2.1. Địa điểm nghiên cứu
Đề tài được điều tra nghiên cứu trong phạm vi VQG Lò Gò – Xa Mát, huyện Tân Biên, tỉnh Tây Ninh.
2.2. Phương pháp nghiên cứu
2.2.1. Phương pháp tổng quan tài liệu
Thu thập những tài liệu nghiên cứu về thực vật thuộc họ Cà Phê (Rubiaceae Juss.)
Tham khảo các tài liệu cần thiết cho việc định danh, tìm hiểu công dụng các loài thuộc họ Cà Phê (Rubiaceae Juss.).
Tham khảo các tư liệu nghiên cứu về VQG Lò Gò – Xa Mát.
2.2.2. Phương pháp nghiên cứu ngoài thực địa 2.2.2.1. Xác định tuyến thực địa
Do đặc điểm sinh cảnh ở VQG Lò Gò – Xa Mát đa dạng từ vùng đất ngập nước đến các vùng cát khô, đồi gò cao và rừng ẩm nên việc chọn các tuyến thu mẫu điểm thu mẫu là rất cần thiết. Để thu mẫu một cách đầy đủ và đại diện cho vùng nghiên cứu,tuyến khảo sát phải xuyên qua các môi trường sống của thực vật. Trên các tuyến chọn ra những điểm chốt, tức là những điểm đặc trưng nhất để thu mẫu phục vụ cho nghiên cứu.
(Nguồn: VQG Lò Gò – Xa Mát)
Hình 2.2.Sơ đồ đường đi chính của các tuyến khảo sát Ghi chú: Đường đi chính của các tuyến khảo sát 2.2.2.2. Thu và xử lý mẫu
Dụng cụ thu mẫu cần chuẩn bị: túi polyetylen đựng mẫu, kéo cắt cây, giấy báo, dây buộc, nhãn kim chỉ, bút chì 2B, sổ ghi chép, cồn, máy ảnh, kính lúp, băng dính, GPS.
Nguyên tắc thu mẫu: mẫu phải có đủ các bộ phân của cây, nhất là cành, lá, hoa đối với cây lớn và cả quả càng tốt, đối với cây thân thảo thu cả cây. Mỗi cây thu từ 3-5 mẫu (có thể thu mẫu qua các thời gian khác nhau để bổ sung cho đầy đủ hoa, quả).
Cách thu mẫu: thu tất cả các mẫu thực vật trong phạm vi nghiên cứu, mỗi loài thu 3 – 5 mẫu. khi phát hiện loài nào thì tiến hành quan sát, mô tả, chụp ảnh các bộ phận của tất cả các mẫu thu được.
Đối với cây gỗ và cây bụi: dùng kéo cắt cây cắt cành dài 30cm, có từ 5 – 7 lá, có mang hoa và quả.
Đối với cây thân thảo: lấy cả cây có rễ và hoa, nếu mẫu dài thì gấp lại hình chữ z, nếu nhiều lá thì tỉa bớt lá.
Đối với cây bì sinh ta dùng dao cắt lấy một phần cây chủ [10].
2.2.3. Phương pháp ghi nhật kí
Khi thu mẫu, cần ghi chép ngay vào nhật ký thực địa những thông tin như địa điểm lấy mẫu, thời gian lấy mẫu, tọa độ thu mẫu, sinh cảnh lấy mẫu, đặc điểm dạng cây, kích thước cây, đặc điểm vỏ cây, cách mọc lá, tên địa phương, tên khoa học (nếu biết), công dụng theo dân gian và đặc biệt là các đặc điểm dễ mất sau khi mẫu sấy khô, ngâm tẩm như màu sắc của hoa, quả, nhựa mủ, mùi vị,…
2.2.4. Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm 2.2.4.1. Xử lý mẫu và bảo quản mẫu
Sau mỗi ngày thu mẫu đeo nhãn cho mỗi mẫu cần ghi: số hiệu mẫu, địa điểm, đặc điểm quan trọng, sinh cảnh, ngày lấy mẫu, người lấy mẫu. Nhãn có thể chỉ ghi số hiệu mẫu trước, ngay khi vừa thu mẫu ngoài thực địa còn các thông tin khác sẽ ghi chép vào phiếu mô tả và bổ sung các chi tiết còn lại vào nhãn.
Sau mỗi ngày thu mẫu về sẽ được xử lý ngay: sau khi đeo nhãn, mỗi mẫu đặt gọn trong một tờ bào lớn gấp 4 với kích thước 30x40 cm, vuốt ngay ngắn và chú ý mỗi mẫu phải có lá sấp, lá ngửa để có thể quan sát dễ dàng cả hai mặt lá mà không phải lật mẫu. Đối với hoa dùng mảnh báo nhỏ để ngăn cách chúng với các hoa khác hay lá bên cạnh để phòng khi sấy dễ bị dính vào các bộ phận khác của cây. Đối với quả to cần cắt thành lát theo hai hướng: cắt dọc và cắt ngang thành từng lát để thấy quả có bao nhiêu ô và các lát cắt đó phải có nhãn riêng và mang cùng số hiệu [10].
