ≥ 0.1mg% có thể gây kết quả âm tính giả.
- Hồng cầu:
• 1 que thử chứa: 12 ug tetramethylbenzidine, 5 ul Cumene hydroperoxide.
• Kiểm tra này dựa trên hoạt tính peroxydase của hemoglobin xúc tác cho phản ứng của hydroperoxide hữu cơ và TMB. Sản phẩm có màu từ da cam đến xanh lục.
• Khi có hemoglobin trong nước tiểu chứng tỏ có bệnh về thận hoặc tổn thương ở đường tiết niệu. Trên vùng phản ứng xuất hiện các đốm xanh lá cây (không ảnh hưởng đến bạch cầu) hoặc có màu xanh lá cây trong vòng 60 giây thì cần nghiên cứu thêm. Thử nghiệm này rất nhạy với hemoglobin, vì vậy cần kểm tra thêm về vi sinh.
• Axit ascorbic nồng độ ≥ 50mg%, Catopril nồng độ ≥ 100mg% có thể gây kết quả âm tính giả. Các chất tẩy rửa có tính oxy hóa như hypochlorite có thể dây dương tính giả.
Những vi khuẩn peroxydase liên quan đến viêm nhiễm đường tiết niệu cũng có thể gây dương tính giả.
5. Máy đo khí máu
Hình 5. Máy đo khí máu Cobas b121
A. Nguyên lý:
Khí máu được định lượng bằng phương pháp đo điện thế ( potentionmentry) - dựa trên sự đo lường hiệu điện thế giữa 2 điện cực nhúng trong 1 dd ion.
+ PO2 sử dụng nguyên lý đo Clark – đo cường độ dòng điện tạo nên bởi sự khử oxygen.
+ PCO2 sử dụng nguyên lý đo severinghouse – đo điện thế thay đổi pH ở điện cực gây nên bởi CO2
+ pH, Na+, K+, Cl-, Ca++: giá trị tính toán dựa trên sự tính toán giữa điện cực đo và điện cực tham chiếu.
+ tHb/SO2: giá trị được tính toán dựa trên ánh sáng hấp phụ trong máu toàn phần được đo ở bốn bước sóng.
+ Hematocrit: giá trị được tính toán dựa trên độ dẫn điện của mẫu được đo.
+ Các thông số khác được máy tính tính toán dựa trên các kết quả đo được.
B. Nguyên tắc chung:
1. Đo mẫu
1.Lăn nhẹ nhàng xylanh để trộn mẫu hoàn toàn. Ở màn hình “Ready”
2.Chọn/ loại bỏ thông số theo mong muốn
3.Cẩn thận mở nắp đến vị trí nạp của xilanh và gắn xilanh vào
4.Đến khi xuất hiện lệnh “Close flap” trên màn hình thì lấy xilanh ra và đóng nắp lại 5.Nhập loại mẫu thử đưa vào. Khai báo mẫu sai thì sẽ dẫn đến kết quả sai
2. Kiểm tra chất lượng
1.Để ống QC đạt 25oC rồi lăn nhẹ nhàng ống
2.Ở màn hình “Ready” ấn “additional functions”, “QC measurement” chọn loại QC và mức nồng độ
3.Cẩn thận mở nắp đến vị trí nạp của xilanh và gắn ống QC vào
4.Đến khi xuất hiện lệnh “Close flap” trên màn hình thì lấy ống QC ra và đóng nắp lại 5.Đảm bảo đã nhập đúng mã người vận hành máy (nếu cần) để tối ưu hóa việc theo dõi kiểm tra chất lương.
3. Bảo trì - Hằng ngày:
+ Kiểm tra mực chất lỏng trong bình và giấy in + Lau chùi bề mặt
- Hằng tuần
Lau chùi kim và cổng nạp mẫu
- Mỗi 6 tháng Thay bơm nhu động
Hình 6: máy đo khí máu NOVA pHOx PLUS