Tách chiết ADN tôm sú

Hoá chất được dùng theo bộ kit NKADNPREP-PHCHL do công ty Nam Khoa sản xuất.

Nguyên tắc

Dung dịch Phenol/Chloroform/Isoamyl Alcohol (P/C/I) 25:24:1 sẽ làm biến tính và tủa các protein và chúng sẽ bị tập trung trong lớp phân tách giữa phase lỏng và phase P/C/I sau khi ly tâm. Sau đó, ADN trong phase l ỏng sẽ bị kết tủa bởi ethanol ở nồng độ muối cao.

Tiến hành

 Thêm 180 l TE 1X vào mỗi tube Eppendorf chứa mẫu.

Tiền ly trích với protease K

 Thêm 20 l PROKPREP vào tube, trộn đều.

 Ủ qua đêmở 57ºC.

 Sau khiủ phải vortex mạnh để mẫu mô nát ra hết.

 Thêm 200 l TE 1X vào tube.

Ly trích

 Thêm 400 l P/C/I. Vortex mạnh trong 10 giây.

 Ly tâm 14000 vòng trong 2 phút.

 Hút chuyển phần phase lỏng ở trên chứa ADN vào một tube ly tâm nhỏ mới.

 Thực hiện bước thêm 400l P/C/I, vortex mạnh, ly tâm, hút chuyển phần phase lỏng một lần nữa.

 Thêm 40 l sodium acetate 3M, pH 5.2 vào tube để làm cho ADN dễ bị tủa khi cho ethanol.

 Giữ tube trong tủ lạnh ngăn -20ºC trong 30 phút.

 Ly tâm 14000 vòng trong 5 phút.

 Đổ bỏ phần nước nổi, thấm ethanol dính trên nắp và miệng tube bằng giấy thấm sạch.

 Rửa cặn ADN với 1000l ethanol 70%, không vortex mà chỉ úp ngửa vài lần.

 Ly tâm 14000 vòng trong 5 phút, hút bỏ ethanol bằng máy hút chân không.

 Làm khô cặn bằng cách ủ ởmáy ủ nhiệt khô, nhiệt độ 57ºC trong 10 phút.

 Hoà tan cặn ADN trong 50lđệm TE.