Cứ sau 5-6 mẫu nên chèn thêm một tấm cacton để tạo thông thoáng giúp cho mẫu chóng khô và không phải thay giấy báo hằng ngày. Cứ khoảng từ 20-25 mẫu thì cho vào một cặp mắt cáo rồi buộc chặt thành bó, phơi ra nắng hoặc cho vào tủ sấy để sấy khô.
Mẫu thu được không ép kịp trong ngày thì gói vào các tờ giấy báo và đổ cồn 70o cho thấm ướt các tờ giấy báo để làm mất tác dụng của các enzim gây rụng lá và mẫu không bị khô héo, hôm sau sẽ xử lý tiếp. Hoa, quả của những mẫu giống nhau cho
vào lọ nhỏ chứa foocmon 5% có ghi số hiệu mẫu để giữ lâu, dùng cho việc phân tích cấu tạo hoa, quả.
Sau khi sấy mẫu xong, tẩm độc mẫu để chống mốc và sâu mọt bằng dung dịch có thành phần cứ 20g HgCl2 pha 1 lít cồn 60 − 70o , ngâm mẫu khoảng 5−10 phút rồi vớt ra ép lại và sấy khô.
Làm tiêu bản khô: mẫu sau khi tẩm độc và sấy khô sẽ được đính lên giấy Crôki dày và cứng kích thước 28cm x 42cm rồi dùng chỉ cùng màu khâu các bộ phận lại. Các đường chỉ ở mặt dưới dùng giấy keo dai dán kín lại để khi chồng các mẫu lên nhau các mẫu không bị vướng làm hỏng mẫu phía dưới. Dùng súng bắn nhựa để cố định hoa, quả và lá để không bị rơi. Các phần dễ rơi thì cho vào túi giấy đính cùng tiêu bản. Sau đó, dán nhãn cho tiêu bản khô theo mẫu của phòng thí nghiệm Thực vật Khoa Sinh trường Đại học Sư phạm TP. HCM.
2.2.4.2. Mô tả và xác định tên khoa học
Sau khi sấy khô chúng ta có thể xác định tên khoa học ngay trước khi chưa tẩm thuốc chống côn trùng và nấm.
Dùng phương pháp hình thái so sánh để giám định tên thực vật. Đây là phương pháp kinh điển và phổ biến nhất trong việc giám định tên thực vật từ trước đến nay.
Tuy đơn giản hơn so với các phương pháp nghiên cứu khác, nhưng phương pháp hình thái so sánh thích hợp với điều kiện hiện nay của nước ta, lại dễ sử dụng, về mặt khoa học vẫn cho những kết quả đáng tin cậy. Tất cả các mẫu thu thập được giám định tên khoa học thông qua các tài liệu chuyên ngành như: Cẩm nang tra cứu và nhận biết các họ thực vật hạt kín ở Việt Nam của Nguyễn Tiến Bân (1997), Cây cỏ Việt Nam, quyển 3 của Phạm Hoàng Hộ (2000), Từ điển thực vật thông dụng của Võ Văn Chi (2003, 2004), Flora of China,Vol.19 (1999).
2.2.5. Xây dựng bản đồ phân bố
Dùng máy Garmin GPS 72 để ghi tọa độ tại vị trí có các loài thuộc họ Cà phê (Rubiaceae Juss.) hiện diện. Thể hiện các điểm ghi nhận lên bản đồ bằng cách sử dụng phần mềm Mapinfo 7.5.
2.3. Thời gian thu mẫu và địa điểm khảo sát
STT THỜI GIAN ĐỊA ĐIỂM KHẢO SÁT
1 12−15/2/2014 Vành đai Biên Giới, Cầu Thị Hằng (Lò Gò).
2 01−04/3/2014 Vành đai Biên Giới, trảng Bàu Nổ, chốt Nhà Sàn.
3 26−29/3/2014 Vành đai Biên Giới, Cầu Khỉ, Cầu Thị Hằng, Đaha.
4 09−13/5/2014 Khu vực Cầu Ván, Trảng Tăng, Trảng Miên Thui, khu Căn Cứ Chính phủ, chốt tiểu khu 4.
5 23−27/5/2014 Chốt Nhà Sàn, trảng Tân Thanh, trảng Bàu Nổ,Vành đai Biên Giới, khu Hành chánh.
6 26−30/6/2014 Đaha, Vành đai Biên Giới, Cầu Thị Hằng, trảng Bà Điếc.